调控和功能性遗传元件(例如启动子、增强子、限制性酶切位点、转基因和选择标记)的示意图。信息包括但不限于病毒衣壳的组成、包膜结构、分子量、颗粒大小、糖基化位点、基因组的性质(单链、双链、DNA 或 RNA、每个颗粒的基因组拷贝数)、病毒载体的趋向性(例如病毒载体对特定宿主组织的特异性)。• 对于质粒载体,提供调控和功能性遗传元件(例如启动子、增强子、限制性酶切位点、转基因和选择标记)的示意图。信息包括但不限于插入的外来基因的物理特性、生化、生长特性、遗传标记和位置(例如在质粒上、游离型或染色体上)。• 对于基因编辑技术的使用,提供
系统和JAVA Codon Adaptation Tool 进行密码子适配。优化后的序列由上海生工生物工程有限公司通过 BamH1 和 XhoI 酶切位点合成并克隆到来自 pGEX-6p-1 质粒(美国 Novagen)的表达载体中。将重组质粒 pGEX-6p-1-Mpro 转化的 E. coli BL21(DE3)细胞(美国 Invitrogen)在 2 L Luria-Bertani 培养基中于 37 ℃ 下生长至 OD600 达到 0.6 后,加入 0.2 mM IPTG,16 ℃ 诱导重组蛋白表达过夜。将菌体悬浮在 PBS 中,超声波破碎。离心收集上清液并与谷胱甘肽 Sepharose 4B 琼脂糖(美国 GE Healthcare)混合,4 ℃ 下孵育 3 h。然后用 PBS 清洗珠子,并加入 preScission 蛋白酶 (GE) 以切割 GST 标签。含有