基于 mRNA 的疗法不同于小分子和其他生物制剂,它们代表着重大的分析挑战。为了在竞争激烈的市场中竞争并符合监管标准,需要对临床前/临床测试和批次放行进行 mRNA 表征。更快、更可靠的结果需要创新的解决方案来应对这些分析挑战。核酸浓度测定是通过测定 260 nm 分析波长下的紫外 (UV) 吸光度来测量的。这些吸光度测量允许科学家根据已知的 RNA 消光系数来测量核酸浓度。它们在 260 nm 处的最大吸光度峰的光谱特征与核酸浓度成正比。这种紫外核酸定量方法的优点是简单、直接,并且只需要少量样品即可进行测量。然而,分析实验室遇到的一个挑战是其特异性的局限性,因为吸收相似波长的基质成分会导致随后的核酸浓度测定不准确。我们观察到,当前传统的基于比色皿的 UV 解决方案中使用 1 cm 比色皿和/或较小固定光程长度的标准固定光程长度 UV 仍然无法解决给定测量的质量问题,并且需要数小时的调查时间。使用稀释因子(这会增加制备时间和变异性)和固定光程长度测量来确定溶液中 UV 发色团的浓度,并不能提供一种可在公司或流程内平台化的易于转移且可靠的方法。如今,研究人员可以在存在化学和核酸杂质(尤其是 DNA 和 dsRNA)的情况下选择性地量化核酸吸光度。分析软件使用全光谱数据和高级算法来识别核酸杂质并提供校正的核酸浓度。
注意:样品的核酸浓度是通过其在 260 nm 处的紫外吸光度计算得出的,其中吸光度 1(1 cm 光程长度)相当于 50 μL DNA/mL。RNA、蛋白质、盐、乙醇或其他非核酸污染物的污染会导致 260 nm 处的总吸光度增加,因此会导致对真实 DNA 浓度的估计过高。使用紫外光谱测量时,A260/A280 比率在 1.80–1.90 之间且 A260/A230 >1.8 表示纯 DNA。A260/A280 和 A260/230 比率高于 2.0 表示 RNA 污染。相反,A260/A280 比率低于 1.8 表示蛋白质污染。此外,较低的 A260 / A230 比率表明存在腐殖酸以及蛋白质、糖、乙醇、盐和其他污染物,这些污染物可能会抑制后续的酶促反应。
研究了湍流引起的亚音速、超音速和高超音速边界层的气动光学畸变特性。使用了四个边界层的直接数值模拟 (DNS) 数据,这些边界层的标称马赫数范围从 0.5 到 8。亚音速和超音速边界层的 DNS 数据是平板流。两个高超音速边界层均来自入口条件为 8 马赫的流动,其中一个是平板流,另一个是尖锥上的边界层。这些数据集中的密度场被转换为折射率场,这些折射率场沿预期的光束路径积分,以确定光束穿过湍流场的折射时将经历的有效光程长度。然后,通过考虑与体边界层效应相关的平均路径长度和倾斜问题,确定光程差 ( ) 的分布。将 的均方根与现有模型进行比较。发现从亚音速和超音速数据确定的 值与现有模型非常匹配。可以预料的是,由于在模型推导过程中做出了强雷诺类比等假设,高超音速数据匹配得并不好。到目前为止,该模型从未与本文中包含的马赫数如此之高的流动或流过尖锥几何的流动进行比较。
摘要:本文研制了一种手掌大小的激光光谱仪,该光谱仪基于可调谐二极管激光吸收光谱 (TDLAS) 和新型双层环形电池,用于检测痕量气体。得益于自制电子系统和紧凑光学设计,传感器的物理尺寸最小化为 24×15×16 cm 3 。环形吸收电池分为 2 层,共有 84 个反射,有效光程长度为 8.35 m,用于增强气体的吸收信号。设计了自制电子系统,用于实现分布式反馈 (DFB) 二极管激光控制器、模拟锁相放大器、数据采集和通信。采用免校准扫描波长调制光谱法来确定气体浓度,并减少电子噪声和机械振动引起的随机波动。使用 1.653 μm 的 DFB 激光器演示了对环境空气中 CH 4 的测量。混合气体更新的上升时间和下降时间分别约为16 s和14 s。为验证光谱仪的性能,进行了振动和温度试验,在不同振动频率和温度下对20 ppm CH 4 测定的标准偏差分别为0.38 ppm和0.11 ppm。根据Allan偏差分析,在积分时间为57.8 s时,CH 4 的最低检测限可达22 ppb。
将柱子转移到新的 DNA 和/或 RNA 洗脱管(已提供)中。向膜柱中心添加 100 μL 无 RNAse 的水,等待 1 分钟,然后以最大速度离心 1 分钟。RNA/DNA 样本现在可以用于下游应用了。注意:用 100 μL 无 RNAse 的水洗脱将最大程度地提高核酸的产量。为了获得更浓缩的样品,至少可以使用 50 μL 无 RNAse 的水。注意:样品的核酸浓度是通过其在 260 nm 下的紫外吸光度计算的,其中吸光度 1(1 cm 光程长度)相当于 50 μL DNA/mL。RNA、蛋白质、盐、乙醇、腐殖酸或其他非核酸污染物的污染会导致 260 nm 下的总吸收,因此导致对真实 DNA 浓度的估计过高。使用紫外光谱法测量时,A260/A280 比率在 1.80–1.90 之间且 A260/A230 >1.8 表示纯 DNA。A260/A280 和 A260/230 比率高于 2.0 表示 RNA 污染。相反,A260/A280 比率低于 1.8 表示蛋白质污染。此外,较低的 A260/A230 比率表示存在腐殖酸以及蛋白质、糖类、乙醇、盐和其他可能抑制后续酶促反应的污染物。