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多能干细胞 (PSC) 是现成免疫疗法中同种异体 T 细胞的有希望的来源。然而,分化基因工程 PSC 以产生成熟 T 细胞的过程需要去除对这些细胞的选择至关重要的相同分子元素,以防止同种反应。我们在这里展示了抗原限制性成熟 T 细胞可以在体外从通过 CRISPR 编辑的 PSC 中产生,这些 PSC 缺乏内源性 T 细胞受体 (TCR) 和 I 类主要组织相容性复合体。具体来说,我们使用了来自表达单个 TCR 的 RAG1 −/− RAG2 − /− B2M − /− 人类 PSC 的 T 细胞前体,以及提供同源人类主要组织相容性复合体分子和其他关键 T 细胞成熟信号的小鼠基质细胞系。可能由于没有 TCR 错配,产生的 T 细胞在小鼠中表现出比具有完整内源性 TCR 的 T 细胞更好的肿瘤控制。将 T 细胞选择成分引入 PSC 的基质微环境克服了与从同种异体 PSC 开发 T 细胞免疫疗法相关的固有生物学挑战。
摘要:GAS5基因编码长的非编码RNA(lncRNA)和内含子内部的小核仁RNA(SNORNA)。已经彻底研究了其在哺乳动物细胞中的结构,剪接变体和各种功能。但是,仍然没有关于人类细胞中汽油5成功敲除的数据,大多数功能丧失实验利用标准技术产生敲低。通过使用CRISPR/CAS9在末端内含子盒C/D SNORNA基因(SNORD S)中引入双链断裂,我们创建了在其中一个GAS5等位基因中带有连续缺失的单克隆细胞系。评估了GAS5编码的Box C/D SNORNAS和LNCRNA GAS5的水平,并分析了新型剪接变体的形成。为了全面评估特异性SNORD突变的影响,获得了SNORD74和SNORD81中各个突变的人类细胞系。SNORD74中的特定突变导致所有GAS5编码的SNORD和GAS5 lncRNA的下调。进一步的分析表明,SNORD74包含一个特定的调节元件,该元件调节了GAS5前体转录物的成熟。结果表明,气体的成熟以SNORD依赖性方式通过M6A相关的途径发生,这是一种非常有趣的表面转录机制。
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