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World File Search System转化
感受态细胞转化
细胞吸收外源 DNA 会改变细胞的表型或遗传特性，这被称为转化。细胞要吸收外源 DNA，必须先使其具有渗透性，以便 DNA 可以进入细胞。这种状态称为能力。在自然界中，一些细菌由于环境压力而变得具有能力。我们可以通过使用金属阳离子（如钙、铷或镁）的氯化物盐和冷处理来有目的地使细胞具有能力。这些变化会影响细胞壁和细胞膜的结构和渗透性，使 DNA 可以通过。然而，这会使细胞非常脆弱，因此在这种状态下必须小心处理。每 1 µg DNA 转化的细胞数量称为转化效率。DNA 太少会导致转化效率低，但 DNA 太多也会抑制转化过程。转化效率通常为每 µg 添加 DNA 1 x 10 4 至 1 x 10 7 个细胞。
通过原位转化的脑室区域神经干细胞的原位转化
This protocol describes the surgical procedure for co-electroporation of two plasmids targeting neu- ral stem cells (NSCs) in the lateral ventricle of mouse postnatal day 2 (P2) pups: a nonintegrating plasmid encoding for the piggyBase transposase and Cas9 and an integrating piggyBac vector car- rying the oncogenes, CRISPR guide RNAs and a TDTOMATO荧光报告蛋白通过倒末端重复序列（ITRS）倾斜（图1）。在电穿孔后，瞬时CAS9表达会导致肿瘤抑制基因失活，而PiggyBase介导的PIG-GYBAC货物的整合确保了靶向NSC及其后代中的癌基因和流动性记者的稳定表达。的整合是由PiggyBase转疗的酶促活性介导的，该转移的酶活性通过切割和粘贴机制在受体细胞基因组中的TTAA位点识别并将其与它们的内容一起插入。NSC的靶向是通过最小的人GFAP（HGFAPMIN）启动子序列1-3驾驶PiggyBase/cas9的驱动表达来实现的。
社论：植物转化
植物转化为许多基础研究提供了重要工具，例如基因功能和相互作用、蛋白质-蛋白质相互作用、发育过程的研究，以及作物改良和开发用于生产疫苗的植物生物反应器的应用。高效且可重复的转化技术不仅对转基因植物的开发至关重要，而且对瞬时基因表达研究和基因编辑等其他应用也至关重要。农杆菌于 1907 年首次被确认为冠瘿病的病原体。负责肿瘤诱导的细菌因子在 70 年代被描述：一种称为 Ti 质粒的 DNA 质粒，由 Zaenen 等人 (1974) 描述。利用转座子诱变技术分离质粒 Ti 的功能区，确定了两个主要区域：（1）Ti 质粒的一段，称为 T-DNA，它被转移到植物细胞中并整合到植物基因组中，（2）一个毒力区，它提供 T-DNA 转移所需的所有功能（详情见 Gelvin，2000 年）。通过去除负责肿瘤诱导的基因并用显性选择标记取而代之，对 Ti 质粒进行了工程改造，以产生转基因植物（Herrera-Estrella 等人，1983 年；Zambryski 等人，1983 年；De Block 等人，1984 年）。据报道，左右边界的两个重复 25 bp 序列对于 T-DNA 的转移至关重要（Wang 等人，1984 年）。在 T-DNA 整合到植物基因组的复杂过程中，有时边界 T-DNA 序列不被认为是限制性的，载体也会被整合，特别是在左边界的情况下。为了降低不需要的骨架载体 DNA 片段的整合频率，Sahab 和 Taylor 加入了多个左边界重复序列。分子分析证实，当在三种不同的转化系统中测试三重左边界时，载体序列整合减少了 2 倍，包括木薯转化。尽管第一批转基因植物是在 80 年代初产生的，但并不是所有的植物物种都像模型物种一样容易转化，尤其是一些具有经济价值的作物物种。一些植物仍然被认为难以转化或难以转化。几乎每种植物都有一种特定的转化方案，这些方案多年来一直在缓慢发展，除了已发表论文的方法论部分外，在过去的二十年里没有更新过。修改了协议以促进基因编辑等新育种技术的发展，一些最新的方法改进包括突破性进展，如使用发育调节基因和组织培养独立的基因编辑协议。本研究主题提供了一系列关于不同作物植物转化和基因编辑的最新进展的评论和原创研究文章。下面我们简要介绍原始论文和整合此研究主题的评论。玉米可能是迄今为止转基因商业性状最多的作物品种，也是许多新品种的来源。
转化鼻咽癌（NPC）...
欢迎消息亲爱的同事，鼻咽癌（NPC）是一种以亚洲为中心的疾病，在东亚和东南亚的发生率特别高。在世界的这一部分中，NPC总是与爱泼斯坦 - 巴尔病毒（EBV）感染相关，但对于导致NPC肿瘤发生和驱动肿瘤攻击的病毒与宿主之间的相互作用尚不清楚。在理解NPC的基因组和流行病学方面方面的进步，尤其是与EBV如何影响NPC发展有关的发展至关重要。此外，大多数患有晚期疾病的地方性NPC的患者，对于这些患者而言，化学放疗的结果仍然很差。这个迷你群岛将展示我们在国家医学研究委员会开放基金 - 大型合作授权（LCG的NMRC）计划中的合作研究工作，该计划致力于通过基于EBV的策略来推进NPC的早期诊断和个性化治疗方法。它将包括国际专家的广泛研究以及LCG研究团队，从阐明NPC肿瘤的EBV生物学到设计基于EBV的筛查和治疗策略，以在头颈癌中进行全球肿瘤学试验。该研讨会将促进研究人员，临床医生和行业领导者之间的相互作用，以加速NPC研究的进度。我们希望您能在我们对NPC和EBV的最新研究中享受这个迷你群岛！Liu Jianjun教授代理新加坡基因组研究所，*明星首席首席研究员，LCG计划NPC
