系统和JAVA Codon Adaptation Tool 进行密码子适配。优化后的序列由上海生工生物工程有限公司通过 BamH1 和 XhoI 酶切位点合成并克隆到来自 pGEX-6p-1 质粒(美国 Novagen)的表达载体中。将重组质粒 pGEX-6p-1-Mpro 转化的 E. coli BL21(DE3)细胞(美国 Invitrogen)在 2 L Luria-Bertani 培养基中于 37 ℃ 下生长至 OD600 达到 0.6 后,加入 0.2 mM IPTG,16 ℃ 诱导重组蛋白表达过夜。将菌体悬浮在 PBS 中,超声波破碎。离心收集上清液并与谷胱甘肽 Sepharose 4B 琼脂糖(美国 GE Healthcare)混合,4 ℃ 下孵育 3 h。然后用 PBS 清洗珠子,并加入 preScission 蛋白酶 (GE) 以切割 GST 标签。含有