添加到1.5毫升管中。血液:在13,000rpm处离心血液样本约1分钟(到颗粒样品)。用牙签从乙醇中取出样品,然后将其印迹到组织中。几乎干燥后,将牙签转移到1.5ml管中,然后摇晃以脱落血液。取出牙签并放入消毒剂中。拭子:乙醇干燥并放入1.5毫升管中。从交换的末端扣下来,以便盖子可以关闭。羽毛:将1-3羽羽毛的鱿鱼切成小块,在无菌玻璃板上用无菌剃刀刀片切成小块,然后再添加到管中。如果羽毛很小并且尖端上存在血斑,则可以添加羽毛。
isaamlic。以氯仿和等质醇混合物的含量和苯酚体积的一半和一半的量子和一半。.ex:对于5个样品,等分试样2 ml苯酚(1,250 +备用)和等分试样5 ml Isoamlic混合物 +氯仿(200μLISO +4800μL氯仿)。7。等分试样500μL(有时是样品数量)异丙醇酒精。8。移液器250μl苯酚,然后250μl氯仿 +同含同生醇。通过反转摇动。9。摇动30分钟(75速),然后以最高速度离心5分钟。10。小心地卸下上清液(〜400μl),请勿卸下所有内容,以免删除界面。11。与上一步一样,加入400μl氯仿混合物 +同醇酒精,然后通过反转和离心摇动。12。编程4°C的离心机13。卸下上清液,加入500μl异丙醇,通过反转均匀,以13000 g至15分钟的离心液均匀。14。为离心机编程室温。15。删除上清液,请注意不要去除颗粒,加入1毫升的70%乙醇,通过观察颗粒和离心剂在室温下5分钟到13000 g,一两次均质。16。除霜超纯水。17。除去所有酒精,然后将其干燥约15分钟,然后将沉淀物重新降低150μl的超纯水。在冰箱中过夜,第二天将其保持-20°C
与研磨过程。我通常更喜欢类似于水稻颗粒的沉淀尺寸,无论是冷冻的还是新鲜的。我去除了多余的液体,因为它使磨石变得困难(藻类倾向于漂浮!)。我检查了显微镜下的样品,以评估磨削的进展,并观察CTAB溶液的绿色。通常,我将每个样品磨碎大约一分钟。•或者,您可以使用自动涡流适配器(例如Mobio)同时处理多个样本。沉淀后,将二氧化硅砂和细胞与CTAB放在管中。让其在架子上站立5分钟,然后将其转移到热块20分钟。如果CTAB缓冲区在此步骤之后没有变成绿色,请重复涡旋过程。一般规则,尤其是在仅氯仿提取物中,添加更多的组织可以产生更多的DNA到一定点,但它还增加了样品中污垢或杂质的量。DNA中的残基可以氧化样品,从而导致降解,并且可能会干扰下游应用中使用的酶。因此,必须在所用的组织量与提取的DNA质量之间找到适当的平衡,以确保在进一步的实验中获得可靠的结果。
摘要。高质量基因组DNA(GDNA)的分离是植物分子生物学中的一种关键技术。GDNA的质量决定了实时聚合酶链反应(PCR)分析的可靠性。在本文中,我们报告了针对各种植物物种中实时PCR优化的高质量GDNA提取方案。在96孔块中执行,我们的协议提供了高吞吐量。不需要苯酚 - 氯仿和液氮或干冰,我们的方案比传统的DNA提取方法更安全,更具成本效益。该方法需要10毫克的叶片组织才能获得5-10μg高质量的GDNA。光谱测量和电泳用于证明GDNA纯度。提取的DNA在限制酶消化法和常规PCR中有资格。实时PCR扩增足以以非常低浓度(3 pg/μl)检测GDNA。我们的无苯酚 - 氯仿方案的GDNA稀释液标准曲线显示出比苯酚 - 氯仿方案更好的线性(R 2 = 0.9967)(R 2 =
非外科牙髓治疗是一种可预测的程序,具有出色的长期预后和97%的牙齿保留率1。在大多数情况下,牙髓治疗的失败是微生物在根管系统的顶端部分持续存在的结果,即使在牙齿良好的牙齿2中也是如此。当根管治疗未成功时,请指出非手术牙髓疗程,根尖手术或提取。在72个月后接受非手术性牙髓疗程的牙齿的存活率为85%,48个月后86.8%,在24个月3个月后90%。牙髓疗程的成功取决于去除现有的闭合材料,以便对根管系统进行消毒,以提供对周围愈合1的环境1。在撤退程序中,临床医生必须在确定(WL)确定之前从先前填充的根管中去除填充材料。因此,建立或重新建立或重新建立顶端通畅是有利的。
2.3.3 通过二氯甲烷氢氟化生产 HFC-32 的过程中 HFC-23 的电子氟化 ...................................................................................................................................... 44 2.3.4 烷烃的电子氟化和 HFC-23 的副产品 ............................................................................................................................. 45 2.3.5 在生产受控物质过程中产生 HFC-23 副产品的其他可能途径 ............................................................................................. 46 2.3.6 HFC-125 工厂的 CFC-113、CFC-114、CFC-115 副产品 ............................................................................................. 46 2.4 生产附件 A 至 F 所列物质的中间体 ............................................................................................................. 48 2.5生产排放及其减缓措施 ................................................................................................................ 50 2.5.1 产品、联产品、中间体和原料的排放 ................................................................................ 50 2.5.2 不需要的副产品的排放 ................................................................................................ 51 2.5.3 排放监测 ................................................................................................................ 51 2.5.4 排放报告 ................................................................................................................ 52 2.5.5 生产、分销和用作受控物质原料的排放因子 ............................................................. 52 2.5.6 生产、分销和原料使用过程中受控物质的估算排放量 ............................................................. 57 2.6 受控物质的库存 ................................................................................................................ 58 2.7 与化学工业部门相关的一些问题 .............................................................................................. 58 2.7.1 非法贸易 ...................................................................................................................... 58 2.7.2 专利 ............................................................................................................................. 59 2.7.3 向低全球升温潜能值 HCFO 和 HFO 过渡过程中的生产和化学品供应问题 ............................................................................................................. 60 2.7.4 PFAS 和 TFA 前体物质 ............................................................................................................. 60 2.8 四氯化碳 ............................................................................................................................. 63 2.8.1 摘要 ............................................................................................................................. 63 2.8.2 引言........................................................................................... 64 2.8.3 CTC 生产路线 .............................................................................................. 64 2.8.4 CTC 生产和排放 ........................................................................................................ 66 2.8.5 四氯化碳的运输 .......................................................................................................... 70 2.8.6 四氯化碳作为原料的前景 .......................................................................................... 71 2.8.7 四氯化碳的其他来源:乙烯基链 ...................................................................................... 71 2.9 CFC-11 生产的最新情况 ............................................................................................. 72 2.10 极短寿命物质 ............................................................................................................. 73 2.10.1 摘要 ...................................................................................................................... 74 2.10.2 极短寿命物质(VSLS)的背景 ............................................................................. 75 2.10.3 二氯甲烷(DCM)和氯仿(CFM)的生产和使用 ................ ... 2.10.4 二氯甲烷 ...................................................................................................... 78 2.10.5 氯仿 .............................................................................................................. 82 2.10.6 关于二氯甲烷和氯仿的结论 ............................................................................ 83 2.10.7 二氯乙烯 (EDC) ...................................................................................................... 84 2.10.8 三氯乙烯 (TCE) ...................................................................................................... 85 2.10.9 全氯乙烯 (PCE) ...................................................................................................... 86 2.11 对第 XXIX/12 号决定的回应:未列入附件 F 的 HFC S ............................................................. 91 2.11.1 编制附件 F 中的 HFC S 清单 ................................................................................ 92 2.11.2 未列入附件 F 的 HFC S..................................................................................... 93.................................................................................................. 78 2.10.5 氯仿 ................................................................................................................ 82 2.10.6 关于二氯甲烷和氯仿的结论 ................................................................................ 83 2.10.7 二氯化乙烯 (EDC) ...................................................................................................... 84 2.10.8 三氯乙烯 (TCE) ...................................................................................................... 85 2.10.9 全氯乙烯 (PCE) ...................................................................................................... 86 2.11 对第 XXIX/12 号决定的回应:未列入附件 F 的 HFC S ............................................................. 91 2.11.1 编制附件 F 中的 HFC S 清单 ................................................................................ 92 2.11.2 未列入附件 F 的 HFC S ................................................................................ 93.................................................................................................. 78 2.10.5 氯仿 ................................................................................................................ 82 2.10.6 关于二氯甲烷和氯仿的结论 ................................................................................ 83 2.10.7 二氯化乙烯 (EDC) ...................................................................................................... 84 2.10.8 三氯乙烯 (TCE) ...................................................................................................... 85 2.10.9 全氯乙烯 (PCE) ...................................................................................................... 86 2.11 对第 XXIX/12 号决定的回应:未列入附件 F 的 HFC S ............................................................. 91 2.11.1 编制附件 F 中的 HFC S 清单 ................................................................................ 92 2.11.2 未列入附件 F 的 HFC S ................................................................................ 93