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线粒体在细胞能量生产和代谢中起着核心作用。执行这些功能所需的大多数蛋白质是在细胞质中合成的,并进口到线粒体中。线粒体功能障碍引起的越来越多的代谢性疾病可以追溯到线粒体蛋白导入的错误。通常使用进口到纯化的线粒体中的放射性标记的前体蛋白来研究前体蛋白的进口机制。在这里,我们建立了基于荧光的进口测定法,以分析蛋白质进口到线粒体中。我们表明,荧光标记的前体可以使进口分析具有与使用射线活性前体的敏感性相似的敏感性,但它们提供了用picomole分辨率量化导入的优势。我们将导入测定法调整为96台板格式,以允许以筛选兼容格式进行快速分析。此外,我们表明荧光标记的前体可用于监测纯化的线粒体中F 1 F 0 ATP合酶的组装。因此,我们提供了一种基于敏感的荧光进口测定法,可以实现定量和快速的进口分析。
Hong-Ou-Mandel (HOM) 效应是一种令人着迷的量子现象,无法用经典解释。传统上,远程非线性源已用于在 HOM 分束器上实现光子的重合。在这里,我们建议可以使用位于分束器间隙上的超辐射近场耦合发射器在本地创建 HOM 干涉所需的重合发射源。我们表明,使用 HOM 光子检测可以大大增强对分束器间隙介电常数变化的灵敏度和相应的 Fisher 信息。随后,我们概述了将超辐射发射器与实际传感器系统集成的几种策略。总之,这些发现应该为广泛的近场 HOM 量子传感器和新型量子设备铺平道路。
线粒体在细胞能量生产和代谢中起着核心作用。执行这些功能所需的大多数蛋白质是在细胞质中合成的,并进口到线粒体中。线粒体功能障碍引起的越来越多的代谢性疾病可以追溯到线粒体蛋白导入的错误。通常使用进口到纯化的线粒体中的放射性标记的前体蛋白来研究前体蛋白的进口机制。在这里,我们建立了基于荧光的进口测定法,以分析蛋白质进口到线粒体中。我们表明,荧光标记的前体可以使进口分析具有与使用射线活性前体的敏感性相似的敏感性,但它们提供了用picomole分辨率量化导入的优势。我们将导入测定法调整为96台板格式,以允许以筛选兼容格式进行快速分析。此外,我们表明荧光标记的前体可用于监测纯化的线粒体中F 1 F 0 ATP合酶的组装。因此,我们提供了一种基于敏感的荧光进口测定法,可以实现定量和快速的进口分析。
瞬态结构在生物系统中发挥着多种重要作用。与构成生物组织骨架的静态结构不同,瞬态结构仅出现在特定的空间和时间尺度上,以在生命周期中履行其职责。尽管人工分子自组装研究领域取得了重大进展,但构建功能性瞬态结构仍然具有挑战性。本文报道了通过不利于组装的主客体相互作用形成瞬态配位自组装结构及其荧光。发光配体和环糊精之间的主客体相互作用极大地改变了配位自组装的动力学,从而形成了瞬态结构。与典型的单体发射在紫外区域的静态平衡结构不同,瞬态自组装形成准分子,从而导致可见光发射。更有趣的是,瞬态结构的生命周期可以通过改变主客体比、配体金属比以及温度来轻松调节。这使得创建模拟植物在不同生命阶段生长的生命模式成为可能。因此,可以预见,瞬态分子自组装的创建将在具有动态功能先进材料的分子自组装领域开辟新范式。
预印本(未通过同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。该版本的版权持有人于2024年12月27日发布。 https://doi.org/10.1101/2024.12.26.630335 doi:Biorxiv Preprint
抽象的广场荧光显微镜用于监测大脑神经元种群的峰值。广场荧光可以起源于皮质中所有深度的指标分子,而索马塔,树突和轴突的相对贡献通常是未知的。在这里,我模拟了广场照明和荧光收集,并确定几种GCAMP小鼠系的荧光的主要来源。散射强烈影响照明和收集。一个结果是,照明强度最大〜300-400 m以下,而不是在大脑表面。另一个是从皮质深处的荧光可能延伸到脑表面3–4 mm的直径,严重限制了横向分辨率。在许多小鼠线中,有助于荧光的组织体积延伸到大多数表面位置的整个皮层和荧光深度是多个皮质柱的加权平均值,通常是一个以上的皮质区域。
分离染色体的流式细胞术是细胞遗传学的一种新方法,可快速测量单个中期染色体。在这种方法中,用适当的荧光染料染色的水悬浮液中的染色体被限制在激发染料的窄激光束中高速流动。发射的荧光通过光度法测量,累积的数据形成染色体荧光的频率分布。该频率分布的峰值归因于单个染色体或具有相似荧光的染色体组;峰值平均值与染色体荧光成正比,峰值面积与染色体出现频率成正比。因此,频率分布可作为核型(1、2)。此外,流式分选可根据染色体的染色特性分离染色体(3、4),这与传统的中期染色体纯化方法不同,后者依赖于速度或等密度沉降、区域离心或选择性过滤(5)。纯化单个中期染色体很重要,原因如下。富集或纯染色体部分已进行生化分析,以提供有关 DNA 或蛋白质结构的信息(6),将遗传信息转移到整个细胞(7-9),或通过体外杂交绘制基因图谱(10)。但一般来说,传统技术无法提供足够纯度的染色体,无法进行高分辨率生物或生化研究。通过基于溴化乙锭荧光的流式分选,我们以 90% 的纯度将雄性鹿 Muntiocus muntjak (2n = 7) (4) 的每个染色体和中国仓鼠 M3-1 细胞系的 14 种染色体类型分离成 8 个染色体组 (1, 3)。在我们之前对溴化乙锭染色的人类染色体的研究中,我们仅从雄性 (2n = 46) 的 24 种染色体类型中分辨出 8 个染色体组 (2, 3)。在本研究中,使用 DNA 荧光染料 33258 Hoechst 和改进的仪器,
熔盐增殖反应堆的冷冻冷却盐、Th-U-Mo(金属燃料)合金的微观结构和衍射研究、废水管理、基于荧光的化学和生物化学应用技术、多种生物材料的激光辅助表面微结构应用,以及其他各种正在探索中的活动,以开拓该国科学技术的新视野。
图2 NHS对ATP动力学的影响。 (a)NHS诱导1(代表n = 6)的二聚化。 (b)暴露于NHS(1μm)viatmrm(20 nm)荧光的SH-SY5Y细胞中的Δψm评估。 (c)条形图量化线索 - 膜电位(Δψm)。 数据显示为平均值±SEM(n = 14)。 * p <0.05,如所示。 (d - e)由Liuminometer记录的代表性痕迹在用线粒体靶向(MIT)和凝结核酸(Cyt)荧光素酶转染的SH-SY5Y细胞中,并用荧光素(100μm)灌注。 在高原上,将用NHS(1μm)挑战细胞,并监测动力学(n = 9)。 (F - G)SH-SY5Y细胞被PGIPZ GFP标记的载体稳定转染(如第2节所述),如果通过(F)中的Western blot分析确认了1个下调。 (g)条显示了1个表达的变化,将1个表达归一化为β-肌动蛋白水平,并表示为平均值±SEM(n = 9)。 * p <0.05,如所示。 (H)响应NACN和IAA处理的MGG荧光变化的代表性痕迹。 (i)条显示了在NaCN(1 mM)和IAA(2 mM)存在下,用NHS1μm处理18-H处理后对应于ATP耗竭的MGG荧光的变化。 数据归一化为未处理的细胞,并表示为平均值±SEM(n = 11)。 * p <0.05,如所示。 * P <0.05,如所示明显不同图2 NHS对ATP动力学的影响。(a)NHS诱导1(代表n = 6)的二聚化。(b)暴露于NHS(1μm)viatmrm(20 nm)荧光的SH-SY5Y细胞中的Δψm评估。(c)条形图量化线索 - 膜电位(Δψm)。数据显示为平均值±SEM(n = 14)。* p <0.05,如所示。(d - e)由Liuminometer记录的代表性痕迹在用线粒体靶向(MIT)和凝结核酸(Cyt)荧光素酶转染的SH-SY5Y细胞中,并用荧光素(100μm)灌注。在高原上,将用NHS(1μm)挑战细胞,并监测动力学(n = 9)。(F - G)SH-SY5Y细胞被PGIPZ GFP标记的载体稳定转染(如第2节所述),如果通过(F)中的Western blot分析确认了1个下调。(g)条显示了1个表达的变化,将1个表达归一化为β-肌动蛋白水平,并表示为平均值±SEM(n = 9)。* p <0.05,如所示。(H)响应NACN和IAA处理的MGG荧光变化的代表性痕迹。(i)条显示了在NaCN(1 mM)和IAA(2 mM)存在下,用NHS1μm处理18-H处理后对应于ATP耗竭的MGG荧光的变化。数据归一化为未处理的细胞,并表示为平均值±SEM(n = 11)。* p <0.05,如所示。* P <0.05,如所示(j和k)然后,用NHS1μM处理后,根据(J)NaCn或(K)IAA评估MGG荧光的增加。