a) 恰加斯病血清学检测——通过两种不同的方法检测 IgG; b) 全血细胞计数; c)空腹血糖; d) 肌酐 e) HBsAg; f) 抗-HBcIgG(如呈阳性,则进行 DNA PCR - 乙肝病毒聚合酶链反应); g)抗-HCV(如呈阳性,则进行PCR RNA-丙型肝炎病毒聚合酶链反应); h)谷氨酸丙酮酸转氨酶(GPT); i)谷氨酸-草酰乙酸转氨酶(GOT); j) 碱性磷酸酶(AP)k) γ-谷氨酰转移酶(Gamma-GT); l)促甲状腺激素(TSH); m) 凝血图:AP、INR 和 PTTa。 2.尿液:
我们之前报道了一种针对死体营养真菌植物病原菌核病菌的 CRISPR-Cas9 基因组编辑系统。该系统(TrpC-sgRNA 系统)基于 RNA 聚合酶 II(RNA Pol II)启动子(TrpC)在体内驱动 sgRNA 转录,成功创建了基因插入突变体。然而,相对低效率的靶向基因编辑阻碍了该方法在核病菌功能基因组研究中的应用。为了进一步优化 CRISPR-Cas9 系统,建立并评估了无质粒的 Cas9 蛋白/sgRNA 核糖核蛋白(RNP)介导的系统(RNP 系统)和基于质粒的 RNA 聚合酶 III 启动子(U6)驱动的 sgRNA 转录系统(U6-sgRNA 系统)。本研究针对之前鉴定的草酰乙酸乙酰水解酶 (Ssoah1) 基因座和一个编码聚酮化合物合酶 12 (Sspks12) 的新基因座创建了功能丧失突变体。RNP 系统与我们之前报道的 TrpC-sgRNA 系统类似,可以在 Ssoah1 基因座上以类似的效率产生突变。然而,这两个系统都未能在 Sspks12 基因座上成功产生突变。U6-sgRNA 系统在这两个基因座上都表现出明显更高的基因突变效率。该技术为靶向基因突变提供了一种简单有效的策略,从而将加快对这种具有重要经济价值的植物病原体的致病性和发展的研究步伐。