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CRISPR/Cas 与核糖核蛋白复合物和瞬时选择端粒载体可在灰葡萄孢菌中实现高效的无标记和多重基因组编辑
CRISPR/Cas 已成为多种生物体中遗传操作的最先进的技术，能够以前所未有的效率进行有针对性的遗传改变。本文中，我们报告了在重要的坏死性植物病原体灰霉病中首次建立强大的 CRISPR/Cas 编辑，该方法基于将优化的 Cas9-sgRNA 核糖核蛋白复合物 (RNP) 引入原生质体。通过开发一种将 RNP 递送与含端粒的瞬时稳定载体共转化相结合的新策略，进一步提高了编辑产量，从而允许临时选择和方便地筛选无标记编辑事件。我们证明，与现有的基于 CRISPR/Cas 的丝状真菌方法（包括模型植物病原体稻瘟病菌）相比，这种方法提供了更高的编辑率。编辑菌株的基因组测序显示很少有额外的突变，也没有 RNP 介导的脱靶证据。端粒载体介导编辑的高性能通过随机诱变 sdhB 基因的 272 个密码子得到证实，该基因是琥珀酸脱氢酶抑制剂 (SDHI) 杀菌剂抗性的主要决定因素，方法是将 272 个密码子批量替换为编码所有 20 种氨基酸的密码子。在没有选择的情况下，所有交换的频率都相似，但 SDHI 选择允许识别新的氨基酸替换，这些替换赋予了对不同 SDHI 杀菌剂的不同抗性水平。基于 RNP 的共转化效率提高且易于操作，有望加速 B . cinerea 和其他真菌的分子研究。
口服头孢曲霉轴，头孢菌素和头孢菌素是否足以治疗静脉治疗后切换后不复杂的急性吡咯肾炎？药代动力学/药效学角度
全国多中心研究。诊断微生物感染。2010; 67：251–60。16。Kresken M，Körber-Irrgang B，Biedenbach DJ，Batista N，Besard V，CantónR等。在三个欧洲国家，口服抗菌剂对肠杆菌的口服抗菌剂的比较性活性。临床微生物感染。2016; 22，3.e1–63.e5。 17。 Craig WA。 药代动力学/药效学参数：小鼠和男性抗菌剂量的基本原理。 临床感染。 1998; 26：1-12。 18。 drusano gl。 抗菌药效学：“虫和药物”的批判性相互作用。2016; 22，3.e1–63.e5。17。Craig WA。 药代动力学/药效学参数：小鼠和男性抗菌剂量的基本原理。 临床感染。 1998; 26：1-12。 18。 drusano gl。 抗菌药效学：“虫和药物”的批判性相互作用。Craig WA。药代动力学/药效学参数：小鼠和男性抗菌剂量的基本原理。临床感染。1998; 26：1-12。 18。 drusano gl。 抗菌药效学：“虫和药物”的批判性相互作用。1998; 26：1-12。18。drusano gl。抗菌药效学：“虫和药物”的批判性相互作用。
CRISPR/Cas 与核糖核蛋白复合物和瞬时选择端粒载体可在灰葡萄孢菌中实现高效的无标记和多重基因组编辑
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