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一种赋予活细胞中蛋白质无洗蛋白质成像的基因荧光的一般策略
预印本（未通过同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。该版本的版权持有人于2024年12月27日发布。 https://doi.org/10.1101/2024.12.26.630335 doi：Biorxiv Preprint
用于可编程荧光的可控寿命瞬态自组装材料
瞬态结构在生物系统中发挥着多种重要作用。与构成生物组织骨架的静态结构不同，瞬态结构仅出现在特定的空间和时间尺度上，以在生命周期中履行其职责。尽管人工分子自组装研究领域取得了重大进展，但构建功能性瞬态结构仍然具有挑战性。本文报道了通过不利于组装的主客体相互作用形成瞬态配位自组装结构及其荧光。发光配体和环糊精之间的主客体相互作用极大地改变了配位自组装的动力学，从而形成了瞬态结构。与典型的单体发射在紫外区域的静态平衡结构不同，瞬态自组装形成准分子，从而导致可见光发射。更有趣的是，瞬态结构的生命周期可以通过改变主客体比、配体金属比以及温度来轻松调节。这使得创建模拟植物在不同生命阶段生长的生命模式成为可能。因此，可以预见，瞬态分子自组装的创建将在具有动态功能先进材料的分子自组装领域开辟新范式。
报告 - 一种基于定量荧光的研究方法...
线粒体在细胞能量生产和代谢中起着核心作用。执行这些功能所需的大多数蛋白质是在细胞质中合成的，并进口到线粒体中。线粒体功能障碍引起的越来越多的代谢性疾病可以追溯到线粒体蛋白导入的错误。通常使用进口到纯化的线粒体中的放射性标记的前体蛋白来研究前体蛋白的进口机制。在这里，我们建立了基于荧光的进口测定法，以分析蛋白质进口到线粒体中。我们表明，荧光标记的前体可以使进口分析具有与使用射线活性前体的敏感性相似的敏感性，但它们提供了用picomole分辨率量化导入的优势。我们将导入测定法调整为96台板格式，以允许以筛选兼容格式进行快速分析。此外，我们表明荧光标记的前体可用于监测纯化的线粒体中F 1 F 0 ATP合酶的组装。因此，我们提供了一种基于敏感的荧光进口测定法，可以实现定量和快速的进口分析。
基于定量荧光的方法研究线粒体蛋白进口
线粒体在细胞能量生产和代谢中起着核心作用。执行这些功能所需的大多数蛋白质是在细胞质中合成的，并进口到线粒体中。线粒体功能障碍引起的越来越多的代谢性疾病可以追溯到线粒体蛋白导入的错误。通常使用进口到纯化的线粒体中的放射性标记的前体蛋白来研究前体蛋白的进口机制。在这里，我们建立了基于荧光的进口测定法，以分析蛋白质进口到线粒体中。我们表明，荧光标记的前体可以使进口分析具有与使用射线活性前体的敏感性相似的敏感性，但它们提供了用picomole分辨率量化导入的优势。我们将导入测定法调整为96台板格式，以允许以筛选兼容格式进行快速分析。此外，我们表明荧光标记的前体可用于监测纯化的线粒体中F 1 F 0 ATP合酶的组装。因此，我们提供了一种基于敏感的荧光进口测定法，可以实现定量和快速的进口分析。
一种基于荧光的新型基因编辑分子筛选方法，用于治疗连接性大疱性表皮松解症
摘要：连接性大疱性表皮松解症 (JEB) 是一种严重的起泡性皮肤病，由编码皮肤完整性所必需的结构蛋白的基因突变引起。在本研究中，我们开发了一种适用于研究 JEB 相关 COL17A1 基因表达的细胞系，该基因编码 XVII 型胶原蛋白 (C17)，C17 是一种跨膜蛋白，参与连接基底角质形成细胞和皮肤下层真皮。利用化脓性链球菌的 CRISPR/Cas9 系统，我们将 GFP 的编码序列与 COL17A1 融合，导致 GFP-C17 融合蛋白在人类野生型和 JEB 角质形成细胞中在内源性启动子的控制下组成性表达。我们通过荧光显微镜和蛋白质印迹分析证实了 GFP-C17 的准确全长表达和定位到质膜。正如预期的那样，GFP-C17 mut 融合蛋白在 JEB 角质形成细胞中的表达未产生特定的 GFP 信号。然而，在表达 GFP-COL17A1 mut 的 JEB 细胞中，CRISPR/Cas9 介导的 JEB 相关移码突变修复导致 GFP-C17 恢复，这在融合蛋白的全长表达、其在角质形成细胞单层质膜内以及 3D 皮肤等效物的基底膜区内的准确定位中显而易见。因此，这种基于荧光的 JEB 细胞系有可能作为筛选个性化基因编辑分子和体外应用以及在适当的动物模型中体内应用的平台。
通过离散荧光的超辐射耦合进行 Hong-Ou-Mandel 传感
Hong-Ou-Mandel (HOM) 效应是一种令人着迷的量子现象，无法用经典解释。传统上，远程非线性源已用于在 HOM 分束器上实现光子的重合。在这里，我们建议可以使用位于分束器间隙上的超辐射近场耦合发射器在本地创建 HOM 干涉所需的重合发射源。我们表明，使用 HOM 光子检测可以大大增强对分束器间隙介电常数变化的灵敏度和相应的 Fisher 信息。随后，我们概述了将超辐射发射器与实际传感器系统集成的几种策略。总之，这些发现应该为广泛的近场 HOM 量子传感器和新型量子设备铺平道路。