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纳米技术辅助抗体细胞内递送作为 KRAS 驱动肿瘤的精准治疗方法
克尔斯滕大鼠肉瘤病毒 (KRAS) 癌蛋白是癌症中最常见的突变之一，几十年来一直被认为无法用药。这项研究的假设是，在细胞内水平递送抗 KRAS 单克隆抗体 (mAb) 可以有效靶向 KRAS 癌蛋白。为了实现这一目标，我们设计并开发了基于 tLyP1 靶向棕榈酰透明质酸 (HAC16) 的纳米组装体 (HANA)，该组装体经过改造，可与贝伐单抗结合作为模型 mAb。选定具有适当物理化学性质（低于 150 nm，中性表面电荷）和高药物负载能力（> 10%，w/w）的候选物经过改造，可包覆抗 KRAS G12V mAb。所得的载有抗 KRAS G12V 的 HANA 呈现出由 HAC16 聚合物和磷脂酰胆碱 (PC) 组成的双层，包裹着亲水核心，低温透射电子显微镜 (cryo-TEM) 和 X 射线光电子能谱 (XPS) 证实了这一点。选定的原型被发现能有效与靶标 KRAS G12V 结合，并抑制 KRAS G12V 突变肺癌细胞系中的增殖和集落形成。在体内，选定的配方在携带胰腺肿瘤的小鼠模型中表现出肿瘤生长减缓。简而言之，这项研究提供了使用纳米技术开发抗 KRAS 精准治疗的潜力的证据，并为推进针对细胞内靶标的 mAb 细胞内递送提供了合理的框架。
使用以人血清为单一补充物的培养基在羊膜上体外扩增自体角膜缘上皮细胞
对于角膜缘干细胞缺乏症 (LSCD) 患者，体外扩增的人角膜缘上皮细胞 (HLEC) 移植可恢复角膜表面的结构和功能完整性。然而，HLEC 的培养和移植方案差异很大，大多数方案中都使用霍乱毒素、外源性生长因子、激素和胎牛血清等生长添加剂。本文首次比较了在含有胎牛血清的复合培养基 (COM) 中培养的人羊膜 (HAM) 上的人角膜缘上皮细胞 (HLEC) 和在仅添加人血清作为生长添加剂的培养基 (HSM) 上的培养情况，并报告了我们对在自体 HSM 中扩增并用于 LSCD 患者移植手术的 HLEC 的首次研究。利用全基因组微阵列、RT-PCR、Western印迹法对扩增的HLEC进行检测，并评估其细胞活力、形态、免疫组化标志物表达和集落形成效率。在HSM中培养HLEC可产生多层上皮，其中在基底层检测到了与LESC相关的标志物细胞。在HSM和COM中培养的细胞之间转录差异很小，细胞活力相当。与LESC相关的p63基因在HSM中的表达量是COM的3.5倍，Western印迹法证实HSM培养物中p63a带更强。角膜特异性角蛋白CK12在两种培养条件下的发现量相同，但HSM中的CK3阳性细胞明显更多。 LSCD 患者移植手术后，HAM 上皮片中残留的细胞表现出中心上皮特征，在生长停滞的成纤维细胞上低密度培养的分离细胞产生的克隆包含 21.12% 的 p63a 阳性细胞（n = 3）。综上所述，不含动物来源或动物细胞培养物来源的生长添加剂，仅以人血清作为单一生长添加剂的培养基，可以作为 HAM 上 HLEC 体外扩增常用复合培养基的等效替代品。2012 Elsevier Ltd. 保留所有权利。