用于微生物计数和分离的连续稀释和平板接种技术

了解连续稀释和平板接种技术如何在实验室环境中实现准确的微生物计数、分离和表征。用于微生物计数和分离的后连续稀释和平板平板技术首先出现在《科学笔记》上。

来源:科学笔记

准确估计微生物浓度对于鉴定、分离、培养和表征至关重要。定量测量是所有微生物学科的基础,从临床诊断和工业微生物学到环境采样和学术研究。

连续稀释和平板接种技术的基础可以追溯到 1883 年,当时德国医生罗伯特·科赫 (Robert Koch) 发表了他关于传染性病原体的开创性工作。科赫的方法仍然是当今微生物计数的黄金标准,适用于单一物种和复杂的微生物群落。

什么是连续稀释?

连续稀释是通过连续重新悬浮到固定体积的液体稀释剂中来逐步降低已知或未知物质(例如微生物)的浓度。原始样品被称为溶液₀,随后的稀释产生一系列可预测的浓度。

稀释剂通常由 0.45% 盐水组成,可维持渗透平衡。体积通常选择 10 的倍数,以允许对数减少以便于计算。

10 倍连续稀释示例

例如,10 mL 营养肉汤中含有 100 个大肠杆菌细胞的原液(溶液₀)可按如下方式稀释:

  • 将 1 mL 溶液₀ 加入 9 mL 盐水中→溶液₁(10 个细胞)
  • 将 1 mL 溶液₁ 放入 9 mL 盐水中→溶液 2(1 个细胞)
  • 每个步骤代表 10 倍稀释,简化了菌落形成单位 (CFU) 的计算。

    微生物计数平板技术

    连续稀释后,电镀技术可进行微生物计数和分离。两种常见的方法是条纹电镀和扩散电镀。

    条纹电镀隔离

    划线电镀用于从混合群体中分离单个菌落。将稀释的样品引入琼脂上,并使用无菌环以受控的之字形图案划线。象限划线降低了整个板上的细胞密度,产生不同的集落。

    4. 电镀