3. 风险管理和安全不是额外的任务,也不是完成任务的障碍。它们是我们所做的一切不可或缺的一部分。在工作场所有效应用风险管理和安全将导致积极的习惯转移到下班后的活动。领导者必须使用深思熟虑的风险评估工作表 (DRAW),DD 表格 2977,为所有不定期发生的社区功能和活动提供详细的风险评估 (RA)。这包括针对儿童或大量人员和资源的活动。所有 DRAW 都将通过我的安全办公室进行协调,然后才能获得批准。作为所有具有高残留风险水平的 RA 的批准机构,我授权驻军安全主管确定所有中到低残留风险活动的批准级别。
SO 2 浓度乳酸菌(包括酒类酒球菌)对分子形式的 SO 2 高度敏感。因此,为避免分子 SO 2 对苹果酸乳酸菌产生潜在的致命影响,建议用于诱导 MLF 的葡萄汁/葡萄酒中不要含有任何可检测到的游离 SO 2(注意,传统的红酒 SO 2 测量方法,如曝气氧化法,往往会高估游离和分子 SO 2 浓度(Coelho 等人,2015 年,Howe 等人,2018 年))。此外,由于结合 SO 2 也可能对苹果酸乳酸菌和 MLF 有抑制作用,因此总 SO 2 浓度可作为衡量 SO 2 对特定葡萄酒 MLF 潜在影响的有用指标。作为指导,在压碎葡萄之前向葡萄中添加最多 50 mg/L 的总 SO 2 可限制对 MLF 的潜在不利影响。然而,由于其他外在(如葡萄的采摘和运输)和内在(如用于酒精发酵的酵母菌株)来源可能会积累 SO 2,因此建议在接种细菌之前准确测量总 SO 2 。总而言之,有利的 MLF 的理想总 SO 2 浓度小于 30 mg/L。根据所用的苹果酸乳酸菌菌株和其他葡萄酒参数,总 SO 2 浓度超过 40 mg/L 是不利的,可能会延迟 MLF 的开始和完成。浓度 >50-60 mg/L 可能会完全抑制 MLF。其他抑制因素除了上面提到的参数外,农药残留、高残留铜浓度和来自酵母的高含量某些中链脂肪酸也会抑制 MLF。
冻干(也称为冷冻干燥)是一种通过水或其他溶剂的升华和解吸将液体转化为固体的过程。该过程包括三个高度相互关联的阶段:冷冻、初级干燥(升华)和二次干燥(解吸)。冻干通常用于稳定在液体或冷冻形式下不稳定的活性药物成分 (API) 和配方。由于冻干不需要加热,因此它是热敏感 API 和生物制剂(如蛋白质和肽)的理想干燥方法。当使用冻干制造肠外药物产品时,所得粉末被密封在小瓶、药筒或注射器内。在给药前,将冻干粉重新配制或与液体稀释剂混合,以形成用于注射的均匀溶液或悬浮液。冻干粉的高表面积允许在床边快速重新配制(即补液)和注射,这对于紧急产品特别有用。这些产品高度稳定,保质期通常超过两年。冻干也可用于生产中间粉末,然后进一步加工成最终剂型。例如,可将具有高残留溶剂含量和热敏感性的粉末冻干,以在进行进一步加工之前除去溶剂。冻干也可用于生产稳定、可流动的粉末,以进行研磨或直接压片。在需要非常小的填充量的粉末填充中,将粉末溶解在液体中并冻干有助于控制重量,因为控制液体填充的体积更容易。冻干最重要的特性或许是它与无菌操作的兼容性,使其成为从开发开始的肠外给药的可靠选择。 2013 年至 2015 年,获批的注射和输注药物中,有一半是冻干产品,而 1990 年至 1981 年,冻干产品仅占 10%。这其中包括价值数十亿美元的小分子药物 Alimta®,以及 Lupron Depot®、Keytruda® 和 Herceptin® 等重磅生物制剂。随着复杂配方和水稳定性较差的生物制剂变得越来越普遍,冻干药物产品的增长预计只会持续下去。
场梯度(见公式 1),这可以通过尖锐的电极几何形状产生。这样,亚微米颗粒(例如聚苯乙烯珠和病毒颗粒)也可以通过 DEP 分离或固定 [4,5]。尽管该现象背后的机制仍然是近期研究和讨论的主题 [6–10],但蛋白质 [11,12]、酶分子 [13] 甚至小染料分子 [14] 也可以通过 DEP 操纵。由于在纳米电极上的固定无需标记并且在几秒内完成 [15,16],DEP 可能成为生产生物传感器的一种首选方法。此外,蛋白质分子可以单个固定,正如对平面纳米电极尖端和 R-藻红蛋白 (RPE) 所展示的那样 [12]。首次尝试生产用于单分子实验的蛋白质纳米阵列时,将牛血清白蛋白 (BSA) 固定在一个由 9 个电极组成的小纳米电极阵列上,电极尖端直径为 30 nm。根据施加的场强,蛋白质分子被永久或暂时固定,但尚未证明可以分离为单个分子 [15]。为了将单个酶或蛋白质分子固定在阵列上,需要直径小于颗粒直径的尖锐电极尖端 [16, 17]。通过反应离子刻蚀在硅基电极阵列的标准互补金属氧化物半导体生产工艺方面取得的最新进展使足够小的电极尖端的生产标准化成为可能:生产出数千个锥形电极的阵列,其最小直径约为 1.5 nm,通过化学机械抛光可以调整到更大的直径 [16]。对于生物传感器、芯片实验室设备和单酶分子实验,不仅要确保可靠的捕获,还要确保所涉及酶的高残留活性。原则上,估算了固定化的BSA 的量[18],并显示了抗RPE 抗体和辣根过氧化物酶 (HRP) 的活性[13, 19]。但无法对固定物的活性进行绝对量化。为了评估DEP 固定化酶阵列的适用性,本研究对仅通过DEP 永久固定的酶分子活性进行了定量测定。选择HRP 作为模型酶。HRP 是单亚基、44 kDa 血红素蛋白,具有已知的三维结构和催化途径以及复杂的糖基化模式[20, 21]。这种酶已被深入研究了几个世纪,由于其可用性、高稳定性以及在比色和荧光测定中的高活性,已成为诊断试剂盒和免疫测定的标准化学品[22]。出于类似的原因,它是单酶分子实验的原理验证中很受欢迎的酶[23–28],并且已经证明在纳米电泳后具有活性。