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具有 Cys-His-Asp 三联体的无金属 α/β-水解酶的超高通量定向进化为高效的磷酸三酯酶
摘要：寻找新的机制解决方案以应对生物催化挑战是酶进化适应以及设计新催化剂的关键。最近人造物质被释放到环境中，为观察生物催化创新提供了动态试验场。用作杀虫剂的磷酸三酯最近才被引入环境中，而它们并没有天然对应物。为了应对这一挑战，酶已迅速进化以水解磷酸三酯，并趋向于相同的机制解决方案，即需要二价阳离子作为催化的辅助因子。相比之下，先前发现的宏基因组混杂水解酶 P91（乙酰胆碱酯酶的同源物）实现了由金属独立的 Cys-His-Asp 三联体介导的缓慢磷酸三酯水解。在这里，我们通过对 P91 进行定向进化来探究这种新催化基序的可进化性。通过将聚焦库方法与液滴微流体的超高通量相结合，我们仅通过两轮进化就将 P91 的活性提高了约 360 倍（达到 ak cat / KM ≈ 7 × 10 5 M − 1 s − 1 ），可与自然进化的金属依赖性磷酸三酯酶的催化效率相媲美。与其同源物乙酰胆碱酯酶不同，P91 不会遭受自杀抑制；相反，快速的去磷酸化速率使共价加合物的形成而不是水解速率成为限制因素。定向进化改进了这一步骤，中间体的形成速度提高了 2 个数量级。将聚焦的组合库与液滴微流体的超高通量相结合，可以用于识别和增强自然界中尚未达到高效率的机制策略，从而产生具有新型催化机制的替代试剂。■ 简介
博士纳斯鲁·阿祖安·阿朗 - ftkma ump
期刊出版物 [1] MAA Roslin、N Ab Razak、NA Alang、N Sazali，（2023 年）。“低周疲劳载荷下 P91 钢的数值模拟”，《失效分析与预防杂志》，1-9。 [2] IU Ferdous、NA Alang、J Alias、AH Ahmad、S Mohd Nadzir，（2022 年）。“缺口约束影响下 91 级钢的断裂寿命和失效机理”，《失效分析与预防杂志》，1-14 [3] J Alias、NA Alang、AH Ahmad、NA Razak，（2022 年）。“碳钢管法兰部件的失效分析”，《失效分析与预防杂志》，1-7 [4] N Ab Razak、SNA Rosli、NA Alang，（2022 年）。 “用于预测未焊接和焊接 P91 钢的蠕变寿命的 Larson Miller 参数”，国际综合工程杂志 14 (8), 101-111
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