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World File Search System合酶
丝氨酸整合酶 BxbI 高度增强人类多能干细胞中的转基因整合
现代基因组工程技术已经能够以有针对性的方式对哺乳动物细胞进行改造，从单核苷酸改变到插入更大的转基因有效载荷。然而，利用靶向核酸酶（如 CRISPR/Cas9）的方法依赖于细胞 DNA 修复机制进行同源定向修复介导的整合，需要产生暴露的 DNA 双链断裂 (DSB)，在插入较大的 DNA 货物时效率极低，并且经常导致不必要的编辑结果 1–4 。人类多能干细胞 (hPSC) 通过整合治疗有效载荷基因并分化为所需的细胞类型，为细胞治疗应用提供了巨大的潜力 5–8 然而，hPSC 特别难以工程化，因为它们易受 p53 介导的 DNA 损伤反应诱导的细胞凋亡的影响 9,10 。丝氨酸整合酶（例如 BxbI）不依赖于细胞机制并且不被认为产生暴露的 DSB，因此最近它们已被用于成功地将大有效载荷整合到 hPSC 中，既直接整合到预先设计的着陆垫中 11-13 ，也与 Cas9 介导的靶向结合使用 14-16 。通过整合选择标记 11,17,18 ，可以生成 100％ 工程化的 hPSC 群体，但是如果没有选择，报告的靶向效率仍然非常低，通常低于 1％ 13,18 。许多应用将受益于 hPSC 中大有效载荷的更高整合效率，因此一直在努力开发更有效的 BxbI 蛋白，但是到目前为止，这些努力仅导致 hPSC 靶向效率达到 3.8％ 16,19 。在本研究中，我们着手测试是否可以通过优化核苷酸序列、递送方法和抑制 p53 通路来提高 BxbI 整合酶在 hPSC 中的靶向效率。
使用快速灵敏的 SYBR® green 定量聚合酶链式反应检测法对患有胃肠炎的犬进行犬细小病毒 2 的分子检测和定量分析
1. 美洲大学（UDLA）研究总局研究实验室，安提瓜 Vía a Nayón S/N，基多 EC 170124，厄瓜多尔； 2. 美洲大学（UDLA）工程与应用科学学院生物技术工程项目，安提瓜 Vía a Nayón S/N，基多 EC 170124，厄瓜多尔； 3. 厄瓜多尔基多美洲大学（UDLA）健康科学学院兽医学项目，Antigua Vía a Nayón S/N，基多 EC 170124，厄瓜多尔； 4. 农业产业与环境科学学院。农业生涯。卡尔奇州立理工大学 (UPEC)。 Antisana S/N 和 University Avenue，图尔坎 EC 040102，厄瓜多尔； 5. 罗萨里奥国立大学（UNR）兽医学院。奥维迪奥拉各斯大道和 33 号公路卡西尔达 – 圣达菲 – 阿根廷； 6. 厄瓜多尔中央大学兽医学与畜牧学院，厄瓜多尔基多，Gatto Sobral 和 Jerónimo Leiton，基多 EC 170521，厄瓜多尔； 7. 美洲大学（UDLA）教学兽医诊所，Shuara 街 N40-55 和 De Los Granados 大道，基多，EC 170503，厄瓜多尔； 8. 美洲大学（UDLA）“一个健康研究小组”，安提瓜 Via a Nayón S/N，基多 EC 170124，厄瓜多尔。通讯作者：Luis Nuñez，电子邮件：fabiann7@yahoo.es 共同作者：ALG：a.abel.loor.giler@gmail.com，SCR：sara.castillo.reyes@udla.edu.ec，SSP：silvanahsp@yahoo.com，MC：rolando.campos@upec.edu.ec，RMP：rpmena@uce.edu.ec，SPC：sdpch2021@gmail.com 收稿日期：2024 年 5 月 8 日，接受日期：2024 年 9 月 11 日，在线发表日期：2024 年 10 月 17 日
可以合成本身和互补链的聚合酶核酶
图1。三个小聚合酶核酶基序的发现和进化。（a）选择构造的格式用于初始选择回合（回合1至3或1至5），库是通过柔性链接器链接到杂交标签的六聚体标签的。生物素化引物可以捕获活性连接酶（在图中进行了详细描述S1-S2）。（b）在后期回合中使用的选择构建体的格式（3至11或5至11），需要三磷酸化的三核苷酸（Triplet）底物的聚合。在选择过程中，三胞胎（xxx）的序列（xxx）和由模板（x'x'x'）编码的三重态数（y）在选择过程中变化（表S1中的详细信息）。（c）序列和预测从显示迭代三重三重连接的库中发现的三个核酶的二级结构，即三重酶聚合酶活性。在绿色中，源自随机库部分的核苷酸。在灰色的核苷酸中，源自恒定区域（接头和引物结合位点）。（d）在（b）中显示的（c）中显示的核酶的迭代三重聚会聚合，带有xxx = gcg和x'x'x'= cgc，y = 3。反应条件：50 nm核酶 - 基底，50 nm引物BCY3P10GA，50 nm模板T6FP10GAGCG3，5μMPPPGCG三胞胎，0.05％Tween 20，200 mm Kcl，50 mm Kcl，50 mm mgcl 2，50 mm mgcl 2，50 mm ches-koh，ph 9，3天，3天，以-77°°°°°°°°核酶与模板杂交。（E）序列和预测源自1-40克隆的QT51核酶的二级结构。黑色圆圈表示从1-40个祖先序列突变的6个残基；三角形表示2-核苷酸缺失。（f）60核苷酸序列的合成，该序列由CGU三重态的20个重复组成。Reaction conditions: 0.25 μM primer F10, 0.25 μM template tP10CGU20, 0.25 μM ribozyme, 10 μM pppCGU triplet, QT51 in 0.05% Tween 20, 50 mM MgCl 2 , 50 mM CHES-KOH, pH 9, 5TU+t1.5 in 200 mM MgCl 2 , 50 mM Tris-Cl, pH 8.3, 2 weeks在-7°C冷冻。核酶未与模板杂交。
RNA 聚合酶 II 是 DNA 分叉进展的极性障碍
DNA 复制和转录同时发生在同一 DNA 模板上，导致复制体和 RNA 聚合酶之间不可避免地发生冲突。这些冲突会阻碍复制叉并威胁基因组稳定性。尽管许多研究表明正面冲突比同向冲突更有害，也更容易促进 R 环形成，但 RNA 聚合酶障碍极性的根本原因仍不清楚，这些 R 环的结构也只是推测。在这项工作中，我们使用一个简单的模型系统来解决这个复杂的问题，通过检查 Pol II 障碍到通过机械解压缩前进的 DNA 叉来模拟复制体的进展。我们发现，即使转录本大小最小，Pol II 也能更稳定地结合以抵抗正面配置中的移除，这表明 Pol II 障碍具有固有的极性。然而，具有长 RNA 转录本的延长 Pol II 在保留极性的同时成为更强大和持久的障碍，而 RNA-DNA 杂交的形成介导了这种增强。令人惊讶的是，我们发现当 Pol II 与 DNA 叉正面碰撞并回溯时，RNA-DNA 杂合体会在 Pol II 前方的滞后链上形成，形成拓扑锁，将 Pol II 困在叉上。TFIIS 通过切断 Pol II 与杂合体的连接来促进 RNA-DNA 杂合体的去除。我们进一步证明，当 Pol II 仍与 DNA 结合时，这种 RNA-DNA 杂合体可以通过 T7 DNA 聚合酶引发滞后链复制。我们的研究结果捕捉到了 Pol II 与 DNA 叉相互作用的基本特性，揭示了转录-复制冲突的重要意义。
M0273 - Taq DNA 聚合酶与标准 Taq 缓冲液
编制 SDS 所用数据的主要参考文献和来源：美国有毒物质与疾病登记署 (ATSDR) 美国环境保护署 ChemView 数据库 欧洲食品安全局 (EFSA) 美国环境保护署急性接触指导水平 (AEGL) 美国环境保护署联邦杀虫剂、杀菌剂和灭鼠剂法案 美国环境保护署高产量化学品 食品研究杂志危险物质数据库 国际统一化学信息数据库 (IUCLID) 国家技术与评估研究所 (NITE) 澳大利亚国家工业化学品通报与评估计划 (NICNAS) 澳大利亚工业化学品引进计划 (AICIS) NIOSH（国家职业安全与健康研究所） 美国国家医学图书馆的 ChemID Plus (NLM CIP) 美国国家医学图书馆的 PubMed 数据库 (NLM PUBMED) 美国国家毒理学计划 (NTP) 新西兰化学品分类和信息数据库 (CCID) 经济合作与发展组织环境、卫生与安全出版物经济合作与发展组织高产量化学品计划经济合作与发展组织筛查信息数据集世界卫生组织
聚合酶链反应（PCR）
•离心机/微型/微型旋转 - 用于确保样品/试剂位于管/板的底部，在某些过程中，用于分离混合物的成分成分。•机器人 - 用于自动化某些技术。•涡流 - 用于混合试剂或样品。•热块 - 用于在特定温度下保持样品/反应。•移液器 - 用于转移液体的设定体积。•溢出套件 - 用于清理较大的试剂溢出。•手套 - 用于保护用户和样品。•实验室外套 - 用于保护用户和样品；不使用时需要挂起实验室外套，并经常洗涤以确保它们干净。
DNA聚合酶theta活性测定试剂盒
如果将抑制剂化合物溶于水中，则使化合物的溶液比1倍测定缓冲液中的最终浓度高5倍（因为您将在25 µL反应中添加5 µL）。然后，从该溶液到您首选的浓度中的1倍测定缓冲液中进行一系列稀释液。如果将抑制剂化合物溶解在DMSO中，则比您要在DMSO中测试的最高浓度高100倍。然后在1倍测定缓冲液中进行20倍稀释（在此步骤中，化合物浓度比最终浓度高5倍，而DMSO浓度为5％）。然后，从该溶液到您首选的浓度中的5％DMSO中的5％的DMSO稀释。由于将5 µL的化合物溶液添加到25 µL反应中，因此所有反应中DMSO的最终浓度均为1％。3。准备DNA pol theta溶液。
PrimeSTAR™ MAX Ver.2 DNA 聚合酶
促销代码：TKPRIMESTARV2Q324。促销有效期至 2024 年 10 月 31 日 不适用于预先协商的价格和运费，包括报价、长期订单协议和采购目录协议。所有价格均不含商品及服务税。下订单时请参考促销代码。运费适用。价格如有变动，恕不另行通知。请联系 Scientifix 了解更多产品信息、定价或索取报价。如需客户服务，请致电 1800 007 900 或发送电子邮件至 info@scientifix.com.au。更多信息请访问 www.scientifix.com.au
目的构建的逆转录酶和TAQ DNA聚合酶在存在抑制剂的情况下可提供高产量
分子诊断（MDX）应用的许多进步是建立在新型酶的工程上的，这些酶允许访问以前无法捕获的信息。为了满足对高度功能和专用的酶促工具的不断发展的需求，我们利用了酶工程平台的组合，包括专有平台，该平台使我们能够选择具有基因组学和分子诊断应用的功能。我们的平台可以使多种DNA和RNA修改的酶进行工程，这些酶利用大规模的，无假设的文库作为选择输入，以增强酶活性和/或引入新型活动。我们介绍了有关逆转录酶（RT）和TAQ DNA聚合酶（TAQ DNAP）的工程工作的数据 - 两种通常用于检测患者样品中的RNA和/或DNA病毒的酶以进行护理点（POC）诊断。我们的屏幕确定了RT变体，具有增加的热稳定性和对抑制剂和TAQ DNAP变体的耐受性，对抑制剂的速度和耐受性提高。
抑制剂和5-脂氧合酶之间的相互作用
摘要：炎症是由外部刺激触发的一种保护应力反应，5-脂氧合酶（5LOX）作为白细胞素（LTS）炎症途径的有效介质起着关键作用。Nordihydroguaiarovicac（NDGA）充当5LOX的天然正常抑制剂，而3-乙酰基-11-酮β-β-β-β-β-oboswordic Acid（AKBA）起着天然的变构抑制剂的靶向5LOX。但是，抑制的确切机制尚不清楚。在这项研究中，使用高斯加速分子动力学（GAMD）模拟来阐明5LOX上NDGA和AKBA的抑制作用机制。发现正构抑制剂NDGA紧密结合在蛋白质的活性口袋中，占据了活性位点，并通过竞争性抑制抑制了5LOX酶的催化活性。变构抑制剂AKBA的结合引起了远端活性位点的显着变化，从而导致残基168-173从环向α-螺旋变为α-螺旋，以及残基285-290和375-400之间的显着负相关运动，从而减少了这些细分之间的距离。在模拟中，蛋白质稳定构象中的活性腔体积减少，阻碍了底物进入活性腔，从而通过变构效应抑制了蛋白质活性。最终，Markov状态模型（MSM）用于识别和分类蛋白质的亚稳态状态，从而揭示了不同构象状态之间的过渡时间。总而言之，这项研究提供了Akba和NDGA对5LOX抑制机制的理论见解，为开发专门针对5LOX的新型抑制剂提供了新的观点，对抗炎药发育具有潜在的影响。