在开发高通量测序仪后,环境原核生物群落通常是通过在16S域上用遗传标记来描述的。然而,由于底漆的选择和读取长度,简短读取测序遇到了系统发育覆盖率和分类分辨率的局限性。在这些关键点上,纳米孔测序(一种适用于长读的元编码的上升技术)被低估了,因为其每读的错误率相对较高。在这里,我们比较了模拟社区中的原核生物群落结构和两个对比的红树林遗址的52个沉积物样本,由16SV4-V5标记上的短读描述(Ca。0.4kpb)通过Illumina测序分析(Miseq,v3),由长读细菌对细菌的描述几乎完整16s(Ca。1.5 kpb)由牛津纳米孔(Minion,R9.2)分析。短读和长阅读从模拟中检索了所有细菌属,尽管两者都显示出与所期待的比例相似的偏差。从沉积物样品中,具有覆盖范围的读数稀有性,在单例过滤后,共同恩赐和Procrustean测试表明,从短读和长长读取的细菌社区结构显着相似,表明位点之间的相当对比度和站点内相干的海岸方向是可比的。在我们的数据集中,分别将84.7和98.8%的短阅读分别分别分配给了相同的物种和属,而不是长阅读所检测到的物种和属。长期16的底漆特异性使其能够检测到309个家庭中的92.2%,而在短16SV4-V5检测到的448属中,有87.7%。长阅读记录了973个未检测到的额外分类单元,其中91.7%被确定为该属等级,其中一些属于11个独家门,尽管仅占长期读数的0.2%。
恢复效率和简短读取器套件的尺寸选择性能取决于输入DNA均匀且完全在解决方案中。HMW DNA有时在提取后很难重新启动并导致不均匀样本。,如果与短读取器套件一起使用,此类样品将导致低产量和较短的DNA。如果HMW DNA样品不均匀或包含粘性果冻,我们建议用5-10倍用26克针头进行针头剪切,然后允许DNA在室温下过夜,然后开始选择大小。可以通过进行一式三份浓度测量并验证浓度CV <20%来评估样品同质性。
摘要 - 在简短读取映射的最后一步中,验证了参考基因组上读取的候选位置,以使用序列比对算法从相应的参考段中计算它们的差异。计算两个序列之间的相似性和差异在计算上仍然很昂贵,因为传统上近似的字符串匹配技术继承了具有二次时间和空间复杂性的动态编程算法。我们介绍了Gatekeeper-GPU,这是一种快速准确的预一致过滤器,可有效地减少对昂贵序列比对的需求。Gatekeeper-GPU提供了两个主要贡献:首先,提高了网守的过滤精度(轻巧的预先对准过滤器),其次,利用了由现代GPU的大量GPU螺纹提供的巨大平行性,以快速检查众多序列。通过减少工作,Gatekeeper-GPU提供2.9倍的加速度至序列比对,最高为1。4×加速到全面阅读映射器(MRFAST)的端到端执行时间。Gatekeeper-GPU可从https://github.com/bilkentcompgen/gatekeeper-gpu
摘要:尽管转基因 (GM) 微生物未经授权进入欧洲市场,但各种商业微生物发酵产品中屡屡出现此类污染报告。其中一些污染与用于合成食品蛋白酶的转基因 Bacillus velezensis 有关,目前该菌株的基因组特征仍不完整,尚不清楚这些污染是否有共同的来源。在本研究中,通过短读和长读全基因组测序 (WGS) 对来自多种食品酶产品的转基因 B. velezensis 分离株进行了表征,表明它们含有携带抗菌素耐药性基因的游离重组 pUB110 衍生质粒。此外,单核苷酸多态性 (SNP) 和全基因组比较分析表明,这些分离株可能来自同一亲本转基因菌株。这项研究强调了混合 WGS 方法对 GMM 的精确基因组表征(例如,转基因构建体的基因组位置)的附加价值,以及基于 SNP 的系统基因组学分析对 GMM 的源追踪的附加价值。