预印本(未经同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此版本的版权所有者于 2023 年 2 月 13 日发布。;https://doi.org/10.1101/2023.01.09.523031 doi:bioRxiv 预印本
病毒感染的系统性传播促进了编辑成分在植物组织内的积累。这导致了高效和快速的基因组编辑,从而为评估单向导 RNA (sgRNA) 设计的有效性和特异性提供了理想的筛选工具。几种基于植物 RNA 病毒的复制子已成功用于在组成性表达 Cas9 核酸酶的转基因植物中传递 sgRNA。9–19 然而,每种病毒载体都有自己的分子生物学特性,并且仅限于特定的宿主范围。在这里,我们描述了两种源自马铃薯病毒 X (PVX;Potexvirus 属) 和烟草脆裂病毒 (TRV;Tobravirus 属) 的病毒载体的工程改造,用于在模型物种本氏烟中传递非间隔 sgRNA(图 1)。所提出的 PVX 系统由单个二元载体 pLX-PVX 组成,该载体包含 PVX 基因组序列和一个来自竹花叶病毒 (BaMV) 的异源亚基因组启动子以驱动插入表达 (图 2)。TRV 系统依赖于 pLX-TRV1 和 pLX-TRV2,这是两个具有兼容来源的 T-DNA 载体,可同时进行病毒基因组成分的农杆菌接种 (JoinTRV)。pLX-TRV1 提供复制酶功能,而 pLX-TRV2 包含一个工程化的 TRV RNA2 序列和一个来自豌豆早褐病毒 (PEBV) 的异源亚基因组启动子以驱动插入表达 (图 2)。这两个病毒系统均基于 pLX 系列的紧凑 T-DNA 二元载体20,这些载体已成功用于通过农杆菌介导的接种 (农杆菌接种) 启动 RNA 和 DNA 病毒感染。 21–23 重组病毒复制子与 sgRNA 构建体组装并通过农杆菌接种递送到表达 Cas9 的植物中。系统性病毒感染导致生殖系基因组编辑和编辑后代的恢复(图 1)。
液氮 n/an/a 关键商业检测 NEBuilder® HiFi DNA 组装预混液 New England Biolabs E2621S BsaIHF®v2 (20 U/µL) New England Biolabs R3733S Phusion TM 高保真 DNA 聚合酶 Thermo Fisher Scientific F530S MluI (10 U/µL) Thermo Fisher Scientific ER0561 ApaI (10 U/µL) Thermo Fisher Scientific ER1411 XhoI (10 U/µL) Thermo Fisher Scientific ER0691 EcoRI (10 U/µL) Thermo Fisher Scientific ER0271 RevertAid TM 逆转录酶 Thermo Fisher Scientific EP0441 RiboLock RNase 抑制剂 (40 U/μL) Thermo Fisher Scientific EO0381 NucleoSpin® 质粒试剂盒 Macherey-Nagel 740588.250 Zymoclean 凝胶 DNA 回收试剂盒 Zymo Research D4001 Zymo-Spin I Zymo Research C1003-250 嗜热菌 (Tth) DNA 聚合酶 Biotools 10.003 寡核苷酸 D1789 GGGAATCAATCACAGTGTTGGC
摘要:发展中国家的养禽业仍然面临着鸡伤寒的巨大威胁,这种疾病由鸡沙门氏菌引起,在经济较发达国家已得到较好的控制。除了大型毒力质粒 (85 kb) 表现出的毒力外,鸡沙门氏菌致病岛 2 还通过其 III 型分泌系统 (TTSS) 在介导疾病方面发挥关键作用。TTSS 分泌效应蛋白穿过含有沙门氏菌的液泡,并通过调节囊泡通道介导细菌的内化。在本研究中,使用 CRISPR/Cas9 和 lambda 重组系统通过同源定向修复,成功从本土分离的鸡沙门氏菌基因组中删除编码 III 型分泌系统的候选毒性 ssaU 基因 (~1 kb)。基于 CRISPR/Cas9 的家禽鸡沙门氏菌基因组编辑此前尚未见报道,这可能与其遗传工具效率低下有关。这是首次展示从该细菌基因组中完全进行基于 CRISPR/Cas9 的基因删除的研究。更重要的是,采用家禽实验模型评估了该突变菌株 (∆ ssaU_ S G18) 的毒力潜力,与野生型菌株相比,该突变菌株无法在实验攻毒的鸟类中产生任何死亡率。在我们的攻毒模型中,没有观察到对体重增加的影响,而细菌无法在肠道和肝脏中定植。突变菌株体内毒力的丧失使该系统具有出色的功能,可用于开发针对这种耐药性和致病性细菌的活疫苗。
摘要:本文论证了量子引力中不存在全局对称性与黑洞信息问题的幺正解之间存在密切联系。特别是,我们展示了如何利用最近对蒸发黑洞 Page 曲线计算的基本要素,将最近反对 AdS/CFT 对应之外的全局对称性的论点推广到更现实的量子引力理论。我们还给出了几个低维量子引力理论的例子,这些理论在通常意义上没有黑洞信息问题的幺正解,因此可以而且确实具有全局对称性。受此讨论的启发,我们推测在某种意义上,欧几里得量子引力等同于全息术。
摘要:制造热管热交换器并测试以在低温应用中重新捕获热能。所使用的传热液具有悬浮在水中的氧化锌的纳米颗粒。在不同的质量流速下,评估了排列的热传输性能。更改了用于特定热量输入的冷气流的质量通量,并记录了观测值。热量输入值从25 W增加到1500 W,而空气流量从0.047增加到0.236 m 3 /s。以0.047 m 3 /s的流速为1500 W的最大有效性为0.28。研究了传热系数的变化,以改变所提供空气的空气流量和源温度的变化。发现传热系数随源温度而增加。由于引入纳米颗粒,性能的增强被认为是更好的热导率。
1990 年代第一次卡拉巴赫战争后,亚美尼亚与阿塞拜疆之间的冲突成为国际媒体大规模报道的主题。然而,在第二次卡拉巴赫战争(2020 年 9 月 27 日至 11 月 10 日)之前,两国之间的冲突没有受到主流媒体的关注,只有少数专职记者进行了报道。尽管亚美尼亚和阿塞拜疆媒体将战争报道限制在两国国防部提供的信息范围内,国际媒体组织也因此依赖这些信息,但后者在长期灌输的东方主义、恐突厥主义和恐伊斯兰主义观念的影响下仍然歪曲了局势。同时,他们中的一些人受到亚美尼亚侨民和政府的影响,另一些人受到信奉“基督教团结”、强调宗教方面的宗教原教旨主义者的影响,尽管冲突不是由信仰问题引起的。
1990 年代第一次卡拉巴赫战争后,亚美尼亚与阿塞拜疆之间的冲突成为国际媒体大规模报道的主题。然而,在第二次卡拉巴赫战争(2020 年 9 月 27 日至 11 月 10 日)之前,两国之间的冲突没有受到主流媒体的关注,只有少数专职记者进行了报道。尽管亚美尼亚和阿塞拜疆媒体将战争报道限制在两国国防部提供的信息范围内,国际媒体组织也因此依赖这些信息,但后者在长期灌输的东方主义、恐突厥主义和恐伊斯兰主义观念的影响下仍然歪曲了局势。同时,他们中的一些人受到亚美尼亚侨民和政府的影响,另一些人受到信奉“基督教团结”、强调宗教方面的宗教原教旨主义者的影响,尽管冲突不是由信仰问题引起的。
为了减轻 COVID-19 大流行的影响,COVID-19 疫苗的研发和接种速度创下了历史新高。疫苗犹豫对不同群体的接种影响不均等。本研究探讨了英国少数族裔群体疫苗犹豫的驱动因素、社交媒体对疫苗犹豫的影响以及如何克服疫苗犹豫。研究对来自英国少数族裔且自认为对疫苗犹豫不决的参与者进行了 12 次半结构化访谈、编码和主题分析。社交媒体在疫苗犹豫中发挥了重要作用。对于那些自认为健康的人来说,在社交媒体上看到有关 COVID-19 疫苗接种极端副作用的错误信息会让他们认为接种疫苗的风险大于感染 COVID-19 的风险。对于女性而言,社交媒体上有关生育的错误信息是推迟或不接种疫苗的原因。在社交媒体之外拥有可信赖信息来源的参与者更有可能选择接种疫苗。这项研究确定了英国少数族裔群体对疫苗犹豫的广泛看法。诸如旅行意愿和积极的公共卫生信息等促成因素可以增加疫苗接种率,而缺乏可信赖的信息来源可能会导致疫苗犹豫。需要进一步研究来打击错误信息和阴谋论。有效的方法包括积极回应和反驳错误信息。为了制定一个减少健康不平等的包容性疫苗接种计划,政策制定者应该在边缘化社区中建立信任,并通过量身定制的公共卫生信息解决他们的担忧。
2022 年 2 月 24 日,俄罗斯从北、东、南三面对其西南邻国乌克兰发动了入侵,标志着正在进行的俄乌冲突灾难性升级。此次入侵立即引起了全球媒体的关注。玛丽亚·雷普尼科娃 (Maria Repnikova) 和温迪·周 (Wendy Zhou) (2022) 等政治学家迅速指出,俄罗斯方面似乎得到了中国官方和民众的支持。然而,尽管中国政府的沟通方式含糊不清,但中国社交媒体却更加公开地支持俄罗斯。作为一名密切关注中国当前政治气氛的中国女权主义研究者,我理解中国民族主义者对俄罗斯挑战美国领导的联盟的情绪化评价,这既是承认中国唯一的主要盟友是俄罗斯,也是通过口语化和挑衅性的帖子来规避官方的审查和监视。然而,最让我震惊的是我的同胞的亲俄评论甚至亲乌克兰回应中的性别歧视和种族歧视性质,这些评论不断出现在我的个人社交媒体上。为了保护亲人,我选择不干预或参与这些揭示中国男性民族主义者对乌克兰和俄罗斯身体的凝视的社交媒体对话。相反,我在这篇对话文章中只提供了一种想象中的回应,通过性别来看待这种数字厌女症和种族主义。