复原 我们建议在打开前先短暂离心此小瓶,使内容物沉至底部。请使用去离子无菌水复原蛋白质至浓度为 0.1-1.0 mg/mL。我们建议添加 5-50% 甘油(最终浓度)并分装以在 -20°C/-80°C 下长期储存。我们默认的甘油最终浓度为 50%。客户可以将其作为参考。
序列 GV NLQEFLNVTS VHLFKERWDT NKVDHHTDKY ENNKLIVRRG QSFYVQIDFS RPYDPRRDLF RVEYVIGRYP QENKGTYIPV PIVSELQSGK WGAKIVMRED RSVRLSIQSS PKCIVGKFRM YVAVWTPYGV LRTSRNPETD TYILFNPWCE DDAVYLDNEK EREEYVLNDI GVIFYGEVND IKTRSWSYGQ FEDGILDTCL YVMDRAQMDL SGRGNPIKVS RVGSAMVNAK DDEGVLVGSW DNIYAYGVPP SAWTGSVDIL LEYRSSENPV RYGQCWVFAG VFNTFLRCLG IPARIVTNYF SAHDNDANLQ MDIFLEEDGN VNSKLTKDSV WNYHCWNEAW MTRPDLPVGF GGWQAVDSTP QENSDGMYRC GPASVQAIKH GHVCFQFDAP FVFAEVNSDL IYITAKKDGT HVVENVDATH IGKLIVTKQI GGDGMMDITD TYKFQEGQEE ERLALETALM YGAKKPLNTE GVMKSRSNVD MDFEVENAVL GKDFKLSITF RNNSHNRYTI TAYLSANITF YTGVPKAEFK KETFDVTLEP LSFKKEAVLI QAGEYMGQLL EQASLHFFVT ARINETRDVL AKQKSTVLTI PEIIIKVRGT QVVGSDMTVT VQFTNPLKET LRNVWVHLDG PGVTRPMKKM FREIRPNSTV QWEEVCRPWV SGHRKLIASM SSDSLRHVYG ELDVQIQRRP SM
描述 小鼠 FLT3L 最初是从鼠 T 细胞系 P7B-0.3A4 克隆出来的;人类和小鼠 FLT3L 蛋白有 72% 的氨基酸相同性。FLT3L 是合成的 I 型膜结合蛋白,经切割后可变成可溶性生长因子。此外,据报道,由于可变剪接,可溶形式的 FLT3L 也存在。TACE (ADAM17) 在 FLT3L 胞外域脱落中起关键作用;事实上,缺乏 TACE 的小鼠的血清 FLT3L 水平会降低。FLT3L 对两种主要树突状细胞 (DC) 亚群的发育至关重要:常规树突状细胞 (cDC) 和浆细胞样树突状细胞 (pDC)。树突状细胞发育或数量的变化会改变 T 细胞免疫力和耐受性。 DCs 和 Tregs 之间的反馈回路通过 FLT3L 进行调节,因为研究表明,DC 扩增引起的 Tregs 增加会延迟小鼠 1 型自身免疫性糖尿病和 IBD 的发病。此外,FLT3L 促进 Tregs 的形成,从而降低小鼠抗原诱发性关节炎的严重程度。类风湿性关节炎 (RA) 患者的滑液中 FLT3L 升高,FLT3L 已被纳入预测可能发展为 RA 的临床前标志物组。疟原虫感染触发的先天传感通路通过 FLT3L 释放调节 DC 稳态和适应性免疫。在疟原虫感染期间,人类和小鼠体内检测到高水平的 FLT3L 和增加的 DCs。
这是作者手稿,已接受出版并经过完整的同行评审,但尚未经过编辑、排版、分页和校对过程,这可能导致此版本与记录版本之间存在差异。请引用本文 doi: 10.1002/bit.27737 。本文受版权保护。保留所有权利。
此预印本的版权所有者此版本于 2022 年 4 月 3 日发布。;https://doi.org/10.1101/2022.04.01.486669 doi:bioRxiv preprint
最近的微生物基因组测序工作揭示了大量含有整合酶的移动遗传元件,这些整合酶可能成为有用的基因组工程工具。大型丝氨酸重组酶 (LSR),例如 Bxb1 和 PhiC31,是噬菌体编码的整合酶,可以促进噬菌体 DNA 插入细菌基因组。然而,之前仅鉴定了少数 LSR,它们在人类细胞中的效率有限。在这里,我们开发了一个系统的计算发现工作流程,通过识别数千个新的 LSR 及其同源 DNA 附着位点。我们通过在人类细胞中对 LSR 进行实验表征来验证这种方法,从而产生了三类根据其效率和特异性彼此区分的 LSR。我们识别了可有效整合到与人类基因组正交的合成安装附着位点的着陆垫 LSR、具有计算可预测伪位点的人类基因组靶向 LSR,以及可以单向整合货物的多靶向 LSR,其效率与常用转座酶相似,特异性更高。每个类别的 LSR 在人类细胞中都进行了功能鉴定,总体而言,其质粒重组率比 Bxb1 高出 7 倍,基因组插入效率为 40-70%,载物大小超过 7 kb。总体而言,我们建立了一个范例,用于大规模发现微生物重组酶并直接从微生物测序数据重建其靶位。该策略提供了丰富的资源,包括 60 多种经过实验鉴定的 LSR,这些 LSR 可以在人类细胞中发挥作用,以及数千种额外的候选 LSR,可用于大负载基因组编辑,而不会暴露 DNA 双链断裂。
DNA双链断裂(DSB)是可以通过多种DNA修复途径修复的剧毒病变。多个因素可能会影响修复对给定途径的选择和限制,以保证维持基因组完整性。在V(D)J重组期间,RAG诱导的DSB(几乎)是通过非同理端连接(NHEJ)途径仅修复的,以实现抗原受体基因多样性的益处。在这里,我们回顾了将RAG生成的DSB修复到NHEJ的各种参数,包括RAG核酸酶产生的DNA DSB末端的特殊性,裂解后突触复合物的建立和维护,以及DNA末端的DNA末端的末端抗切除和(Microtro)的人体学修复。在这种生理背景下,我们强调某些DSB的DNA修复途径选择有限。
疟疾是由疟原虫属的原生动物寄生虫引起的,并且仍然是全球健康问题。寄生虫具有高度适应的生命周期,其中包括脊椎动物宿主中的连续无性复制和蚊子载体围绕中的性成熟。寄生虫的遗传操纵对破译疟原虫基因功能的功能具有重要作用。常规的反向遗传工具不能用于研究无性血液阶段的基本基因,从而需要制定条件策略。在各种此类策略中,雷帕霉素可诱导的可二聚化CRE(DICRE)重组酶系统是一种有条件地编辑人类感染的恶性疟原虫和啮齿动物疟疾模型寄生虫寄生虫P. Berghei的强大方法。我们先前生成了表达二甲虫的berghei线,并通过有条件地删除了几个必不可少的无性阶段基因来验证它,从而揭示了它们在孢子虫中的重要作用。另一个有效的工具是CRISPR/CAS9技术,该技术已启用了具有更高精度和特异性的目标基因组编辑,并且在疟原虫属中具有大量先进的基因组工程。在这里,我们通过在寄生虫中整合了Dicre盒和荧光标记来开发新的Berghei寄生虫线,以组成表达Cas9。由于CRISPR/CAS9和DICRE的双重整合,这些新系列允许同时进行无与伦比的基因修饰和条件调节。为了说明这种新工具的多功能性,我们有条件地淘汰了编码贝尔格(P. Berghei)类似claudin的apicomplexan微米蛋白(夹具)的基本基因,并确认了夹具在侵入红细胞细胞中的作用。
将大型 DNA 序列精确插入基因组的技术对于各种研究和治疗应用至关重要。大型丝氨酸重组酶 (LSR) 可以介导多千碱基 DNA 序列的直接、位点特异性基因组整合,而无需预先安装着陆垫,但目前的方法存在插入率低和脱靶活动率高的问题。在这里,我们提出了一个全面的工程路线图,用于联合优化 DNA 重组效率和特异性。我们结合定向进化、结构分析和计算模型来快速识别附加突变组合。我们通过供体 DNA 优化和 dCas9 融合进一步提高了性能,从而实现了同时招募目标和供体。顶级工程 LSR 变体在内源性人类基因座上实现了高达 53% 的整合效率和 97% 的全基因组特异性,并有效整合大型 DNA 货物(测试高达 12 kb),以在具有挑战性的细胞类型(包括非分裂细胞、人类胚胎干细胞和原代人类 T 细胞)中稳定表达。这种合理设计 DNA 重组酶的蓝图使得精确的基因组工程成为可能,而不会产生双链断裂。
1。中国北京北京第三医院妇产科生殖医学中心。2。中国北京北京第三医院妇产科生殖医学中心女性生育促进的国家主要实验室。3。中国北京北京第三医院泌尿外科系。4。国家妇产科临床研究中心(北京北京北京第三医院)。5。中国北京教育部辅助生殖的主要实验室(北京北京)。6。北京的繁殖内分泌学和辅助生殖技术的主要实验室,中国北京。7。北京北京大学北京大学北京北京北京生命科学中心。8。中国北京北京北京大学泌尿外科系。9。中国北京北京大学泌尿外科研究所。 10。 中国北京北京北京大学第一医院雄科学系。中国北京北京大学泌尿外科研究所。10。中国北京北京北京大学第一医院雄科学系。