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项目:您将研究人类脑微脉管系统的结构,特别关注或不存在所谓毛细管括约肌的存在。这些是毛细血管的高收缩入口点,其收缩由周细胞或周细胞样细胞驱动。我们设想您将剪切和处理包含带有动脉和毛细管侧枝的完全穿透动脉单位的人脑样品。挑战是切割足够厚的组织块以在3D中成像这些结构,同时仍允许免疫染色和微观成像。这将允许您识别各种容器类型并测试是否确实存在此类括约肌,如果存在,它们的尺寸是什么以及是否涉及周细胞。
近年来,微/纳米级材料结构的合理设计引起了人们的极大兴趣,因为它们可以改变材料的物理性质。例如,垂直排列的纳米线(NW)可以调节表面的光学性质,因为它们的几何形状(直径、高度、间距)可以调整光的约束和吸收。因此,光伏应用对光收集能力的提高有着很大的需求。1碳纳米管(CNT)阵列可以构建高密度的3D集成电路架构。不同功能层(如传感、存储、处理)2之间的连接性空前增强,这非常适合用于物联网(IoT)等数据密集型技术。对于上述所有实现以及其他实现,在处理密集排列的1D纳米结构阵列时保持垂直方向是至关重要的。然而,不同的制造步骤可能会偏离这一期望方向。据报道,例如,在通过扫描电子显微镜进行表征时,暴露于电子束会使半导体纳米线弯曲,随后形成纳米线束。3 – 6 涉及湿法蚀刻或清洗的程序也会导致纳米线 7 – 9 和碳纳米管的垂直排列重新成形。在所有这些情况下,都会发生干燥步骤,其中相邻纳米柱之间的毛细管弯月面会产生横向力,可能使它们接触 10,11 并最终组装在一起。
简介本手册的目的是介绍对成像数据的可靠和准确的神经解剖学分割的程序。这些过程使用3D Slicer软件平台,其中已经开发了特定的分割模块。该模块基于基于MRI的体积形态学或体积的创始人(Caviness。等,1999)。 体积形态计量学始于1987年的形态分析中心(CMA)马萨诸塞州综合医院(MGH),后来用于验证自由度自动化体积方法学(Fischl等,2002,2004)。 原始的基于MRI的体积分析的CMA方法使用了一个名为CardViews的自定义设计的软件平台。 为卡片视图开发的工具和程序,这些工具和过程融合了半自动化和手动编辑,已作为特定的神经分组模块改编为3D切片机环境。 该模块设计为与本手册中描述的程序一起使用,以执行皮层大脑结构的半自动化和手动编辑。 基于MRI的体积分割的神经解剖学和计算原理术语分割一词在神经解剖学和基于MRI的计算处理中具有不同的含义。 分割通常是构成构成感兴趣区域(ROI)的一组元素(例如细胞或体素)的划分,并分配了识别标签向该区域。 在神经解剖学中,分割涉及直接可视化大脑区域的描述和鉴定,这些区域使用结构性的生物学标准标记。等,1999)。体积形态计量学始于1987年的形态分析中心(CMA)马萨诸塞州综合医院(MGH),后来用于验证自由度自动化体积方法学(Fischl等,2002,2004)。原始的基于MRI的体积分析的CMA方法使用了一个名为CardViews的自定义设计的软件平台。为卡片视图开发的工具和程序,这些工具和过程融合了半自动化和手动编辑,已作为特定的神经分组模块改编为3D切片机环境。该模块设计为与本手册中描述的程序一起使用,以执行皮层大脑结构的半自动化和手动编辑。基于MRI的体积分割的神经解剖学和计算原理术语分割一词在神经解剖学和基于MRI的计算处理中具有不同的含义。分割通常是构成构成感兴趣区域(ROI)的一组元素(例如细胞或体素)的划分,并分配了识别标签向该区域。在神经解剖学中,分割涉及直接可视化大脑区域的描述和鉴定,这些区域使用结构性的生物学标准标记。相比之下,在MRI分析中,使用与成像相关的标准在计算机生成的图像上对大脑结构的描述和鉴定进行了识别。基于MRI的分割的最终目标是将图像切入与神经解剖结构相对应的体素的识别分组。
DNA 损伤反应是细胞维持基因组完整性能力的重要组成部分,它通过对 DNA 损伤作出反应并减轻损伤,或启动不可修复损伤细胞的细胞死亡来维持基因组完整性。癌细胞经常利用这种反应来逃避细胞死亡,从而使突变细胞得以存活,并产生对化疗和放疗等 DNA 损伤剂的治疗耐药性。前列腺癌 (PCa) 细胞经常表现出 DNA 损伤反应基因的改变,包括毛细血管扩张性共济失调突变 (ATM),这与侵袭性疾病表型有关。最近,聚 (ADP-核糖) 聚合酶 (PARP) 抑制的成功已导致临床批准了几种用于治疗转移性 PCa 男性的 PARP 抑制剂,然而,一个关键的限制是耐药性和复发的产生。另一种方法是选择性地靶向 ATM 和毛细血管扩张性共济失调和 Rad3 相关 (ATR),由于它们处于 DDR 的最前沿,因此代表了有吸引力的药理学靶点。研究表明,ATR 抑制可与 PARP 抑制和其他癌症治疗协同作用,以增强抗肿瘤活性。ATM 缺陷是 PCa 的常见特征,ATM 和 ATR 之间存在合成致死关系,ATR 抑制可在 ATM 缺陷的 PCa 细胞中诱导选择性细胞死亡。当前的研究强调了在 ATM 缺陷的前列腺肿瘤中以 ATR 为治疗靶点的可行性,并结合其他治疗方法来提高整体疗效并降低治疗耐药性。ATM 还是一种重要的分子生物标记物,可将患者分层为有针对性的治疗组并帮助预测个性化医疗。
1土耳其伊斯蒂尼大学医学院医学院医学系医学系; oyku.geyik@istinye.edu.tr 2分子癌研究实验室(Isumcrc),伊斯蒂尼大学,伊斯坦布尔34010,土耳其; eulukaya@istinye.edu.tr 3核心研究与预防研究所(ISPRO)核心研究实验室,意大利佛罗伦萨50139; giulia.anichini@gmail.com 4医学系医学系医学院,伊斯提尼大学,伊斯坦布尔34010,土耳其5号,55139佛罗伦萨大学佛罗伦萨大学实验与临床医学系,意大利佛罗伦萨 *通信 *通信 *通信:Fabio.marra@uniifirf.it(f.uniifif。 ); chiara.raggi@unifin );电话。 : +39-05-5275-8128(F.M. ); +39-05-5275-8128(C.R.) †这些作者为这项工作做出了同样的贡献。 ‡这些作者对这项工作也同样贡献。1土耳其伊斯蒂尼大学医学院医学院医学系医学系; oyku.geyik@istinye.edu.tr 2分子癌研究实验室(Isumcrc),伊斯蒂尼大学,伊斯坦布尔34010,土耳其; eulukaya@istinye.edu.tr 3核心研究与预防研究所(ISPRO)核心研究实验室,意大利佛罗伦萨50139; giulia.anichini@gmail.com 4医学系医学系医学院,伊斯提尼大学,伊斯坦布尔34010,土耳其5号,55139佛罗伦萨大学佛罗伦萨大学实验与临床医学系,意大利佛罗伦萨 *通信 *通信 *通信:Fabio.marra@uniifirf.it(f.uniifif。); chiara.raggi@unifin);电话。: +39-05-5275-8128(F.M.); +39-05-5275-8128(C.R.)†这些作者为这项工作做出了同样的贡献。‡这些作者对这项工作也同样贡献。
通讯作者: Jinsei Jung,医学博士,哲学博士,韩国首尔延世大学医学院医学科学研究生院、Brain Korea 21 项目耳鼻咽喉科系;电话:+82-2228-3622;电子邮箱:jsjung@yuhs.ac。 Hyongbum Henry Kim,医学博士,哲学博士,韩国首尔延世大学医学院医学科学研究生院、Brain Korea 21 项目药理学系;电子邮箱:hkim1@yuhs.ac。 Jae Young Choi,医学博士,哲学博士,韩国首尔延世大学医学院耳鼻咽喉科系;电子邮箱:jychoi@yuhs.ac。 Heon Yung Gee,医学博士,哲学博士,韩国首尔延世大学医学院医学科学研究生院、Brain Korea 21 项目药理学系;电子邮件:hygee@yuhs.ac。
摘要:制造密集包装的高位(HAR)垂直半导体纳米结构的强大过程非常重要,可用于微电子,储能和转换。制造这些纳米结构的主要挑战之一是模式崩溃,这是毛细管在制造过程中使用的许多基于溶液的过程造成的损害。在这里,使用一系列垂直硅(SI)纳米圆柱作为测试结构,我们证明,通过溶液相沉积方法可以大大降低图案崩溃,以用自组装的单层(SAM)涂上纳米柱。作为模式崩溃的主要原因是纳米圆柱之间的牢固粘附,我们系统地评估了具有不同表面能量成分不同的SAM,并且表面之间识别的H键构成的H键对粘附具有最大的贡献。解决方案相沉积方法的优点是可以在任何干燥步骤之前实现,这会导致模式塌陷。此外,在干燥后,可以在下一个制造步骤之前使用温和的空气治疗轻松去除这些SAM,从而将干净的纳米表面留在后面。因此,我们的方法提供了一种可轻松和有效的方法,以防止微型和纳米制动过程中干燥引起的模式塌陷。关键字:高敏感纳米结构,图案崩溃,毛细管力,硅烷,自组装单层
图 S1. Kcnq4 W276S/+ 小鼠的静纤毛形态和野生型小鼠耳蜗中的 Kcnq4 表达。图 S2. 靶向 Kcnq4 突变等位基因的候选 sgRNA。图 S3. 优化 sgRNA 以进行体内基因编辑。图 S4. SpCas9 和 sgRNA 的双分裂 AAV 系统。图 S5. 优化体内基因编辑的递送途径。图 S6. SpCas9 在耳蜗毛细胞中的转染。图 S7. 将 AAV 和 RNP 注射到中耳阶的安全性。图 S8. 通过 AAV 注射进行体内基因编辑后 Kcnq4 W276S/+ 中的听觉脑干反应 (ABR) 的特征。图 S9. 通过基因编辑在 Kcnq4 W276S/+ 小鼠中实现 sgRNA 依赖性听力恢复。图 S10。 Kcnq4 W276S/+ 体内基因编辑的长期影响。图 S11。核糖核苷酸复合物 (RNP) 载体的优化和体内表型拯救。图 S12。体内基因编辑对 Kcnq4 W276S/+ 小鼠毛细胞和神经丝的影响。图 S13。体内基因编辑对 Kcnq4 W276S/+ 小鼠神经元存活和毛细胞形态的影响。注 S1。双 AAV 质粒系统的编码序列。电影 S1 的标题。使用铊敏感染料 (FluxOR- Tl +) 在野生型耳蜗的尖转 (6 kHz) 中对外毛细胞进行离体成像。
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