Molecular engineering of Komagataella phaffii for venom toxin production
用于毒液毒素生产的 Komagataella phaffii 分子工程摘要动物毒液构成了具有高靶点特异性的生物活性肽和蛋白质的丰富来源，代表了治疗开发的宝贵支架。然而，毒液衍生毒素的生物技术开发受到实现高效、可扩展和可重复生产的挑战的限制。天然毒液提取受到产量低和生物变异性的限制，因此重组平台至关重要。然而，大多数毒液毒素是富含半胱氨酸的肽，具有复杂的二硫键结构和严格的结构-功能关系，对异源表达提出了重大挑战。低效的折叠、蛋白水解和分泌瓶颈经常会损害功能产量。在微生物宿主中，Komagataella phaffii 已成为一个将真核蛋白质加工与高细胞密度发酵和经济高效的培养相结合的强大系统。其
两种蝎毒素 BlTx1 和 BlTx2 的比较表征表明，BlTx2 是 Kv4.1 选择性肽抽象电压门控钾通道，属于 Kv4 亚家族（Kv4.1、Kv4.2 和 Kv4.3），介导瞬时 A 型钾电流，调节神经元兴奋性、树突整合和心脏复极。尽管它们很重要，但尚无药理学工具可用于选择性剖析 Kv4.1 的作用，因为 α-KTx15 家族的现有肽毒素在 Kv4 亚型中表现出广泛的活性。在这里，我们报告了从 Buthacus leptochelys 毒腺转录组中分离出的两种新型蝎子毒素 BlTx1 和 BlTx2 的发现和表征。两种毒素在酵母中异源表达并纯化至同质。非洲爪蟾卵母细胞的电生理记录显示，B
