IL-13R α 2阴性细胞G361(左)稳定表达萤火虫荧光素酶作为发光报告基因,命名为G361-Luc。将内源性IL-13R α 2表达的A375黑色素瘤癌细胞和G361-Luc细胞混合物(比例=2:1)接种到96孔板中,每孔4000个细胞,用0/0.1/1/10nM抗体处理6天。用Cell-Titer-Glo®活力测定试剂盒评估细胞活力。与人IgG1对照抗体(右)相比,当细胞混合物与0.1/1/10nM的LM-306孵育时观察到明显的旁观者效应。
图 7 FITC 标记的 EGF-纳米粒子(绿色)的共聚焦成像,显示 HT-1080 细胞的细胞摄取(蓝色:Hoechst)(每个时间点:顶行 = 20 X,底行 = 63 X;比例尺:20 μ m [20 X] 和 10 μ m [63 X];20 X 和 63 X 图像是在不同的视野 (FoV) 下拍摄的,因此每个细胞中的纳米粒子密度不能直接比较)。EGF,表皮生长因子;FITC,荧光素-5-异硫氰酸酯。
目的:使用超声成像扫描仪进行原位药物输送可以大大简化治疗并提高其特异性。我们的目标是使用具有毫米分辨率的临床超声扫描仪在体内输送大量封装的药物。本研究描述了荧光素在超声诱导复合液滴中的封装以及它在大鼠肝脏预定区域中的靶向释放。方法:使用微流体系统将荧光素水溶液封装在 4 μ m 单分散液滴中的全氟碳液体中。然后将药物注射到 12 只大鼠的股静脉内。在探索性超声成像后,超声医师在肝脏中定义五个区域,并在同一设备上启动释放序列。在对肝脏样本进行切片以进行病理学检查之前,在荧光宏观检查和术中荧光相机下体内观察肝脏表面。结果:液滴转换后,超声技师选定区域的对比度增加 25 dB。这些高回声区域与肝脏表面的明亮荧光点共定位。液滴内容物的输送需要最低峰值负压 2.6 MPa,这符合成像脉冲的规定。组织和细胞结构不受释放序列的影响。结论:由于复合液滴可以携带各种治疗剂和成像剂,因此它们可以将这些药剂专门输送到任何可接触超声的器官中。© 2012 美国医学物理学家协会。[ http://dx.doi.org/10.1118/1.4736822 ]
图3。左上角:ADCC生物测定原则的插图。右上:在ADCC生物测定效应子Jurkat细胞系中FcγRIIIIA-F158过表达的流式细胞仪分析(F变体; BPS Bioscience#60540)。左下:在表达HER2 SKBR-3乳腺癌细胞的情况下,ADCC对抗HER2抗体药物曲妥珠单抗反应。右下:在SKBR-3和FcγRIIIIA-F158/NFAT荧光素酶报告基因jurkat细胞(EC50 = 28.1 ng/ml)的共同培养中,ADCC对增加剂量的曲妥珠单抗的反应。用biorender.com创建的插图。
每烷基物质(PFA)是在组织中生物累积的普遍环境污染物,并对人类健康构成风险。越来越多的证据将PFA与神经退行性和行为障碍联系起来,但其对神经元功能的影响的潜在机制在很大程度上尚未探索。在这项研究中,我们利用了分化为神经元样细胞的SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞,研究六种PFAS化合物的影响 - 全氟辛基酸(PFOA),全氟二氨基甲硫酸含量8:2荧光素体磺酸盐(8:2 fts)和8:2荧光素体醇(8:2 FTOH) - 神经元健康。在30 µm暴露24小时后,PFA的积累范围为100–7500 ng/mg的蛋白质。转录组分析显示,跨处理(P ADJ <0.05)721个差异表达的基因(DEG),在所有PFAS暴露之间共有11次DEG,表明神经元PFAS毒性的潜在生物标志物。PFOA处理的细胞显示与突触生长和神经功能有关的基因下调,而PFO,PFDS,8:2 fts和8:2 FTOH暴露导致与低氧反应和氨基酸代谢相关的基因上调。脂质组分析进一步表明,PFDA,PFD和8:2 fts的脂肪酸上调显着,并在8:2 FTOH的情况下与三酰基甘油的下调一起。这些发现表明,PFA的神经毒性在结构上依赖性,从而对可能导致PFAS诱导的神经元功能障碍的分子过程提供了见解。
气孔防御对于防止病原体进入和进一步定植的植物很重要。质外塑性活性氧(ROS)在激活细菌后激活气孔闭合方面起着重要作用。然而,下游事件,尤其是对警卫细胞中胞质氢(H 2 O 2)的影响的因素,对警卫细胞中的特征很少了解。我们使用拟南芥在气孔免疫反应期间使用涉及倍增运动ROS爆发的拟南芥突变体来研究H 2 O 2传感器ROGFP2-ORP1和ROS特异性荧光素探针。出乎意料的是,NADPH氧化酶突变体RBOHF通过警卫细胞中与病原体相关的分子模式(PAMP)对ROGFP2-ORP1的过度氧化。但是,气孔闭合与高ROGFP2-ORP1氧化没有密切相关。相比之下,RBOHF对于通过基于荧光素的探针在后卫细胞中测得的PAMP介导的ROS产生是必需的。与以前的报道不同,RBOHF突变体(而不是RBOHD)在小型触发的气孔闭合中受到了损害,导致对细菌的气孔防御性缺陷。有趣的是,RBOHF还参与了PAMP诱导的凋亡碱化化。在H 2 O 2介导的气孔闭合100μm中,RBOHF突变体也部分受损,而较高的H 2 O 2浓度最高为1 m m,并未促进野生型植物中的气孔闭合。我们的结果提供了有关塑料和胞质ROS动力学之间相互作用的新见解,并突出了RBOHF在植物免疫中的重要性。
抽象背景大多数收养细胞疗法(ACT)无法控制治疗细胞在将其移植到患者之后的行为。因此,抑制,激活,区分或终止患者后的行为的努力可能是徒劳的,因为所需的药物会不利地影响患者中的其他细胞。方法我们在这里描述了一个两个结构域融合受体,该融合受体由与回收域相关的配体结合域组成,该结构域允许构成内部化和运输融合受体回到细胞表面。由于配体结合结构域被设计为结合通常在人类中不存在的配体,因此与该配体结合的任何药物都会选择性地结合并内吞作用。导致了我们策略的两个实施例,我们将人类叶酸受体α的慢性内吞作用结构融合到结合荧光素或人类FK506结合蛋白的鼠SCFV,从而结合FK506,从而产生由人类大部分组成的融合受体。然后,我们通过将任何所需的药物结合到荧光素或FK506,从而产生靶向配体的药物,从而产生与约10 -9 m的融合受体亲和力的配体毒剂结合物。使用这些工具,我们证明了CAR T细胞活动可以在体外敏感或关闭,并在将其重新输入肿瘤轴承小鼠后严格控制。结论我们建议,可以利用这种“嵌合内吞食受体”,不仅可以操纵汽车T细胞,而且还可以在将其恢复为患者后的其他作用。努力发展为治疗疾病,包括糖尿病,心力衰竭,骨关节炎,癌症和镰状细胞贫血的疾病,我们认为在灌注后操纵ACT活动的能力将很重要。
由于这些生物的困难生物学,反向遗传学在人类丝状寄生虫中的应用滞后。最近,我们开发了一种共同培养系统,该系统允许转染Brugia Malayi的感染性幼体阶段并有效地发展为Fecund成年人。这是开发基于Piggybac Transposon的工具包的,该工具包可用于生产具有稳定整合到寄生虫基因组中的转基因序列的寄生虫。然而,PiggyBac系统通常已被基于群的常规间隔短篇小学重复序列(CRISPR)技术取代,这允许精确编辑基因组。在这里,我们报告了适应b。马来语用于CRISPR介导的敲入插入寄生虫基因组。在b的基因间区域中鉴定出合适的CRISPR插入位点。马来语基因组。修改了双重记者Piggybac载体,用插入位点的序列替换了Piggybac倒的末端重复区域。b。用合成引导RNA,修饰的质粒和cas9核酸酶转染马来语或其。将转染的寄生虫植入沙鼠中,并允许发展为成年人。后代微丝菌进行了筛选,并筛选了质粒中编码的分泌的荧光素酶报告器的表达。发现大约3%的微丝虫分泌荧光素酶;所有这些都包含插入寄生虫基因组中预期位置的转基因序列。这些数据表明CRISPR可用于修改B的基因组。使用适配器介导的PCR测定法,检查了转基因微丝菌是否存在关闭目标插入;没有发现脱靶插入。马来语,开辟了精确编辑这种重要人类丝状寄生虫的基因组的道路。
背景。人类诱导的多能干细胞(HIPSC)衍生的胰岛类器官的移植是一种有前途的1型糖尿病(T1D)的细胞替代疗法。重要的是要通过识别具有高血管化和足够容纳的新移植部位来提高胰岛类器官移植的疗效,以支持具有高氧递送能力的移植物存活。方法。产生了人类诱导的多能干细胞系(HIPSCS-L1),以构成表达荧光素酶。表达荧光素酶的hipscs被分化为胰岛类器官。将胰岛类器官移植到非肥胖糖尿病/严重的合并免疫缺陷疾病(NOD/SCID)小鼠的肩cap骨脂肪组织(BAT)中,作为蝙蝠组,在NOD/SCID小鼠的左肾胶囊(KC)下,作为对照组,作为对照组,分别为tivers-tivers-tivers-tivers-tivers-tivers-tivers-tivers-tivers-tivers-tivers-tivers-tivers-tivers-tivers-tiver。在第1、7、14、28、35、42、49、56和63后移植后,进行了类器官移植物的生物发光成像(BLI)。结果。BLI信号,包括BAT和对照组。BAT和KC组的BLI信号逐渐降低。然而,左KC下的移植BLI信号强度大大降低的速度要快得多。此外,我们的数据表明,将移植到链蛋白酶诱导的糖尿病小鼠中的胰岛器官恢复了正常血糖。正电子发射断层扫描/MRI验证了胰岛类器官是否在这些糖尿病小鼠的预期位置移植。结论。免疫荧光染色显示出胰岛素和胰高血糖素染色所证实的功能类器官移植物的存在。我们的结果表明,BAT是T1D治疗的胰岛类器官移植的潜在理想部位。