摘要 全基因组功能性遗传筛选已成功发现基因型-表型关系并设计新表型。虽然广泛应用于哺乳动物细胞系和大肠杆菌,但在非常规微生物中的使用受到限制,部分原因是无法准确设计此类物种的高活性 CRISPR 向导。在这里,我们开发了一种针对所选生物体(在本例中为产油酵母解脂耶氏酵母)的 sgRNA 设计实验计算方法。在不存在非同源末端连接(主要的 DNA 修复机制)的情况下进行负选择筛选,用于生成 SpCas9 和 LbCas12a 的单个向导 RNA (sgRNA) 活性谱。这种全基因组数据作为深度学习算法 DeepGuide 的输入,该算法能够准确预测向导活性。 DeepGuide 使用无监督学习来获取基因组的压缩表示,然后通过监督学习来映射具有指导活性的 sgRNA 序列、基因组背景和表观遗传特征。全基因组和选定基因子集的实验验证证实了 DeepGuide 能够准确预测高活性 sgRNA。DeepGuide 提供了一种生物体特异性的 CRISPR 指导活性预测因子,可广泛应用于真菌物种、原核生物和其他非常规生物。
秀丽隐杆线虫转录因子 NHR-49 因其在调节代谢过程、应激反应、先天免疫和衰老方面的作用而受到广泛研究。一种以前称为 bah-3 的基因的分子鉴定表明,bah-3 ( dc9 ) 是 nhr-49 的赭色无义等位基因,该基因影响蠕虫对耶尔森氏菌细菌生物膜有害表面附着的敏感性。nhr-49 的其他严重突变也有 Bah 表型,但影响该基因 5' 同工型的缺失并不影响生物膜附着,3' 获得功能错义突变也不影响。其他 bah 基因(bah-1、bah-2、bah-4)编码 GT92 糖基化因子,预计会影响表面涂层。 NHR-49 可能充当一个或多个表面糖基化基因的正转录因子,与其在调节代谢过程中的其他作用相反。
尽管与高等真核生物存在差异,但解脂耶氏酵母由于其基因组较小,为研究复制提供了一个简化的模型,使其成为识别起源指定所涉及的关键步骤和成分的理想系统。在这项研究中,我使用高通量测序、基因操作和生化方法表征了解脂耶氏酵母所有六条染色体上的复制起源。结果揭示了一种新的序列基序 YATR......C.AWTT......Y.YAA,其中包括对 ORC 和 CDC6 结合至关重要的大沟和小沟接触。功能分析证实,破坏这些接触会消除起源活动,强调了该基序在复制起始中的关键作用。结构特征(例如 DNA 弯曲)也被发现对起源功能至关重要,突出了序列背景和结构可塑性在复制起始中的重要性。这些发现弥补了复制生物学中的关键知识空白,使解脂耶氏酵母成为理解真核 DNA 复制的宝贵模型。
一般基金营运支出 广义政府 — 人员编制 149,200 0 0 149,200 0 0 0 149,200 社区服务 — 人员编制 153,300 0 0 153,300 0 0 0 153,300 规划及发展 — 人员编制 6,800 0 0 6,800 0 0 0 6,800 公共安全 — 人员编制 148,300 0 0 148,300 1.00 100,200 0 100,200 248,500 公共工程及工程 — 人员编制 76,750 0 0 76,750 1.00 32,000 0 32,000 108,750 法律费用 45,000 0 0 45,000 0 0 0 45,000 人力资源市场调查 0 50,000 0 50,000 0 0 0 50,000 软件维护/采购 0 44,000 0 44,000 0 0 0 44,000 社区服务运营审查 0 50,000 0 50,000 0 0 0 50,000 无障碍交通 0 0 0 0 0 0 0 0 供暖燃料成本 15,850 0 0 15,850 0 0 0 15,850 垃圾收集 21,000 0 0 21,000 0 0 0 21,000 公共交通 10,000 0 0 10,000 0 0 0 10,000 冬沙 15,000 0 0 15,000 0 0 0 15,000 公民周年纪念 0 0 0 0 15,000 0 15,000 15,000 北极冬季运动会费用 0 0 0 0 0 50,000 50,000 641,200 144,000 0 785,200 2.00 147,200 50,000 197,200 982,400 运营支出削减 应计未来福利减少 (48,000) 0 0 (48,000) 0 0 0 (48,000) 保险费减免 (18,250) 0 0 (18,250) 0 0 0 (18,250) 规划研究 0 (30,000) 0 (30,000) 0 0 0 (30,000) 2006 年一般评估 0 0 0 0 (15,000) 0 (15,000) (15,000) 电力成本 (8,900) 0 0 (8,900) 0 0 0 (8,900) 其他 0 0 0 0 0 0 0 0 (75,150) (30,000) 0 (105,150) (15,000) 0 (15,000)(120,150)
传记 Di Ieva 教授于 2002 年获得医学学位,并于 2007 年在意大利获得神经外科专业学位。2007 年至 2009 年,他担任米兰的神经外科顾问,主要参与脑肿瘤和垂体肿瘤的治疗,与耳鼻喉科和颅颌面外科医生、肿瘤学家和放射肿瘤学家密切合作,并参与神经创伤的紧急处理。2009 年至 2011 年,他还在奥地利维也纳医科大学解剖学和细胞生物学中心担任研究员,并在那里获得临床神经科学博士学位(引入神经病理学和 MRI 的创新方法)。2012 年,他被任命为神经解剖学副教授,并多次受邀在意大利、奥地利、瑞士、德国、美国和阿联酋等多个国家教授神经创伤学和神经外科。 2014 年,Di Ieva 教授在多伦多大学圣迈克尔医院完成了为期 3 年的颅底外科临床和研究奖学金,在那里,他还获得了伽玛刀放射外科方面的进一步经验,并继续在加拿大安大略省最大的创伤中心之一进行急诊神经外科手术。他的多学科经验使他能够领导出版“颅底外科手册”(Thieme,纽约,2015 年),这是全球该领域使用最多的书籍之一。2015 年,Di Ieva 博士搬到悉尼,在那里他进一步从事普通神经外科和复杂脊柱外科工作(主要在麦考瑞大学医院、北岸私立医院和皇家北岸医院以及悉尼基督复临安息日会医院),并于 2017 年获得澳大利亚皇家外科学院的奖学金。他是麦考瑞神经外科和麦考瑞大学医院的全职顾问神经外科医师,也是麦考瑞大学的神经外科教授。临床专长 神经肿瘤学(中枢和周围神经系统肿瘤和癌症的外科和多学科治疗);垂体和颅底手术(包括治疗影响脑神经和颅颈交界处的复杂肿瘤和疾病);疼痛治疗(包括显微血管减压和经皮治疗颅面疼痛和面肌痉挛、周围神经减压、脊柱手术、神经调节);显微神经外科、内窥镜和微创(“锁孔”)神经外科;清醒手术和神经监测;脑积水;神经创伤学,包括脑外伤和脊柱损伤以及脑震荡后患者的多学科管理。 学历
摘要 目的 构建和验证一组含有六种不同标记的解脂耶氏酵母 CRISPR/Cas9 载体,可编辑几乎任何遗传背景,包括野生型菌株的遗传背景。 结果 使用 Golden Gate 方法,我们组装了一组六个 CRISPR/Cas9 载体,每个载体含有不同的选择标记,用于编辑工业酵母解脂耶氏酵母的基因组。此载体组可通过 Addgene 获得。使用 Golden Gate 组装,可以轻松快速地将任何向导 RNA (gRNA) 序列引入这些载体中的任何一个。使用这六个载体中的五种,我们成功地编辑了各种遗传背景(包括野生型菌株)中的六种不同基因。使用这些载体大大改善了特定位点的同源重组和盒式整合。结论我们已经创建了一套多功能、模块化的 CRISPR/Cas9 载体,可以快速编辑任何解脂耶氏酵母菌株;该工具将
在阿联酋,领导层已经勾勒出了一个全新的未来愿景。政府的 2071 百年计划赋予教育机构重大责任,以迎接未来的发展方向。11 该计划概述了发展“一流”教育体系和改革现有教育体系和教学法的必要性。该计划还指出,“鼓励教育机构成为创业和创新的孵化器,并充当国际研究中心”。因此,扎耶德大学必须坚持不懈地完成这一使命。该计划还强调了私营部门在阿联酋青年就业中的作用。自建国以来,阿联酋人一直偏爱公共部门,而大多数外籍人士则在薪酬竞争力较低、要求更高的私营部门工作。政府推出的 NAFIS 计划是一项全面的联邦计划,其中包括改革和财政激励措施,以推动私营部门为年轻和经验丰富的阿联酋人提供工作机会。根据 NAFIS,阿联酋将在 2021 年至 2025 年期间投入高达 240 亿迪拉姆(65.3 亿美元),在私营部门雇用 75,000 名阿联酋公民。其目标是到 2025 年让阿联酋公民占据阿联酋私营部门 10% 的就业岗位。12 因此,如果要实现这些目标,私营部门和教育之间的协调至关重要。技术在教育中的作用日益重要,在疫情期间变得更加重要。13 这些因需要而产生的变化现已成为永久性的变化,教师和学生相信,拥抱技术可以让他们受益匪浅。这种向数字化转型的举措创造了机会。如果学生可以远程学习学位课程,那么理论上他们可以申请世界上任何一所学校。在这种环境下,只有那些不断创新、注重学习质量同时开发独特产品的人才能茁壮成长。
• Joseph Ocran 神父和 Patrick Toole 执事,感谢他们全年在礼拜和圣礼方面的参与、深思熟虑的布道和亲切的帮助; • 我们的圣乐总监和管风琴演奏家 Zac Schurman,他第一次和我们一起过圣诞节,协调、排练并演奏了圣诞音乐,今年的圣诞音乐特别欢乐和美妙。我们感谢才华横溢的歌手和乐器演奏家,特别是我们的主要教区领唱 Kristen Smith Gionfriddo。• 我们圣诞节礼仪司仪团队格外严谨和认真,尤其是那些从大学回家的人。我们的一些司仪也帮助我们装饰教堂迎接圣诞节:Luke 和 Andrew Pavia、John Esteves、Benny Van Tine、Alex Van Tine 和 Patti Pavia。在他们的帮助下,教堂在这个圣诞节显得格外美丽!• 圣诞节弥撒的细节由神学院学生 Sal Orosz 精心监督,他是圣约瑟夫高中的校友,也是费尔菲尔德圣母升天教区的教区居民,目前就读于费城圣查尔斯博罗梅奥神学院。• 和每年一样,我们出色的通讯和数字媒体总监 Kate Gombos 为社交媒体和宣传、公告和教区档案拍摄了一些特别美丽的圣诞节照片和视频。特别感谢 Kate 的儿子 Max Gombos 在午夜弥撒中操作直播摄像机。• 我们的降临节赠礼树始终是我们中最需要帮助的人的快乐和希望之源,由 Eric Vogel 和圣凯瑟琳锡耶纳社会正义和慈善外展团队协调,并由 Katie Miller-Creagh 提供特别协助。与往常一样,Gloria Bender 在装饰标签和组织方面非常有帮助,她还出席了我们的许多圣诞弥撒,热烈欢迎教区居民来到家庭中心和教堂。• 说到欢迎,还要特别感谢我们欢迎团队的所有成员,该团队由 Paul Mayer 领导和协调,他每个周末都会亲自出席我们的许多弥撒。每周,他们对教区居民和客人的微笑和热情问候让每个人都感到宾至如归。• 我们不能忘记我们的读者和工作日早上的圣器保管员 Frank Metrusky、Joe LeMay、Carol Mahar 和 Eric Vogel,以及我们的周日圣器保管员 Alex Van Tine、Daniel Tristine、Christian D'Andrea、Andrew Pavia、Lucas Carson 和 John Esteves。如果我无意中遗漏了任何人,我深表歉意!• 对于组织、宣传、记录保存、设置、分解和后勤协调等无数幕后细节,我们衷心感谢 Bob Cavallero、John Diercksen、Dave Quigley、Ellen Moran、Mary Ellen Kovacs 和 Marianne Stook。