82。05/10/2024 South Tyrol Bolzano意大利的Francesco Maniscalco医生医疗保健公司8305/10/2024 Laura Mettivier血液学家A.O.U.San Giovanni di dio和Ruggi d'Aragona Salerno Italy 84。05/10/2024 Denise Morini A.O.U.San Giovanni di dio和Ruggi d'Aragona 85。05/10/2024 Milena Pintimalli医疗总监医疗保健公司,意大利南蒂罗尔·博尔扎诺86。05/10/2024 Eleonora Pontorio研究人员
1 研究与创新中心,Fondazione Edmund Mach,Via E. Mach 1, 38098 San Michele all'Adige,意大利;carlotta.pirrello@unipd.it(CP);giulia.malacarne@fmach.it(GM);marco.moretto@fmach.it(MM);lenzi.luisa@gmail.com(LL);michele.perazzolli@fmach.it(MP);stefania.pilati@fmach.it(SP); claudio.moser@fmach.it (CM) 2 乌迪内大学农业、食品、环境与动物科学系,Via delle Scienze 206, 33100 Udine, 意大利 3 特伦托大学农业食品环境中心(C3A),Via E. Mach 1, 38098 San Michele all'Adige,意大利 4 SciENZA Biotechnologies BV,Sciencepark 904, 1098 XH Amsterdam,荷兰;T.Zeilmaker@enzazaden.nl 5 植物-微生物相互作用,乌得勒支大学生物学系,Padualaan 8, 3584 CH Utrecht,荷兰; g.vandenackerveken@uu.nl * 通讯地址:lisa.giacomelli@fmach.it † 现地址:意大利帕多瓦大学农学、食品、自然资源、动物和环境系,Agripolis 校区,V.le dell'Università 16,35020 Legnaro。‡ 这些作者对本研究的贡献相同。
a 剑桥大学植物科学系森林生态与保护组,英国 CB2 3EA b 剑桥大学应用数学与理论物理系(DAMTP)图像分析组,英国 CB3 0WA c 可持续农业生态系统与生物资源系,研究与创新中心,Fondazione E. Mach,Via E. Mach 1,38010 San Michele all’Adige (TN),意大利 d 牛津大学地理与环境学院环境变化研究所,英国 OX1 3QY e 昆士兰大学生物多样性与保护科学中心,澳大利亚昆士兰州圣卢西亚 4072 f 英国自然署,克伦威尔大厦,15 Andover Road,温彻斯特,SO23 7BT,英国 g 伦敦大学学院(UCL)Mullard 空间科学实验室,Holmbury St Mary,萨里 RH5 6NT,英国
意大利糖尿病学会科学委员会 (1997 年 - 1998 年) 意大利糖尿病学会肾病研究组协调员 (1996 年 - 1999 年) 意大利糖尿病学会董事会 (2004 年 - 2008 年) 意大利糖尿病学会科学委员会协调员 (2006 年 - 2008 年) 欧洲糖尿病研究协会肾病研究组主席 (2005 年 - 2008 年)。欧洲糖尿病研究协会和欧洲共同体项目 DIAMAP(欧洲糖尿病研究路线图)微血管病并发症工作组协调员(2008-2010 年)意大利糖尿病学会威尼托-特伦蒂诺上阿迪杰分会主席(2010 年 -2012 年)欧洲糖尿病研究协会副主席(2014-2017 年)
意大利糖尿病学会科学委员会 (1997 年 - 1998 年) 意大利糖尿病学会肾病研究组协调员 (1996 年 - 1999 年) 意大利糖尿病学会董事会 (2004 年 - 2008 年) 意大利糖尿病学会科学委员会协调员 (2006 年 - 2008 年) 欧洲糖尿病研究协会肾病研究组主席 (2005 年 - 2008 年)。欧洲糖尿病研究协会和欧洲共同体项目 DIAMAP (欧洲糖尿病研究路线图) 微血管病并发症工作组协调员 (2008-2010) 意大利糖尿病学会威尼托 - 特伦蒂诺上阿迪杰分会主席 (2010 -2012) 欧洲糖尿病研究协会副主席 (2014-2017) 教学活动 2008 年至今 (2010 年至 2012 年) 担任临床医学综合课程、医学和外科单周期专家学位课程教师
- 2018: “Hologene 7 as a model for the development of an advanced therapy based on genetically corrected stem cells”, funded by Debra Südtirol-Alto Adige 5×1000, PI Prof. Michele De Luca - 2014: “Hologene 7 as a model for the development of an advanced therapy based on genetically corrected stem cells”, funded by Emilia-Romagna PI Michele De Luca (POR- FESR-2014-2020 CUP E92I16000220005) - 2013: “Phase I/II ex vivo gene therapy clinical trial for recessive dystrophic epidermolysis bullosa using skin equivalent grafts genetically corrected with a COL7A1-encoding SIN retroviral vector – GENEGRAFT funded by European Union (FP7-HEALTH-2010 n. 261392), PI Michele De Luca - 2013: “Italian Regenerative Medicine Infrastructure (IRMI),一个旨在开发器官和组织再生的先进疗法的多区域基础设施”,由 MIUR PI Michele De Luca 资助(项目编号 CTN01_00177_888744)- 2013 年:“大疱性表皮松解症的基因治疗:从临床前到临床”,由 Fondazione Cassa di Risparmio di Modena 资助,PI Michele De Luca - 2010 年:“再生医学中心 - Tecnopolo di Modena”,由艾米利亚-罗马涅大区和欧盟资助,PI Michele De Luca (Axis 1 POR FESR 2007-2013)。
空气中的颗粒物数据对于保护人类健康至关重要。人为(例如烟尘、轮胎和刹车磨损)以及生物(例如花粉和孢子)颗粒通常由位于城市环境中的主动采样器监测;因此,偏远山区的数据非常少。此外,生物气溶胶分析耗时且需要大量技能。因此,为了避免主动采样的障碍(即高成本和功耗)并简化数据分析,我们研究了结合自动分析的被动采样作为花粉检测方法。2018 年,我们在意大利圣米歇尔阿迪杰部署了两台 Sigma-2 被动采样器,为期 12 周。自 1990 年以来,这里一直使用 Hirst 型容积采样器监测空气中的花粉。为了获得单个粒子的形态化学信息,我们使用 (i) 自动光学显微镜 (OM) 分析了样品,然后根据粒度和灰度值进行图像分析,以及 (ii) 自动扫描电子显微镜结合能量色散 X 射线光谱 (SEM/EDX)。自动 OM 检测到尺寸范围为 20–80 µ m 的明亮颗粒(即来自天然来源),准确代表了总花粉,SEM/EDX 根据大小、形状和化学成分过滤颗粒,这使我们能够识别可能的花粉候选物(“花粉状”部分)。总体而言,自动化分析技术可以同时提供有关空气中人为、地质和生物颗粒(包括花粉)的数据。此外,被动采样为收集空气生物学研究中的数据提供了一种可靠的选择,特别是在维护主动采样器具有挑战性的偏远地区。关键词:空气生物学、Sigma-2 采样器、Hirst 型采样器、空气中颗粒、SEM/EDX
1 因斯布鲁克大学药学/生药学研究所、因斯布鲁克分子生物科学中心 (CMBI),Innrain 80 / 82, 6020 因斯布鲁克,奥地利; F.Mayr@uibk.ac.at (FM); Veronika.Temml@pmu.ac.at (佛蒙特州); birgit.waltenberger@uibk.ac.at (BW); Stefan.Schwaiger@uibk.ac.at (SS); hermann.stuppner@uibk.ac.at (HS) 2 研究单位分子内分泌学和代谢,亥姆霍兹中心慕尼黑,Ingolstädter Landstraße 1, 85764 Neuherberg,德国; gabriele.moeller@helmholtz-muenchen.de(总经理); adamski@helmholtz-muenchen.de (JA) 3 格赖夫斯瓦尔德大学药学院制药/药物化学系,Friedrich-Ludwig-Jahn-Straße 17, 17489 Greifswald,德国;ulrike.garscha@uni-greifswald.de (UG);jana.fischer@uni-greifswald.de (JF) 4 伯尔尼大学儿童医院儿科内分泌、糖尿病和代谢科,Freiburgstrasse 15, 3010 Bern,瑞士;patrirodcas@gmail.com (PRC); amit.pandey@dbmr.unibe.ch (AVP) 5 伯尔尼大学生物医学研究系,Freiburgstrasse 15, 3010 伯尔尼,瑞士 6 巴塞尔大学药学系分子与系统毒理学分部,Klingelbergstrasse 50, 4056 巴塞尔,瑞士;silvia.inderbinen@unibas.ch (SGI);alex.odermatt@unibas.ch (AO) 7 萨尔州亥姆霍兹药物研究所 (HIPS),药物设计和优化系,E8.1 校区,66123 萨尔布吕肯,德国; rolf.hartmann@helmholtz-hzi.de 8 萨尔大学,制药和药物化学,E8.1 校区,66123 萨尔布吕肯,德国 9 海德堡大学,药学和分子生物技术研究所 (IPMB),药物化学,Im Neuenheimer Feld 364,69120 海德堡,德国;christian.gege@web.de 10 埃德蒙马赫基金会 (FEM) 研究与创新中心,Via Mach 1,38010 San Michele all'Adige,意大利;stefan.martens@fmach.it 11 耶拿弗里德里希席勒大学药学研究所制药/药物化学系,Philosophenweg 14,07743 耶拿,德国; oliver.werz@uni-jena.de 12 遗传学实验学校,慕尼黑工业大学,Emil-Erlenmeyer-Forum 5, 85356 Freising-Weihenstephan, 德国 13 新加坡国立大学杨潞龄医学院生物化学系,8 Medical Drive, Singapore 117597,新加坡 14 药学研究所,萨尔茨堡帕拉塞尔苏斯医科大学制药和药物化学系,Strubergasse 21, 5020 Salzburg, Austria 15 药学/药物化学研究所,因斯布鲁克分子生物科学中心 (CMBI),因斯布鲁克大学,Innrain 80 / 82, 6020 Innsbruck, Austria * 通讯作者:daniela.schuster@pmu.ac.at;电话:+43-699-14420025
a Center for Tree Science, The Morton Arboretum, 4100 illinois Rt 53, Lisle 60532, USA b 卡迪夫大学生物科学学院,Cardiff CF10 3AX, UK c Instituto da Conservação da Natureza e das Florestas, IP,里斯本,葡萄牙 d INRAE, Univ. Bordeaux, Biogeco, 69 Route d'Arcachon, F-33610 Cestas, France e Institute for Bioinformatics and Evolutionary Studies, Department of Biological Sciences, University of Idaho, 875 Perimeter Drive MS 3051, Russia, ID 83844-3051, USA f 瑞典环境保护局野生动物分析部门,SE-10648 斯德哥尔摩,瑞典 g 主席野生动物生态与管理,弗莱堡大学,Tennenbacher Str。 4, D-79106 Freiburg, 德国 h 可持续农业生态系统和生物资源部,研究与创新中心 - Fondazione Edmund Mach, via E. Mach 1, S. Michele all'Adige, TN 38010, Italy i 森林与保护科学系,林业学院,不列颠哥伦比亚大学,3041-2424 Main Mall, 温哥华,BC V6T 1Z4,加拿大 j 纽约城市学院,160 Convent Ave., New York, NY 10031,美国 k 比勒陀利亚大学,比勒陀利亚,南非 l 科学与工程学院,弗林德斯大学,贝德福德公园,SA 5042,澳大利亚 m 莫雷利亚国立高等研究院,墨西哥国立自治大学,安提瓜卡雷特拉Pátzcuaro 8701 前庄园墨西哥圣何塞德拉韦尔塔 58190 n 科罗拉多州立大学生物系、生态学研究生学位课程,美国科罗拉多州柯林斯堡 o 悉尼大学科学学院生命与环境科学学院,澳大利亚新南威尔士州 2006 p 美国地质调查局湿地和水生研究中心,美国佛罗里达州盖恩斯维尔西北 71 街 7920 号,邮编 32653 q Instituto Tecnológico Vale,66055-090 贝伦-PA,巴西 & 圣保罗大学生态系,05508-090 圣保罗,SP,巴西 r 梅西大学自然与计算科学学院,新西兰奥克兰 s 自然与森林研究所,比利时布鲁塞尔 Havenlaan 88,邮编 1000 t 水生生态学、进化与保护,鲁汶天主教大学,Charles Deberiotstraat 32, box 2439, 3000 Leuven, 比利时 u 英国自然历史博物馆生命科学系,伦敦 SW7 5BD,英国 v 伊朗塔比亚特莫达雷斯大学生物科学学院,德黑兰 14115-154,伊朗 w 苏格兰自然遗产,Leachkin Road, Inverness IV3 8NW, 英国 x 英国爱丁堡大学皇家(迪克)兽医学院和罗斯林研究所,Easter Bush 校区,EH25 9RG,英国 y 巴西坎皮纳斯大学生物研究所植物科学系,坎皮纳斯,圣保罗 13083-862,巴西 z 图卢兹大学功能生态学和环境实验室,UPS, CNRS, INP, UMR-5245 ECOLAB,118 route de Narbonne,图卢兹31062,法国 aa ACT 公园和保护科学,澳大利亚首都领地 2901,澳大利亚 ab 生态和进化,国家生物科学中心,TIFR,班加罗尔 560065,印度
从无DNA编辑的葡萄藤原生质体中的植物再生Simone scintilla 1*,Umberto salvagnin 1,Lisa Giacomelli 2,Tieme Zeilmaker 2,Mickael A. Mickael A. Malnoy A. Malnoy 1,Jeroen Rouppe Van der Voort 2,Claudio Moser 1。1果实作物,研究与创新中心的基因组学和生物学系,E. Mach 1,I-38010,San Michele A/Adige(TN)意大利; 2 Enza Zaden,Haling 1-E,1602 dB,Enkhuizen,荷兰。*通讯作者:Simone Scintilla博士(Simone.scintilla@unitn.it)。抽象的CRISPR-CAS技术已广泛扩展了植物育种中基因组编辑的应用领域,从而使遗传库中可能的特定和最小突变。关于标准基因组编辑技术,可以以核糖核蛋白(RNP)的形式引入CRISPR-CAS机械,从而避免将外源性DNA引入细胞中。对将无DNA递送到植物细胞中应用中的兴趣不断增加,尤其是在有价值的木本植物精英品种的情况下,CRISPR-CAS9技术将保留其基因型,同时仍导致靶向遗传修饰。通过确保CRISPR-CAS DNA-RNP作为RNP的无效递送,并且由于单个编辑的单元将不存在嵌合体,因此,使用CRISPR-CAS DNA-无需递送,非常适合新育种技术的需求。然而,通常通过低编辑效率和不成功的再生过程来阻碍木质植物中原生质体的细胞培养。深红色的L.胚胎愈伤组织。此策略符合无DNA策略要求。我们在这里描述了一种成功的无DNA方法,以获得完全编辑的葡萄植物,该方法是从V. vinifera cv获得的原生质体中再生的。在浓霉敏感性基因VVDMR6-2上编辑了转染的原生质体。再生的编辑植物表现出1bp或2bp的纯合缺失,以及1BP的纯合插入。引言基因组编辑技术允许以高度精确度修改细胞DNA。尤其是随着CRISPR-CAS9的出现(群集定期间隔短的短质重复 - CAS9)技术,基因组编辑的应用领域已被广泛扩展。该系统基于通过互补的RNA序列和CAS核酸酶介导的DNA双链破裂对DNA编辑位点的识别,这使得插入,缺失,甚至仅仅使一个核苷酸的修饰成为可能。因此,尤其是在木质植物遗传改善的情况下(例如葡萄藤或苹果)精英品种,CRISPR-CAS9技术可确保其基因型保存,同时导致靶向遗传修饰。CRISPR-CAS成分可以以核酸的形式引入细胞内(即DNA/mRNA编码整个系统),或以核糖核蛋白(RNP)复合物的形式进行编码。虽然DNA可以整合到基因组中,而mRNA受其内在不稳定性的影响,但RNP的直接细胞递送打开了有吸引力的场景,因为它有可能体现出强大的方法论,导致特定而最小的突变,而没有外源性DNA的痕迹(Woo等,2015)。从这种角度来看,与经典的转基因生物相比,对植物的应用兴趣可能会更好地接受消费者(Saleh等,2021)。到目前为止,已经提出了三种主要策略将CRISPR-CAS系统输送到植物细胞中。1)使用工程化的农杆菌,可以轻松克服植物细胞壁。然而,该策略采用外源质粒DNA,这些DNA含有农杆菌的DNA部分,在转化后,该策略在细胞DNA中积分为细胞DNA。对于木本植物,外源性DNA只能通过杂交去除,从而导致遗传背景的变化。成功地应用于包括木本植物在内的许多农作物的替代方法,包括T-DNA的分子切除(Dalla Costa等,2020),几乎完全去除外源性DNA。但是,剩余的最小残留外国DNA可能与许多国家的当前严格转基因生物法规不相容。2)粒子轰击使用装有生物材料的纳米颗粒子弹来射击植物组织,从而超过了细胞壁垒,并释放了纳米颗粒装载的生物货物以诱导基因组编辑。尽管如此,各种物理参数严重影响了这种方法的效率。,并非所有细胞都会被子弹击中,因此下游再生过程可能会引起嵌合植物。3)替代解决方案是暂时清除细胞壁,有效地将生物材料递送到单个细胞中。根据此策略,细胞壁是酶法消化的,因此提供了一个“裸”植物细胞(即原生质体)由质膜界定。在有利的条件下,可以通过PEG浸润,电穿孔或LiPofection轻松实现RNP的细胞递送。2-3天后,恢复了细胞壁,进一步的细胞划分