。CC-BY 4.0 国际许可,根据 未经同行评审认证)是作者/资助者,他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是此预印本的版权持有者(此版本于 2020 年 4 月 29 日发布。;https://doi.org/10.1101/2020.04.29.067934 doi:bioRxiv 预印本
。CC-BY 4.0 国际许可证下可用(未经同行评审认证)是作者/资助者,他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是此预印本的版权持有者此版本于 2023 年 8 月 15 日发布。;https://doi.org/10.1101/2023.08.14.553172 doi:bioRxiv 预印本
按蚊属、伊蚊属和库蚊属的蚊媒传播多种医学上重要的病原体。目前的病媒控制工具已达到其有效性的极限,因此需要引入创新的病媒控制技术。RNAi 有助于在实验室中对蚊子基因进行功能表征,有朝一日可以作为一种新的病媒控制方法。最近在向蚊子提供物种特异性干扰 RNA 杀虫剂的微生物口服系统方面取得的进展可能有助于将该技术转化为实际应用。口服 RNAi 杀虫剂代表了一类新型生物合理杀虫剂,可以对抗全球杀虫剂抗药性发病率的上升,有朝一日可能成为综合人类疾病媒介蚊子控制计划的重要组成部分。
淡色库蚊复合体分布广泛,导致蚊媒疾病在人类中的传播难以预防。使用 CRISPR/Cas9 基因编辑是一种有效的技术,有可能解决日益严重的蚊媒疾病问题。本研究利用 ReMOT 控制技术在淡色库蚊中生产转基因蚊子。通过注射 60 只成年雌蚊建立了显微注射系统——需 14 µ l 注射混合物,使用≤1 µ l 的内体释放试剂(氯喹或皂苷)不会发生沉淀。在采血后 24 小时(卵黄发生高峰期)注射 P2C 增强型绿色荧光蛋白-Cas9(P2C-EGFP-Cas9)核糖核蛋白复合物进入卵巢的效率为 100%。利用此方法进行KMO敲除,我们发现当通过ReMOT Control将P2C-Cas9 RNP复合物注射到淡色库蚊成年血淋巴中时,卵巢中也能发生基因编辑。在氯喹组,筛选出的2,251只G 0 子代中,9只个体表现出白眼和马赛克眼表型。在皂苷组,筛选出的2,462只G 0 子代中,观察到8只突变个体。测序结果显示13 bp的缺失,进一步证实了发生基因编辑的事实。总之,ReMOT Control在淡色库蚊中的成功应用,不仅为该方法提供了基本参数(注射参数和注射时间),而且有利于蚊虫生物学和防治的研究。