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World File Search System自相残杀
HLA I 类基因敲除可将同种异体原代 NK 细胞转化为适合“现成”免疫疗法的效应细胞
到目前为止，使用嵌合抗原受体 (CAR) 的细胞免疫疗法几乎只使用自体外周血来源的 T 细胞作为免疫效应细胞。然而，对于患有恶性肿瘤和造血功能紊乱且接受过大量预先治疗的患者，收集足够数量的 T 细胞通常具有挑战性。此外，这种 CAR 产品始终针对单个患者。相反，由于这些先天免疫细胞缺乏同种反应，因此可以在非 HLA 匹配环境中进行 NK 细胞输注。尽管如此，输注的 NK 细胞仍会被患者的免疫系统识别和排斥，从而限制了它们在体内的寿命并破坏了多次输注的可能性。在这里，我们设计了基因组编辑和先进的慢病毒转导方案，使原代人类 NK 细胞对受体 CD8 + T 细胞的同种异体反应不敏感/有抵抗力。通过 CRISPR/Cas9 靶向 B2M 基因敲除 HLA I 类分子的表面表达后，我们还共表达了单链 HLA-E 分子，从而通过“缺失自我”诱导的裂解防止 NK 细胞与 B2M 敲除 (KO) 细胞自相残杀。重要的是，这些基因工程 NK 细胞在表型和对不同 AML 细胞系的天然细胞毒性方面与未改造的 NK 细胞在功能上没有区别。在共培养试验中，B2M-KO NK 细胞既不会诱导同种异体 T 细胞的免疫反应，也不会重新激活使用相应 NK 细胞供体的辐照 PBMNC 扩增/引发的同种异体 T 细胞。我们的研究证明了在原代同种异体 NK 细胞中进行基因组编辑的可行性，可以减少不匹配的 T 细胞对其的识别和杀伤，并且是使用非 HLA 匹配的原代人类 NK 细胞作为现成的“现成的”免疫效应物用于人类癌症的各种免疫治疗适应症的重要先决条件。
摘要 LB210
70 在肾细胞癌 (RCC) 中高度表达，而在正常组织中表达有限，这使其成为治疗免疫原性实体瘤的有吸引力的 CAR-T 靶点。在这里，我们生成并表征了一组基于抗 CD70scFv 的 bAR T 细胞。尽管 T 细胞上表达 CD 70，但仍从具有强体外活性的一组 scFv 中产生了 CAR-T。发现 CD 70CAR 的表达掩盖了顺式 CD 70 检测并提供针对 CD 70CAR T 介导的自相残杀的保护。已鉴定出两种独特的 CAR-T 细胞类别，它们具有不同的记忆表型、活化状态和细胞毒活性。表位图谱显示，与结合 CD 70ECD 膜近端区域的 CAR 相比，结合 CD 70ECD 膜远端区域的 CAR 属于活性更高、分化程度更高的类别。 CD 70CAR T 细胞使用利妥昔单抗的开关进行评估，以控制 CAR T 功能，并在小鼠模型中显示出对 RCC 细胞系和患者来源的异种移植瘤的强大抗肿瘤活性。评估与两种主要 CAR 脱靶结合的组织交叉反应研究显示，在罕见的组织常驻淋巴细胞中出现膜染色，从而与已知的 CD 70 表达模式相匹配。在食蟹猴 CD 3-CD70 双特异性毒性研究中观察到与 T 细胞活化和 CD 70 表达细胞消除相关的预期结果，包括细胞因子释放和淋巴组织中的细胞丢失。最后，通过 TALEN® 基因编辑消除 T 细胞受体，大规模生产了高功能性 CD 70 同种异体 CAR T 细胞。综上所述，这些功效和安全性数据支持对 CD 70CAR T 细胞用于治疗 RCC 的评估，并推动同种异体 CD c 70CAR T 候选药物进入 I 期临床试验。（A）
关于本土炼铁的初步报告......
摘要 本研究利用考古地面勘察和口头传说，探索了古代炼铁技术的发展。报告研究了散落的 Ekpapka（铁渣）和各种 Ovurus（熔炉）之间的关系，这些证据可以在尼日利亚埃多州阿科科-埃多地方政府区 Ekpe 社区的某些街道上找到。研究的结论是，尽管目前人类在某些遗址上进行耕作和建造建筑物等活动，但这些证据足以证明当地人民已经发展和壮大了本土炼铁业。尽管由于各地区之间自相残杀引发的移民，冶炼业在近代遭到忽视，但它不仅带来了铁匠活动，还催生了与 Ekpe 相邻的新社区 Uneme-Ekpe。关键词：古代炼铁技术 考古地面侦察 口头传统 引言 近代以来，用于生产铁材料的原矿的鉴别、勘探和开采是冶金工程师的工作内容。在这方面，将铁矿石转化为金属的技术（通常称为冶炼）已经成为工程专业的专属专利。然而，本土冶炼作为一种工艺的历史可以追溯到古代。它早在 17 和 18 世纪被称为工程的现代知识领域发展之前就已经存在了（Gaylord，1979 年）。可以说，冶炼因其维持生命的潜力而成为一种受人珍视的职业，并且通过其在工具生产方面的革命性潜力成为社会进步的必需品（Ahokegh，2013 年）。这必然导致了历史上通常称为铁器时代的时期（约公元前 1000 年 - 公元 100 年），铁被大规模用于各种用途，尤其是用于农业和战争，变得无处不在。从这时起，人们开始渴望获得和发展知识，不仅仅是冶炼，还包括将铁制成不同的工具。在历史的这个阶段，冶炼知识虽然并不常见，但在许多非洲社区中却备受追捧。由于铁在生产农业、狩猎和其他实用工具方面的有效性，其生产知识对于许多社会的生存至关重要（Ogunniyi，2013；Hoppers，2002）。正是在这种背景下，拥有铁作为一种不可或缺的工具的渴望激发了埃克佩人对本土探索和冶炼技术的积极性。 _________________ 这是一项基于机构的研究 (IBR)，由高等教育信托基金 (TETFund) 通过联邦教育学院 (奥肯尼，科吉州) 赞助
基于嵌合抗原受体的细胞疗法治疗 T 细胞恶性肿瘤
T 细胞恶性肿瘤可分为前体（T 急性淋巴细胞白血病/淋巴母细胞淋巴瘤，T-ALL/LBL）和成熟 T 细胞肿瘤，由 28 种不同的实体组成。这些恶性肿瘤大多具有侵袭性，预后较差。复发/难治性 (R/R) 疾病的预后尤其糟糕，进展后预期生存期仅为数月。靶向治疗，例如抗 CD30 免疫毒素 brentuximab vedotin、抗 CD38 抗体 daratumumab 和抗 CCR4 抗体 mogamulizumab 仅对部分 T 细胞肿瘤患者有效。嵌合抗原受体 T 细胞 (CAR-T) 通常用于治疗 R/R B 细胞恶性肿瘤，然而，它们在 T 细胞白血病和淋巴瘤中的应用存在一些特定的障碍，包括自相残杀、恶性细胞转染风险和 T 细胞发育不全。这些问题的解决方案依赖于靶抗原选择、CRISPR/Cas9 或 TALEN 基因编辑、CAR-T 表面抗原表达的翻译后调控和安全开关。使用基因编辑产品观察到染色体结构变化和基因表达的整体变化。我们在 www.clinicaltrials.gov 上注册了 49 项基于 CAR 的疗法研究。它们中的大多数以 CD30 或 CD7 抗原为目标。只有少数研究的结果可用。一般而言，临床反应率超过 50%，但报告的随访时间很短。 CAR 疗法的特定毒性，即细胞因子释放综合征 (CRS)，似乎与目标抗原和制造细胞的来源有关。抗 CD7 CAR-T 细胞中的 CRS 比抗 CD30 细胞中更常见，但在大多数患者中症状较轻。在基因编辑的同种异体 CAR-T 细胞后观察到更严重的 CRS。免疫效应细胞相关神经毒性 (ICANS) 较轻且不常见。还观察到先前造血干细胞供体的同种异体 CAR-T 细胞后的移植物抗宿主病 (GvHD)。与抗 CD19 CAR-T 细胞类似，最常见的毒性是血细胞减少症。基于 CAR 的细胞疗法对于 T 细胞恶性肿瘤似乎是可行且有效的，然而，基于 CAR 的产品的最佳设计仍然未知，需要长期随访以评估其真正潜力。
高亲和力 CD16 整合到 CRISPR/Cas9 编辑的 CD38 基因座中可增强原代人类自然杀伤细胞的 CD38 定向抗肿瘤活性
摘要 背景 过继转移具有增强的抗体依赖性细胞毒作用 (ADCC) 能力和对 CD38 靶向性抗性的自然杀伤 (NK) 细胞有可能增强达雷木单抗 (DARA) 的临床抗骨髓瘤活性。因此，我们试图开发一种有效的基于 CRISPR/Cas9 的基因编辑平台，以破坏离体扩增的 NK 细胞中的 CD38 表达 (CD38 敲除 (KO))，并同时为 CD38 KO NK 细胞配备高亲和力 CD16 (CD16-158V) 受体。方法 使用 Cas9 核糖核蛋白复合物生成 CD38 KO 人 NK 细胞。通过结合信使 RNA (mRNA) 转染 CD38 KO NK 细胞和在 CD38 位点插入靶向基因以介导基因敲入 (KI)，扩展了该平台。在体外和 MM.1S 异种移植小鼠模型中测试了这些基因编辑的 NK 细胞在 DARA 存在下持续存在和介导 ADCC 的能力。结果在体外扩增的 NK 细胞中实现了高效的 CD38 基因破坏，而不会影响其增殖或功能能力。CD38 KO 赋予了对 DARA 诱导的 NK 细胞自相残杀的抗性，在体外和 MM.1S 异种移植小鼠模型中，在 DARA 存在下，能够持续存在并增强对骨髓瘤细胞系的 ADCC。CD38 KO NK 细胞可以通过转染编码 CD16-158V 受体的 mRNA 进一步修饰，从而增强 DARA 介导的 ADCC。最后，我们观察到针对 CD38 基因座的同源定向修复模板促进了有效的 2 合 1 CD38 KO 与截短 CD34 报告基因和 CD16-158V 受体的 KI 结合，CD38 KO /CD16 KI NK 细胞在体外和体内均表现出 DARA 介导的 ADCC 的进一步增强。结论使用体外扩增的 CD38 KO /CD16 KI NK 细胞进行过继免疫治疗有可能提高 DARA 的临床疗效。通过将互补的基因工程策略整合到 CD38 KO 制造平台中，我们生成了具有显著增强的 CD38 定向抗肿瘤活性的 NK 细胞，为在临床上探索这种免疫治疗策略奠定了坚实的基础。