第一单元 遗传工程简介。DNA、RNA 和蛋白质分析方法:琼脂糖凝胶电泳、Southern 和 Northern 印迹技术、点印迹、SDS-PAGE 和 Western 印迹。DNA 修饰酶及其应用:限制酶、DNA 聚合酶。末端脱氧核苷酸转移酶、激酶和磷酸酶以及 DNA 连接酶。第二单元 聚合酶链式反应。C-DNA 合成和克隆:mRNA 富集、逆转录、接头、衔接子、平端连接、同聚物加尾。基因组和 cDNA 文库:制备和用途、基因组测序。DNA 测序:传统和自动测序。
目的:该标准参考材料 (SRM) 用于人类基因组脱氧核糖核酸 (DNA) 定量材料的值分配,主要用于定量聚合酶链式反应 (qPCR)。注意:有关可识别的私人信息,请参阅第 2 页的“使用和隐私协议”。描述:一个 SRM 2372a 单位包含三种特征明确的人类基因组 DNA 材料,溶于 pH 8.0 水性缓冲液中。这些成分来自人类白膜样本,标记为 A、B 和 C。成分 A 包含来自单个男性供体的基因组 DNA。成分 B 包含来自单个女性供体的基因组 DNA。成分 C 包含基因组 DNA 的重量混合物(1 份男性供体和 3 份女性供体)。一个 SRM 单位包含每个成分一个 0.5 mL 无菌小瓶,每瓶约含有 50 µL DNA 溶液。每个小瓶都贴有标签,并用彩色编码的螺帽密封。认证值:认证值列于下表。这些认证值是根据 8 条染色体上的 10 个独特靶标的液滴数字聚合酶链式反应 (ddPCR) 检测计数、稀释因子和液滴体积测量值确定的。NIST 认证值是 NIST 对其有最高信心的值,因为已考虑了所有已知或可疑的偏差来源 [1]。拷贝数值在计量学上可追溯到自然单位计数 1 和比率 1 以及国际单位制 (SI) 得出的体积单位。DNA 质量浓度值在计量学上可追溯到自然单位计数和比率 1 以及 SI 得出的质量和体积单位。
鉴定与目标蛋白特异性相互作用的小有机分子是化学研究中的一个重要问题,也是药物发现的一个关键挑战。1 – 3 在过去的几十年里,DNA 编码化学库 (DEL) 已经成为发现药学相关蛋白质配体的强大且经济有效的工具。4 – 8 DEL 是大量小分子的集合,它们通过化学合成与同源 DNA 序列共价连接,作为独特的分子条形码。该编码程序通过使用聚合酶链式反应 (PCR) 和高通量 DNA 测序进行 DNA 扩增,可以鉴定和相对定量库中的单个化合物。9 – 11
当务之急是防止新冠病毒传播。出发前巡航训练中队所有成员均已完成新冠疫苗接种、聚合酶链反应(PCR)检测阴性,并接受了为期两周的预防性隔离。启航后,立即将快速抗原检测试剂、聚合酶链式反应(PCR)检测设备、危重疾病治疗药品等装载上船,并加强增派医务人员、运营船上隔离区域、进行港口活动时穿着隔离服等预防措施,阻断疫情蔓延。 3)2021年巡航训练期间,美国阿拉斯加州州长、加拿大维多利亚州参议员、韩国国防部长官(关岛)
科学进步通常以重大技术突破为特征。单克隆抗体的产生、聚合酶链式反应 (PCR) 的发明或荧光蛋白的使用对生命科学产生了巨大影响。DNA 编辑技术已被广泛用于以特定且受控的方式修改基因。例如,在 CRISPR/Cas 技术 (Jinek 等人,2012) 开发之前,插入基因的额外副本 (转基因) 或通过同源重组破坏或替换基因是使用的基因组修饰方法。1993 年 CRISPR 序列的表征 (Mojica 等人,1993) 以及随后基因修饰技术的开发 (Jinek 等人,2012,Gasiunas 等人,2012) 彻底改变了现代生物学中遗传实验的格局。
迄今为止,CRISPR 基因组编辑技术已应用于研究基因功能、人类疾病研究(包括遗传性疾病的发病机制)、基因治疗、牲畜和作物遗传改良。基因组编辑不同于基因改造,后者通过稳定整合自然界中不会发生的 DNA 元素来对基因组进行修改。所得生物体及其(大多数)产物可以用针对插入位点的事件特异性聚合酶链式反应 (PCR) 方法进行鉴定。基因组编辑等新育种技术使育种者的工具箱多样化,可用于在植物和动物中产生有用的遗传变异。其中一些技术可以在不整合外来 DNA 的情况下引入单核苷酸变化,同时产生具有预期表型的生物体。
无论是否存在雄激素,其转录活性都会受到影响。我们评估了 AR 和 PIM1 的表达及其在 TNBC 中的预后意义。材料和方法:通过定量逆转录聚合酶链式反应对 141 例 TNBC 患者的福尔马林固定石蜡包埋肿瘤中的 AR 和 PIM1 转录本进行量化。结果:38.3% 表达 AR,10.6% 表达 PIM1,而在 7/141 例(5.0%)中检测到 AR 和 PIM1 共同表达。AR 或 PIM1 对总体或无病生存期没有预后意义。结论:只有一小部分 TNBC 患者存在 AR 和 PIM1 共同表达。应在更大的患者队列中研究这一发现对 TNBC 患者治疗管理的意义。
• 使用和掌握基本的实验室数学技能和测量单位。 • 练习实验设计和执行、解决问题、数据收集、数据分析和科学交流。 • 掌握基本科学仪器的使用,例如容量测量移液器、分光光度计、凝胶电泳、 PCR 仪和凝胶成像。 • 培养和安全处理用于 DNA 克隆和分析的细菌。 • 使用重组 DNA 技术从细菌中分离、转移和分析 DNA。 • 使用重组 DNA 技术工具分析基因表达和调控。 • 使用聚合酶链式反应 (PCR)、DNA 指纹合成和扩增 DNA。 • 将果蝇鉴定为重要的遗传模型生物。 • 利用 CRISPR 技术展示其在医学中的基因编辑潜力。 • 练习技术写作技巧和演讲。
该研究于 2022-2023 年在肯尼亚西部的基苏木县开展。从大片城乡连续区采集的田间冈比亚按蚊 (sl) 幼虫使用世界卫生组织 (WHO) 敏感性测试进行表型分析,分为对六种不同杀虫剂具有抗性或敏感。使用聚合酶链式反应 (PCR) 技术鉴定冈比亚按蚊复合体的种类,并筛选电压门控钠通道 (Vgsc-1014F、Vgsc-1014S、Vgsc-1575Y) 突变和乙酰胆碱酯酶 (Ace1) 靶位突变 119S。使用微孔板测定法评估了未接触杀虫剂的蚊子的代谢酶活性(非特异性 β 酯酶和单加氧酶)。此外,在幼虫采样期间,还进行了回顾性问卷调查,以确定当地居民的杀虫剂使用情况。
聚合酶链式反应(PCR)对生物技术的许多领域产生了巨大影响。 PCR可用于扩增和解码DNA。这类似于收音机或立体声放大器将通常听不见的无线电信号放大成音乐的方式。自从首次使用 Klenow 片段利用 PCR 检测镰状细胞性贫血以来,已经开发出了许多诊断测试。许多诊断测试可能是常规测试。 PCR 的成功归功于核酸杂交特性所赋予的特异性和操作步骤的简单性。 PCR使 DNA 扩增成为克隆实验的替代方法。它用于包括 DNA 映射和 DNA 测序在内的基因组项目。 PCR 扩增也应用于法医和亲子鉴定,以及确定进化关系。当 DNA 样本有限时,PCR 会扩增 DNA,以便进一步研究。