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PHF5A有助于维持癌症茎...
摘要。目标。癌症干细胞（CSLC）与肿瘤复发，转移和耐药性密切相关。PHD指域蛋白5A（PHF5A）与非小细胞肺癌（NSCLC）的肿瘤发生和发展有关。PHF5A在NSCLC CSLC中的作用和调节机制尚不清楚。这项研究旨在确定CSLC的生物学特征以及PHF5A在维持NSCLC中的作用。方法。H1299-SPHERES和A549-SPHERE通过流式细胞仪通过肿瘤组形成测定和CSLC获得。使用免疫荧光染色，qRT-PCR和Western印刷物测试了CD133，E-钙粘蛋白1，E-钙粘蛋白，波形蛋白，PHF5A和组蛋白脱乙酰基酶8（HDAC8）的表达。CCK-8和Transwell分析来确定NSCLC中CSLC和粘附单层细胞的增殖，迁移和侵袭能力。我们调节CSLC中的PHF5A表达和HDAC活性，以探索NSCLC组织中靶蛋白的PHF5A在Stemness维持中的机理。结果。与单层细胞相比，CSLCs对顺铂介导的抑制，迁移和侵袭的抑制作用以及pHF5A和HDAC8的高表达降低，并伴有EMT标记的改变。NSCLC CSLC中PHF5A的靶向敲低导致茎表型和HDAC8表达降低，而HDAC活性的抑制会影响Stemness的维持。此外，靶蛋白的表达在NSCLC组织中显示出一致的变化。结论。与单层细胞相比，NSCLC的癌症样表型特性发生了变化，PHF5A参与了CSLC的干性维持，并且此过程可能与HDAC8的激活有关。
一场革命：使用诱导的多能干细胞研究视网膜色素上皮的疾病
黄斑疾病是西方世界视力丧失的主要原因之一。仅在英国，将近150万人患有这些毁灭性疾病，这些疾病主要影响黄斑，这是视网膜中的一个造成详细中央愿景的地区。在许多患者中，可归因于衰老或遗传突变的细胞变化与视网膜色素上皮（RPE）有关，这是一种维持和支持光敏感视网膜的单层细胞。在没有功能性RPE的情况下，视网膜被损坏并视力恶化。目前，这些疾病没有治疗方法。在过去的二十年中，诱导的多能干细胞彻底改变了我们对视网膜疾病的研究，使研究人员能够在菜肴中产生以前无法接近的RPE细胞。从患者中重新创建这些细胞的能力已提供了新的模型系统，以了解疾病背后的机制，并加速新疗法以治疗视力丧失。
CLDN1 敲除角质形成细胞作为研究多种皮肤病的模型
图 2 CLDN1 敲除会降低 N/TERT-2G 单层细胞和器官型细胞浸没培养物中的屏障完整性。浸没单层细胞培养物在高 Ca 2 + 培养基中分化。通过 (A) 分化后 5 天内每天的跨上皮电阻 (TEER) 或 (B) 分化后 1、2 和 3 天的通透性测定来量化屏障功能。WT、pCLDN1 KO 和 A8 克隆细胞用于开发器官型培养物，并且 (C) 在提升到气液界面 10 天后测量电阻抗。-gRNA、pCLDN1 KO n = 4 个实验（A、B）。B6、A8、H1 克隆 n = 3 个实验和 D5 克隆 n = 1 个实验（A、B）。n = 3-9 个来自三个实验的总构建体，不同的符号代表各个实验（C）。通过配对 t 检验 (A、B) 或 ANOVA (A、B、C) 评估与相关 WT 对照的统计差异。数据以平均值 ± SEM 表示。 * p < 0.05，** p < 0.01。
IPSC重新编程的自动有效解决方案
使用标准制造商的建议制备了200μm的单层细胞阵列。用1％Geltrex™涂有6孔板的单个孔和CellRaft阵列（Gibco™Cat。编号A1413301）在37°C下过夜，准备细胞播种。在电穿孔之前，将成纤维细胞培养基分配到每个井/储层中。电穿孔后立即将电穿孔的成纤维细胞重悬于1ML的成纤维细胞培养基中，然后再滴入预先涂层的6孔板和蜂窝阵列中。在第一天，成纤维细胞培养基被补充的N2B27培养基取代，该培养基补充了新鲜的基本成纤维细胞生长因子（BFGF）（Thermo Scientific Cat。编号phg0264）。从D1-D15中，使用补充新鲜BFGF的N2B27培养基每隔一天进行一次完整的培养基变化。在D16上，N2B27培养基被Essential 8™培养基取代（Gibco Cat。编号A1517001），将细胞培养为IPSC。
表皮生长因子增强的新型转化生长因子：从非肿瘤组织中分离
摘要 表皮生长因子 (EGF) 可诱导非肿瘤大鼠肾成纤维细胞在细胞培养中发生转化表型，这些转化表型是从成年小鼠的许多非肿瘤组织（包括颌下腺、肾脏、肝脏、肌肉、心脏和大脑）中分离出来的。它们与之前描述的从肿瘤细胞中分离出来的转化生长因子 (TGF) 类似，具体如下：它们可通过酸/乙醇提取，并且是酸稳定的低分子量 (6000-10,000) 多肽，需要二硫键才能起作用，并且它们会导致非肿瘤指示细胞的锚定非依赖性生长，而这些细胞在没有它们的情况下不会在软琼脂中生长。从雄性小鼠的颌下腺中对这些 TGF 进行部分纯化，结果表明它们不同于 EGF。与之前描述的细胞外 TGF 不同，但与来自肿瘤细胞的某些细胞 TGF 一样，它们通过 EGF 增强其促进锚定非依赖性生长的能力。颌下腺 TGF 蛋白的等电点接近中性。在 Bio-Gel P-30 上进行色谱分析，然后进行高压液相色谱分析，总纯化率达到 22,000 倍。在 EGF 存在下进行测定时，最纯化的蛋白质在 1 ng/ml 的软琼脂中具有诱导生长的活性。这些数据进一步证明了肿瘤形成可能是由非肿瘤生化过程的定量而非定性改变引起的。我们最近描述了 (1) 从几种肿瘤小鼠组织（包括由莫洛尼肉瘤病毒 (MSV) 转化的成纤维细胞和最初由化学致癌物诱导的可移植膀胱癌）中分离和表征一组低分子量、酸稳定性多肽（称为转化生长因子 (TGF)）。这些多肽是可通过酸/乙醇提取的细胞内蛋白质。类似的细胞外转化多肽，称为肉瘤生长因子 (SGF)，是由 De Larco 和 Todaro (2) 从培养的 MSV 转化小鼠成纤维细胞的条件培养基中首次分离出来的。最近报道了几种其他细胞外转化多肽，它们来源于人类 (3) 和动物 (4) 来源的肿瘤细胞。所有这些多肽在应用于培养的未转化、非肿瘤指示细胞时都会引起以下一系列变化，这些变化为 TGF 提供了一个操作性定义：(i) 单层细胞密度依赖性生长抑制的丧失；(ii) 单层细胞过度生长；(iii) 细胞形状改变，导致指示细胞呈现肿瘤表型；(iv) 获得锚定独立性，从而能够在软琼脂中生长。未转化的非肿瘤细胞不会在软琼脂中形成逐渐生长的菌落，并且培养细胞的这种不依赖锚定的生长特性与体内肿瘤的生长具有特别高的相关性（5-7）。
利用 3D 肠组织模型研究脂质纳米粒子介导的基因组编辑蛋白质递送
脂质纳米颗粒是口服药物输送的有前途的载体。对于具有细胞内靶标的生物活性货物，例如基因编辑蛋白，货物和载体在穿过肠上皮层后保持复合状态至关重要，以便输送系统将货物运送到目标细胞内。然而，在验证货物/载体纳米复合物的完整性及其在纳米复合物穿过上皮屏障后促进货物在细胞内输送的能力方面，研究有限。在此，我们使用了传统的 2D 转小室系统和最近开发的 3D 组织工程肠模型，并证明了合成的脂质纳米颗粒（载体）和蛋白质（货物）纳米复合物能够穿过上皮层并将蛋白质货物运送到下面的细胞内。我们发现 EC16-63 LNP 可有效包裹 GFP-Cre 重组酶，通过暂时中断上皮层之间的紧密连接，在 2D 细胞培养和 3D 组织模型中均能穿透肠单层细胞。在穿过肠上皮后，EC16-63 和 GFP-Cre 重组酶纳米复合物可进入下层细胞，诱导基因重组。这些结果表明，体外 3D 肠组织模型可用于鉴定可用于潜在口服药物递送的有效脂质纳米颗粒。
靶向代谢通量可逆转卵巢癌的转移性转变
上皮性卵巢癌进展过程中的球体形成与腹膜器官定植、疾病复发和不良预后相关。尽管已证明癌症进展与转化细胞内的代谢变化有关并受其驱动，但代谢动力学与转移性形态转变之间的可能关联仍未被探索。为了解决这个问题，我们进行了定量蛋白质组学研究，以确定与高级别浆液性卵巢癌系 OVCAR-3 的三种不同形态（2D 单层和两种几何上独立的三维球体状态）相关的蛋白质特征。将蛋白质状态整合到基因组规模的代谢模型中，使我们能够为 OVCAR-3 细胞系的每个形态阶段构建特定于上下文的代谢模型，并系统地评估它们的代谢功能。我们利用这些模型获得了驱动疾病的代谢反应模块，并阐明了基因敲除策略以减少与疾病进展相关的代谢改变。我们探索了 DrugBank 数据库以挖掘药剂，并评估了药物在抑制癌症进展方面的作用。最后，我们通过实验验证了我们的预测，证实了我们预测的药物之一：神经氨酸酶抑制剂奥司他韦能够破坏转移性球状形态，而不会对未转化的基质间皮单层细胞产生任何细胞毒性作用。
食品科学和保健食品
方法论和理论方向：已进行体外、体内和人体临床试验，以评估 ABB C1 对训练免疫力、保护肠道屏障功能和增强疫苗接种效果的影响。体外研究侧重于评估在没有或存在 ABB C1 的情况下 TEER 作为肠道屏障功能的测量。体内研究评估了 ABB C1 刺激小鼠外周血单核细胞、白细胞和腹膜巨噬细胞吞噬的能力，并与已知 β-葡聚糖的阴性对照和两个阳性对照（n = 10 只小鼠/组）进行了比较。这项随机和安慰剂对照临床研究招募了 70 名患者，他们接种了流感疫苗或 Covid-19 疫苗，并补充了 30 天的 ABB C1 或安慰剂。评估了对疫苗接种的免疫反应，以及临床状态和 ABB C1 的安全性和耐受性。发现：ABB C1 在单层细胞自发形成 3 周后，TEER 有所增加，同时在受到大肠杆菌攻击时，上皮细胞不会受到破坏。与对照组相比，ABB C1 显著刺激了吞噬作用，与阳性对照相比，效果更佳。一项人体临床研究发现，ABB C1 是安全的，它改善了对流感和 Covid-19 疫苗的免疫反应、循环中硒和锌的水平，并加速了疫苗接种后抗体的产生。