CRISPR/CAS能够同时瞄准多个基因座(多重)的能力是改变植物育种的游戏规则。多路复用不仅会加速性格金字塔,而且还可以揭示功能冗余所隐藏的特征。此外,多路复用增强了基于DCAS的可编程基因表达,并实现了类似级联的基因调节。然而,包含串联阵列导向RNA(GRNA)的多重构建体的设计和组装需要无疤的克隆,并且由于存在重复序列而仍然很麻烦,从而阻碍了更广泛的使用。在这里,我们介绍了软件辅助克隆平台Goldenbraid(GB)的全面扩展,其中除了其多基因克隆软件之外,我们将新的工具集成了新的工具,用于基于IIS的易于且六个串联阵容的GRNA,使用Cas9和cas12a,使用GRNA-trees-trees-trees-crrna-crrrna-crrrna和crrrnna crrrnna crrrnna crrrnna crrrna carrna-crrrna crrrna cas12a。作为新工具的应力测试,我们组装并用于农杆菌介导的稳定转化A 17 cas9-grnas构造,靶向烟草中的Squamosa-promoter结合蛋白样(SPL)基因家族的子集。14个选定的基因是miR156的靶标,因此在少年到成年和营养至生殖相变中可能起重要作用。使用17个grnas构建体,我们生成了一组无Cas9的SPL编辑的T 1植物,该植物携带了多达9个双重突变,并显示出叶少年和更多的分支。GB4.0 Genome Edition纳入了新的基于Web的工具和随附的DNA零件集合,为植物基因组工程提供了多合一的开放平台。使用荧光素酶lyanum lycopersicum mtb促进剂或Agrobacterium tumefaciens Nopaline benthase prospermers inice inice inice Amamaine inice Amamaine in NiceAtient在NICAPASE中,NICAPASE PROSSITER in NICAPASE in NICAPASE in NICAPASE in NICAPASE in NICAPASE in NICAPASE in NICASIEN中,NICAIN中的使用单个和多重GRNA的GB组装DCAS9和基于DCAS12A的CRISPR/CAS激活剂和阻遏物使用单一和多路复用GRNA的功能。使用单个和多重GRNA的GB组装DCAS9和基于DCAS12A的CRISPR/CAS激活剂和阻遏物使用单一和多路复用GRNA的功能。