我们都读过或听说过与模型铁路有关的“调车场”。调车场只不过是另一种形式的集散场,尽管其物理构成和操作可能非常不同。调车场的目的类似于集散场,是为了能够将车厢或整列火车移入或移出您的布局,以代表前往未建模位置的收益设备或从遥远的地方接收车厢。我在各种布局上看到的大多数调车场都是将车厢发送到布局上的指定区域。然后通过 0-5-0 方法将它们物理移除,并更换一组新的车厢,前往布局上的各个位置和行业。好的,现在我们对调车场有了很好的了解,让我们看看这个重要的操作功能是如何设计和构建的,以满足我的 Hill Valley 铁路的运营需求。
[研究背景]基因组编辑是一种使用特殊的DNA结合蛋白来自由重写含有遗传信息的DNA的技术。预计将来将用于基因治疗。但是,现有的基因组编辑蛋白CAS9有问题,例如编辑所需的时间和非目标DNA序列的编辑不正确。在考虑对基因治疗的应用时,误用DNA是致命的。因此,需要快速准确的基因组编辑蛋白的发展。 [研究结果]研究小组先前使用单个分子荧光显微镜进行了研究,重点是“滑动”,该显微镜以滑动方式移动DNA结合蛋白。而且,现有的基因组编辑蛋白Cas9是一种DNA结合蛋白,但已知它不会滑动。如果CAS9可以滑过DNA,它将能够快速定位目标DNA并允许快速编辑目标DNA。此外,当它与非目标DNA结合时,Cas9会误导其DNA序列,但通过快速将其移动到DNA上,它可以防止误用。 考虑到以上,在这项研究中,我们设计了两种修改CAS9的方法,以便它可以在DNA上移动,并使用DNA比对固定技术“ DNA Garden”和单个分子荧光显微镜进行了验证。首先,我们认为CAS9的氨基酸与DNA密切结合,抑制滑动,因此我们用另一种氨基酸代替了这些氨基酸。结果表明,在没有引导RNA的情况下,在没有引导RNA的情况下,修饰的CAS9的滑动最多可促进15次。 接下来,当我们从DNA结合蛋白NHP6A中移植了一个增强的位点时,我们发现,在没有引导RNA的情况下,在没有引导RNA的情况下,最多可促进修饰的Cas9的滑动,最多可促进5次(图A)。该植入部位与DNA结合并松开Cas9和DNA之间的结合,这被认为可以促进Cas9幻灯片(图B)。从上面,我们成功修改了CAS9,以便可以在DNA上滑动。预计修改后的CAS9将在基因组编辑中使用,例如将来的基因疗法。
