时同步

使用CRISPR

染色体隔离需要在动型蛋白复合物和有丝分裂纺锤体之间进行协调，这对于两个子细胞之间的遗传分裂至关重要。动力学是一种蛋白质复合物，位于姐妹染色单体的丝粒上。在有丝分裂过程中，观察到的动物学实际上将姐妹染色质朝着用有丝分裂纺锤体的指南伸向细胞的相反两极。有人提出，stu1是一种小动物络合物中的小蛋白，有助于延迟酿酒酵母的萌芽酵母中的后期，直到每个染色体都附着在有丝分裂的纺锤体上。也有人建议Stu1与纺锤体相互作用，并在拉长时同步移动。已经提出，磷酸化可以调节Stu1的功能，并且熔体是其他动力学蛋白中已知的磷酸化位点，因此，在称为sTu1上的称为熔融基序的磷酸化位点上除去苏氨酸氨基酸在Stu1上的磷酸化位点可能会影响姐妹染色体的能力，这可能会导致姐姐的正确性，这可能会使YEAST YEAST降低。熔体是真菌中保存良好的序列，是其他动力学蛋白中的已知磷酸化位点，是STU1的同源物。利用CRISPR-CAS9酶，我们将在发芽的酵母菌Stu1基因中引入磷酸无效突变，以用熔体序列替代苏氨酸719密码子。到目前为止，我们已经成功克隆了含有引导RNA和Cas9酶基因的质粒。我们假设该突变将在Stu1中产生故障，这可能会阻碍其协调纺锤体和动孔附着的能力，并在有丝分裂过程中完全防止染色体分离。下一步将是用质粒和我们的模板DNA转化酵母，该模板DNA代码在Stu1中的719密码子上编码Valine，这种组合将完全激活酵母中的CRISPR CAS CAS 9基因组编辑系统。