克尔斯滕大鼠肉瘤病毒 (KRAS) 癌蛋白是癌症中最常见的突变之一,几十年来一直被认为无法用药。这项研究的假设是,在细胞内水平递送抗 KRAS 单克隆抗体 (mAb) 可以有效靶向 KRAS 癌蛋白。为了实现这一目标,我们设计并开发了基于 tLyP1 靶向棕榈酰透明质酸 (HAC16) 的纳米组装体 (HANA),该组装体经过改造,可与贝伐单抗结合作为模型 mAb。选定具有适当物理化学性质(低于 150 nm,中性表面电荷)和高药物负载能力(> 10%,w/w)的候选物经过改造,可包覆抗 KRAS G12V mAb。所得的载有抗 KRAS G12V 的 HANA 呈现出由 HAC16 聚合物和磷脂酰胆碱 (PC) 组成的双层,包裹着亲水核心,低温透射电子显微镜 (cryo-TEM) 和 X 射线光电子能谱 (XPS) 证实了这一点。选定的原型被发现能有效与靶标 KRAS G12V 结合,并抑制 KRAS G12V 突变肺癌细胞系中的增殖和集落形成。在体内,选定的配方在携带胰腺肿瘤的小鼠模型中表现出肿瘤生长减缓。简而言之,这项研究提供了使用纳米技术开发抗 KRAS 精准治疗的潜力的证据,并为推进针对细胞内靶标的 mAb 细胞内递送提供了合理的框架。
对于角膜缘干细胞缺乏症 (LSCD) 患者,体外扩增的人角膜缘上皮细胞 (HLEC) 移植可恢复角膜表面的结构和功能完整性。然而,HLEC 的培养和移植方案差异很大,大多数方案中都使用霍乱毒素、外源性生长因子、激素和胎牛血清等生长添加剂。本文首次比较了在含有胎牛血清的复合培养基 (COM) 中培养的人羊膜 (HAM) 上的人角膜缘上皮细胞 (HLEC) 和在仅添加人血清作为生长添加剂的培养基 (HSM) 上的培养情况,并报告了我们对在自体 HSM 中扩增并用于 LSCD 患者移植手术的 HLEC 的首次研究。利用全基因组微阵列、RT-PCR、Western印迹法对扩增的HLEC进行检测,并评估其细胞活力、形态、免疫组化标志物表达和集落形成效率。在HSM中培养HLEC可产生多层上皮,其中在基底层检测到了与LESC相关的标志物细胞。在HSM和COM中培养的细胞之间转录差异很小,细胞活力相当。与LESC相关的p63基因在HSM中的表达量是COM的3.5倍,Western印迹法证实HSM培养物中p63a带更强。角膜特异性角蛋白CK12在两种培养条件下的发现量相同,但HSM中的CK3阳性细胞明显更多。 LSCD 患者移植手术后,HAM 上皮片中残留的细胞表现出中心上皮特征,在生长停滞的成纤维细胞上低密度培养的分离细胞产生的克隆包含 21.12% 的 p63a 阳性细胞(n = 3)。综上所述,不含动物来源或动物细胞培养物来源的生长添加剂,仅以人血清作为单一生长添加剂的培养基,可以作为 HAM 上 HLEC 体外扩增常用复合培养基的等效替代品。2012 Elsevier Ltd. 保留所有权利。