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CRISPR/CAS9基于杂交瘤细胞中免疫球蛋白基因座的工程。加尔，C.M。 le; F.L. Fennemann； Schoot，J.M.S。 van der; Scheeren，F.A。； Verdo
Köhler和Milstein（1975）对杂交瘤技术的开发通过在研究和开发工作中的常规使用单克隆抗体（MAB）来彻底改变了免疫学领域，从而导致了他们今天在诊所的成功应用。 尽管需要重组良好的制造实践生产技术来生产临床级别的mAB，但学术实验室和生物技术公司仍然依靠原始的杂交瘤系列来稳定而轻松地以适度的价格生产高抗体产量。 在我们自己的工作中，我们在使用杂交瘤衍生的mAB时面临着一个主要问题：无法控制产生的抗体形式，这是重组产生确实允许的灵活性。 我们着手通过直接在杂交瘤细胞的免疫球蛋白（IG）基因座中的基因工程抗体来消除这一障碍。 我们使用了簇状的定期间隔短的短膜重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白9（CAS9）和同源指导修复（HDR）来修改抗体的格式[mAb或抗原结合片段（FAB'）]和同型。 本协议在几乎没有动手的时间内描述了一种直接的方法，导致稳定的细胞系分泌高水平的工程抗体。 亲本杂交瘤细胞保持在培养中，并用针对IG基因座感兴趣的指导RNA（GRNA）转染了IG基因座和HDR模板，以敲击所需的插入物和抗生素耐药性基因。 通过施加抗生素压力，在遗传和蛋白质水平上扩展并表征抗性克隆，以产生改良的mAb而不是亲本蛋白。Köhler和Milstein（1975）对杂交瘤技术的开发通过在研究和开发工作中的常规使用单克隆抗体（MAB）来彻底改变了免疫学领域，从而导致了他们今天在诊所的成功应用。尽管需要重组良好的制造实践生产技术来生产临床级别的mAB，但学术实验室和生物技术公司仍然依靠原始的杂交瘤系列来稳定而轻松地以适度的价格生产高抗体产量。在我们自己的工作中，我们在使用杂交瘤衍生的mAB时面临着一个主要问题：无法控制产生的抗体形式，这是重组产生确实允许的灵活性。我们着手通过直接在杂交瘤细胞的免疫球蛋白（IG）基因座中的基因工程抗体来消除这一障碍。我们使用了簇状的定期间隔短的短膜重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白9（CAS9）和同源指导修复（HDR）来修改抗体的格式[mAb或抗原结合片段（FAB'）]和同型。本协议在几乎没有动手的时间内描述了一种直接的方法，导致稳定的细胞系分泌高水平的工程抗体。亲本杂交瘤细胞保持在培养中，并用针对IG基因座感兴趣的指导RNA（GRNA）转染了IG基因座和HDR模板，以敲击所需的插入物和抗生素耐药性基因。通过施加抗生素压力，在遗传和蛋白质水平上扩展并表征抗性克隆，以产生改良的mAb而不是亲本蛋白。最后，修饰的抗体在功能测定中的表征。To demonstrate the versatility of our strategy, we illustrate this protocol with examples where we have (i) exchanged the constant heavy region of the antibody, creating chimeric mAb of a novel isotype, (ii) truncated the antibody to create an antigenic peptide-fused Fab' fragment to produce a dendritic cell–targeted vaccine, and (iii) modified both the constant heavy (CH)1 domain of the heavy chain （HC）和恒定的Kappa（Cκ）轻链（LC）引入位点选择性修饰标签，以进一步衍生纯化的蛋白质。仅需要标准的实验室设备，这有助于其在各种实验室中的应用。我们希望该协议能够进一步传播我们的技术并帮助其他研究人员。
thinkgrasp：一种愿景语言系统，用于杂乱无章的战略部分抓住
摘要：由于阻塞和复杂的物体排列，机器人抓握在混乱的环境中仍然是一个重要的挑战。我们开发了ThinkGrasp，这是一种插件的视觉语言握把系统，它利用GPT-4O的高级上下文推理来实现沉重的混乱环境抓地策略。thinkGrasp可以通过使用面向目标的语言来指导去除阻塞物体的障碍物，可以有效地识别和产生目标对象的掌握姿势。这种方法可以从中揭示目标对象，并最终以几个步骤和高成功率掌握了目标对象。在模拟和真实的实验中，ThinkGrasp在沉重的混乱环境中或具有多种看不见的物体中取得了很高的成功率，并且表现出强大的概括能力。
基于杂化2D铜/氧化石墨烯氧化石墨烯
P.O.高级纳米光刻研究中心框93019，1090 BA阿姆斯特丹，荷兰。电子邮件：a.m.brower@uva.nl B Zernike高级材料研究所，Rijksuniversiteititit Groningen，Nijenborgh，Nijenborgh 4，9747 AG Groningen，荷兰。 电子邮件： Albert-Einstein-Straße15，12489德国柏林，Physikalisches Institut，Albert-Ludwigs-Universitae Freiburg，Hermann-Hherder-Straße3，79104 Freiburg，德国，德国G Paul Scherrer Institute，Villigen 5232 Box 94157，1090 GD阿姆斯特丹，荷兰†电子补充信息（ESI）可用：XAS Spectra的拟合参数； tinoh的C K边缘吸收光谱；代表性C 1S XAS光谱为裸锡笼计算出来；计算出O K边缘的裸锡笼的XA；图片片段化MS光谱在100 o m/z O 1400范围内；由于C和O K-Edges的Diert元素而引起的吸收横截面；计算出的裸锡氧化笼状态的密度。 来自DFT计算的相关物种的能量。 参见doi：https：//doi.org/10.1039/d3cp05428d‡目前的addres：阿姆斯特丹大学，范·霍维特分子科学研究所，P.O。电子邮件：a.m.brower@uva.nl B Zernike高级材料研究所，Rijksuniversiteititit Groningen，Nijenborgh，Nijenborgh 4，9747 AG Groningen，荷兰。电子邮件： Albert-Einstein-Straße15，12489德国柏林，Physikalisches Institut，Albert-Ludwigs-Universitae Freiburg，Hermann-Hherder-Straße3，79104 Freiburg，德国，德国G Paul Scherrer Institute，Villigen 5232Box 94157，1090 GD阿姆斯特丹，荷兰†电子补充信息（ESI）可用：XAS Spectra的拟合参数； tinoh的C K边缘吸收光谱；代表性C 1S XAS光谱为裸锡笼计算出来；计算出O K边缘的裸锡笼的XA；图片片段化MS光谱在100 o m/z O 1400范围内；由于C和O K-Edges的Diert元素而引起的吸收横截面；计算出的裸锡氧化笼状态的密度。来自DFT计算的相关物种的能量。参见doi：https：//doi.org/10.1039/d3cp05428d‡目前的addres：阿姆斯特丹大学，范·霍维特分子科学研究所，P.O。Box 94157，1090 GD阿姆斯特丹，荷兰§§当前的addres：柏林合作伙伴经济和技术GmbH，Fasanenstrasse 85，10623柏林，德国柏林。