我们描述了一种分析复杂微生物种群遗传多样性的新型分子方法。该技术基于通过变性梯度凝胶电泳 (DGGE) 分离编码 16S rRNA 的聚合酶链式反应扩增基因片段,这些片段的长度相同。对不同微生物群落的 DGGE 分析表明,分离模式中存在多达 10 个可区分的条带,这些条带很可能来自构成这些种群的许多不同物种,从而生成了种群的 DGGE 图谱。我们表明,可以识别仅占总种群 1% 的成分。使用针对硫酸盐还原菌 16S rRNA 的 V3 区特异性的寡核苷酸探针,可以通过杂交分析识别某些微生物种群的特定 DNA 片段。对在有氧条件下生长的细菌生物膜的基因组 DNA 进行分析表明,尽管硫酸盐还原菌具有厌氧性,但它们仍存在于这种环境中。我们获得的结果表明,该技术将有助于我们了解未知微生物种群的遗传多样性。
处理化学药品和生物剂时,您需要始终穿安全设备,包括实验室外套,手套和安全护目镜。虽然用于小麦感染的主要生物学剂是澳大利亚常见的病原体,但您必须将它们视为普遍关注的感染剂。谨慎对待他们。请勿将其从实验室中删除。不要通过衣服散布它们。使用专用的笔记本和笔在迷你研究项目中做笔记。在实验室中不要将任何东西放在嘴里。每次离开实验室时洗手。
Théo Liénard——市长、Myriam Taverna、Stéphanie Descroix、Thanh Duc Mai。用于样品处理、分离和定量的微尺度电泳中的液滴接口策略:综述。 Analytica Chimica Acta,2021,1143,第 281-297 页。�10.1016/j.aca.2020.09.008�。 �第 03493600 页�
出版日期:2025/01/28摘要:十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是蛋白质分析中的基石技术,可根据其分子量提供精确的蛋白质分离和蛋白质的表征。本综述提供了SDS-PAGE的全面概述,作为Western印迹分析的关键一步,重点讨论了其在营养研究和食品质量评估中的应用。本文强调了SDS-PAGE在识别和量化饮食蛋白,评估蛋白质修饰以及评估各种食品基质中功能蛋白的完整性中的作用。特别强调实验参数的优化,例如凝胶组成,样品制备和电泳条件,以确保在复杂的蛋白质混合物中高分辨率和可重复性。此外,该评论探讨了SDS-PAGE协议中最新的进步,包括提高检测灵敏度和与下游分析的兼容性。通过解决常见的技术挑战并提出最佳实践,这项工作旨在在食品和营养科学的背景下提高SDS-PAGE的可靠性和准确性,为其在蛋白质表征,过敏原检测和质量控制中继续使用铺平道路。关键字:SDS-PAGE;蛋白质表征;分子量分离;食品和营养科学;电泳优化。如何引用:Omogbolahan Samson Idowu; David Oche Idoko; Samuel O. Ogundipe;伊曼纽尔·门萨(Emmanuel Mensah)。(2025)。在营养研究和食品质量评估中优化SDS-PAGE以进行准确的蛋白质表征。国际创新科学与研究技术杂志,第10(1)期,1008-1045。 https://doi.org/10.5281/Zenodo.14744563。
鉴定食源性病原体是电泳在食品检测中的主要用途之一。病原微生物,包括细菌、病毒和真菌,是世界各地许多食源性疾病的病因。鉴定这些病原体的传统方法通常需要培养程序,这既费力又需要专用工具。电泳是一种更快捷、更可靠的替代方法。例如,该方法可用于分析病原微生物特有的蛋白质或 DNA 标记。确认病原体存在的有效方法是使用凝胶电泳分离和鉴定从食品样本中分离出的蛋白质或核酸。为了阻止流行病并在食用前保证食品的安全,及时检测至关重要。
背景:宫颈癌是全球第二大死亡原因的性传播疾病之一,占非传染性疾病死亡总数22%的13%。目前,已开发出许多用于诊断宫颈癌的方法,特别是在早期检测方面,旨在尽早发现宫颈癌,其中之一是使用PCR和电泳工具进行分子生物学检测。目的:探讨宫颈癌患者阴道黏膜拭子DNA电泳结果。方法:所采用的研究方法是实验性的。结果:根据记录凝胶的研究结果,在 2 个样本中检测到 HPV DNA 带,由于存在 450 bp DNA 带,因此判定为阳性,在 4 个样本中获得了阴性结果。结论:对6份采用电泳法和凝胶聚焦仪检测的样本进行受访者频率分布分析,检测到2份阳性样本。如果记录凝胶的结果显示 DNA 带,则表示结果呈阳性。根据目标样本,DNA标记产生的DNA带大小为450bp。这表明样本中的 DNA 带大小约为 450 bp。
在包括印度尼西亚在内的几个国家中可以找到丘脑贫血的情况。thalassya是一种遗传疾病,一种类型的thalassysybyβ-tal症,是由染色体上的β-球蛋白链损害造成的11。β-tal骨异常常常与血红蛋白病一起出现,即HBE,这是由β-珠蛋白基因的第26个密码子中的GAG→AAG取代引起的。这项研究旨在通过筛查测试来确定HBE基因的存在或不存在,这些测试使用凝胶电泳方法作为对圣伊丽莎白健康科学学院梅丹的早期检测。使用的研究设计是具有横截面研究方法的描述性定性,样本数为35。结果表明,HB学生水平的平均值的95%在10.84 gr/dl至11.26 gr/dl之间。HBE筛选测试结果电泳凝胶方法是HBE基因中没有可见的谱带,这可能是由几件事引起的,即可能降低DNA纯度的样品,DNA颜色,会影响DNA频段,温度和时间在PCR过程中导致基本功能的可视化。从这些结果中可以得出结论,无法确定圣诞老人伊丽莎白健康科学学院学生的HBE百分比无法确定。
A -1 DNA 降解 —— 避免核酸酶污染。 电泳缓冲液陈旧 —— 电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低, pH 值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效 果。建议经常更换电泳缓冲液。 所用电泳条件不合适 ——电泳时电压不应超过 10 V/cm ,温度小 于 30 ℃,核查所用电泳缓冲液是否有足够的 缓冲能力和凝胶浓度是否正确。 DNA 上样量过多 ——减少凝胶中 DNA 上样量,建议电泳样 品根据孔的宽度加样。 DNA 样含盐过高 ——电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。 有蛋白污染 ——电泳前酚抽提去除蛋白。 琼脂糖质量 ——选用高质量的琼脂糖 (TIANGEN 公司 ) 。
可以通过所谓的单分子方法(例如染色质纤维自显影术[1],动态分子梳理[2],透射电子显微镜[3-5],原子力显微镜[6]和磁性Tweeezer [7,8]来分析具有不同拓扑的DNA分子的DNA分子。DNA特性很难通过计算机模拟[9-13]研究实验上的DNA特性。二维(2D)琼脂糖凝胶电泳是当前可用的最佳实验方法,可以同时鉴定具有不同拓扑的DNA分子[例如,超涂层(SC),catenated(catss),打结(cats)和打结(KN)分子(kN)分子]。该技术由在不同条件下进行的两个连续电泳分离组成,并在两个正交方向上运行(4-8)。在相对较低的电压(〜1 v/cm)下,在低度(〜0.4%)琼脂糖凝胶电泳中解析了第一维。第二维垂直于第一个维度,因此将整个凝胶的整个泳道用作凝胶井的替换,但在高度(〜1%)琼脂糖凝胶电泳(〜5–6.6 V/cm)处的高度(〜1%)琼脂糖凝胶电泳。2D凝胶最初是由Bell和Byers设计的,用于分离分支和线性分子[14],并且早期注意到该方法也可以成功地应用于研究DNA拓扑。2D凝胶被调整以同时检查具有不同DNA拓扑的成千上万个分子,例如SC形式,KN形式,部分复制的形式(命名为前蛋白酶),有或没有反向的叉子,完全重复的Catenanes(Cats)(cats)和复制中间体(RIS),以及包含针(RIS)(RIS)(RIS)[4,6,6,6,6,6,6,6,6,6,6,6,6,6,58]。2D琼脂糖凝胶电泳已广泛用于研究拓扑异构酶体外和体内的活性[29,30]。另外,2D凝胶也可以用作富集特定DNA分子的样品的制备方法,以后可以通过不同的技术进行检查[4,6,18,19,31,32]。质粒是研究DNA拓扑模型的宝贵工具。质粒的优势包括它们的易于分离,以及在纯化的DNA样品中定量测量DNA超串联,打结和搭配的能力[33]。在这里,我们提出了一种协议,其中2D凝胶用于分析三个