摘要 CRISPR-Cas12a 系统已被开发用于在真核细胞中实现高度特异性的基因组编辑。鉴于 Cas12a 基因相对较小,该系统被认为最适用于使用 AAV 载体递送的基因治疗。之前,我们报道了富含 U 的 crRNA 能够通过 CRISPR-Cas12a 系统在真核细胞中进行高效的基因组编辑。在本研究中,我们在 crRNA 富含 U 的 3 ′-突出端的核糖 C2 处引入了甲氧基修饰。当与 Cas12a 效应蛋白混合时,核糖基-2 ′-O-甲基化 (2-OM) 富含 U 的 crRNA 能够提高 dsDNA 的消化率。此外,化学修饰的富含 U 的 crRNA 在小鼠受精卵中实现了非常安全且高度特异性的基因组编辑。工程化的 CRISPR-Cas12a 系统有望促进各种动物模型的生成。此外,工程化的 crRNA 也得到了评估,以进一步改进 CRISPR 基因组编辑工具集。
单位 - I小时:12个微生物学的简介,历史和演变; Antonvan Leeuwenhoek,Joseph Lister,Pasteur,Koch,Jenner,Winogradsky,Winogradsky,Beijerinck的贡献;微生物对人类福利的影响。原核生物和真核细胞的结构。EUBACTERIA,考古细菌和真核生物之间的差异。
学习成果:由于参加本课程,学生应该能够:1。概述了细胞组织,细胞周期和细胞基本功能的概念。2。回忆有关原核和真核细胞组成,结构和功能的知识。3。区分各种细胞器的结构和功能,以及细胞中分子运输的机制。4。评估生物大分子的作用及其对细胞内和细胞间通信的贡献。
6个单位来自:生物学208-生态学生物学原理221-进化机器人的机制205-植物生物学遗传学301的基本原理 - 真核细胞遗传学302的分子遗传学302-真核染色体的遗传学真核染色体的遗传学IMIN IMIN 200-感染和免疫学微生物学265-一般Microbi Z Zool 303-
基于工程或细菌核酸酶,基因组编辑技术的发展开启了直接靶向和修改几乎所有真核细胞中的基因组序列的可能性。基因组编辑通过促进创建更准确的病理过程细胞和动物模型,扩展了我们阐明遗传学对疾病的贡献的能力,并已开始在从基础研究到应用生物技术和生物医学研究的各个领域展现出非凡的潜力。在开发可编程核酸酶方面取得的最新进展,例如锌指核酸酶 (ZFN)、转录激活因子样效应物核酸酶 (TALEN) 和成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) - Cas 相关核酸酶,极大地加快了基因编辑从概念到临床实践的进程。本文回顾了三种主要基因组编辑技术(ZFN、TALEN 和 CRISPR/Cas9)的最新进展,并讨论了其衍生试剂作为基因编辑工具在各种人类疾病和未来潜在疗法中的应用,重点关注真核细胞和动物模型。最后,我们概述了应用基因组编辑平台治疗疾病的临床试验以及实施该技术的一些挑战。
抽象的非编码RNA(CRRNA)是由定期间隔短的短膜重复序列(CRISPR)基因座(CRISPR)基因座和与CRISPR相关的(CAS)的(CAS)的蛋白形成的,形成了crispr-CAS系统形成的复合物,这些复合物形成了与CAS-CataLe creeavage crre creage creeavage crrecry crrecry creeaveage crecrecry crrecry creeavage物质相互作用的相互作用的相互作用的creve criss cospectes。这些核糖蛋白启用的核酸易于编程的靶向促进了基于CRISPR的分子生物学工具的实施,用于体内和DNA和RNA靶标的体外修饰。尽管到目前为止鉴定出靶向DNA的Cas核酸酶的多样性,但在Pyogenes链球菌SPCAS9的天然和工程衍生物是基因组工程中最广泛使用的,至少部分是由于它们的CATA-LECALLYTIC稳健性以及一个异常短的图案(5''-ngg-ngg-3'''Pam)farnk sequence。但是,SPCAS9变体的大尺寸会损害该工具向真核细胞的传递,并且需要较小的替代品。在这里,我们在元基因组中识别与较小的CAS9蛋白(EHCAS9)相关的新的CRISPR-CAS9系统,该系统靶向以5'-NGG-3'PAM为两侧的DNA序列。我们开发了一种简化的EHCAS9工具,该工具专门切割DNA靶标,可用于原核生物和真核细胞中的基因组编辑应用。
1.1活生物体的特征a。定义了以下生命特征:i。细胞组织II。增长与发展iii。代谢IV。稳态诉对刺激VI的反应。改编VII。繁殖b。简要说明如何通过系统中系统的特定功能(即运动,呼吸,消化,吸收,循环,同化,排泄物)成功执行生命的特征。结构性组织的水平a。通过列出增加复杂性的结构水平(即从原子系统到器官系统,构成它们及其主要生理功能的器官,尤其是在人类中)b。根据结构和功能2.单元格:生命的单位 - 结构和功能a。描述了i)原核和真核细胞之间的结构差异,ii)植物和人类细胞b。人类生理学概述a。提供了以下结构和功能的基本概述:i。消化系统 - 器官,消化和吸收II。呼吸系统 - 器官,气体的呼吸,交换和运输III。循环系统 - 血液,淋巴,双循环,心脏活性的调节;高血压,冠状动脉疾病IV。排泄系统 - 尿液形成,肾功能的调节诉肌肉骨骼系统 - 骨骼系统,关节,肌肉,运动VI类型。遗传学和分子生物学a。描述了真核细胞中质膜的结构和功能组织c。识别真核细胞中存在的细胞器并描述其结构和功能d。列表三个主要细胞骨架元件的示例(即微管,中间丝;微丝)e。描述有丝分裂和减数分裂的各个阶段及其生理意义f。描述关键生物分子的结构和功能 - 碳水化合物,蛋白质,脂质和核酸g。描述酶h的作用类型,特性和机理。定义主动和被动运输,并在细胞稳态中陈述其生理相关性3。神经系统 - 神经元,反射动作和感觉接受VII的中央和周围神经系统,结构和功能。内分泌系统 - 各种类型的内分泌腺体;激素作用机理4。描述孟德尔继承的机制;继承理论;基因相互作用b。用相关的示例定义:不完全的主导地位;共同支配;互补基因;多个等位基因c。描述遗传信息的转移及其调节d。在医学中应用人分子遗传学的原理,包括基因工程和分子诊断