摘要:赭曲霉毒素 A (OTA) 是一种众所周知的霉菌毒素,广泛分布于食品和饲料中。真菌基因组测序对于识别已知和新化合物的次级代谢物基因簇非常有用。对 A. steynii、A. westerdijkiae、A. niger、A. carbonarius 和 P. nordicum 中 OTA 生物合成簇的比较分析表明,在五个结构基因 (otaA、otaB、ota、otaR1 和 otaD) 中,OTA 簇的组织具有高度的同源性。此外,最近对黑曲霉 OTA 产生菌进行的详细比较基因组分析发现了一个环化酶基因 otaY,它位于 otaA 和 otaB 基因之间的 OTA 簇中,编码的预测蛋白质与 SnoaL 的结构域高度相似。这些蛋白质已被证明能催化链霉菌中产生的聚酮抗生素生物合成中的闭环步骤。在本研究中,我们证明了在 OTA 允许条件下 A. carbonarius 中环化酶基因的上调,这与其他 OTA 簇基因的表达趋势及其在 OTA 生物合成中的作用一致,即通过完全基因缺失。我们的研究结果首次指出了环化酶基因参与了 OTA 生物合成途径。它们代表着对 A. carbonarius 中 OTA 生物合成分子基础的理解向前迈出了一步。
本研究调查了使用黑曲霉培养滤液生产氧化锌纳米粒子 (ZnO NPs) 作为一种可持续且环保的方法,将其与碳酸锌溶液结合。使用透射电子显微镜 (TEM)、能量色散 X 射线衍射 (EDX)、扫描电子显微镜 (SEM) 和傅里叶变换红外光谱 (FT-IR) 检查生产的 ZnO 纳米粒子。表征数据验证了高度结晶的 ZnO NPs 的产生,平均尺寸范围为 27 至 40 纳米。研究了 ZnO NPs 在理想温度下对赭曲霉和黑曲霉生长的影响。在剂量分别为 0.25%、0.5% 和 1% 时,黑曲霉和赭曲霉分别导致 56%、81% 和 87% 的真菌生长抑制和 64%、71% 和 86% 的真菌生长抑制。在最高 ZnO NPs 浓度下,观察到最大抑制率。这项研究凸显了黑曲霉作为生物工厂生产 ZnO 纳米颗粒的潜力,这些纳米颗粒在农业和其他领域具有广阔的应用前景。环保的合成方法,加上合成的 ZnO 纳米颗粒的抗真菌特性,为植物病害管理提供了一种可持续且环保的传统杀菌剂替代品。
丝状真菌黑曲霉因其高蛋白质分泌能力而闻名,是同源和异源蛋白质生产的首选宿主。为了进一步提高黑曲霉的蛋白质生产能力,我们制备了一组专用的蛋白质生产菌株,其在基因组的预定位置包含多达 10 个葡糖淀粉酶着陆位点 (GLS)。这些 GLS 取代了编码大量存在或编码不需要的功能的酶的基因。每个 GLS 都包含葡糖淀粉酶基因 (glaA) 的启动子和终止子区域,该基因是黑曲霉中表达最高的基因之一。整合多个基因拷贝(通常通过随机整合实现)可提高蛋白质产量。在我们的方法中,GLS 允许使用 CRISPR/Cas9 介导的基因组编辑快速进行靶向基因替换。通过在每个 GLS 中引入相同或不同的独特 DNA 序列(称为 KORE 序列)并设计 Cas9 兼容的单向导 RNA,人们能够选择目标基因在哪个 GLS 整合。通过这种方式,可以轻松快速地制备一组具有不同目的基因拷贝数的相同菌株,以比较蛋白质生产水平。为了说明其潜力,我们成功地利用表达平台生成多拷贝 A. niger 菌株,该菌株产生 Penicillium expansum PatE::6xHis 蛋白,催化棒曲霉素生物合成的最后一步。表达 10 个拷贝 patE::6xHis 表达盒的 A. niger 菌株在培养基中产生约 70 lg mL 1 PatE 蛋白,纯度略低于 90%。
摘要:之前,DNA 微阵列分析表明,在与枯草芽孢杆菌共培养中,锚定在黑曲霉非核糖体肽合成酶上的生物合成基因簇被下调。基于系统发育和同源性分析,我们发现这个基因簇 NRRL3_00036-NRRL3_00042 包含预测编码非核糖体肽合成酶、含 FAD 结合结构域的蛋白质、未知蛋白质、转运蛋白、细胞色素 P450 蛋白、含 NAD(P) 结合结构域的蛋白质和转录因子的基因。我们过表达了簇内转录因子基因 NRRL3_00042 。过表达菌株 NRRL3_00042 OE 表现出生长速度降低和黄色色素产生减少,质谱分析显示黄色色素对应于两种化合物,质量分别为 409.1384 和 425.1331。我们删除了 NRRL3_00042 OE 菌株中编码 NRRL3_00036 非核糖体肽合成酶的基因。所得菌株恢复为野生型表型。这些结果表明,由 NRRL3_00036 非核糖体肽合成酶基因锚定的生物合成基因簇受簇内转录调控基因 NRRL3_00042 调控,并且它参与了两种以前未表征的化合物的生产。
摘要:Aspergillus oryzae是一种浮雕的真菌,已用于传统的日本酿酒行业,例如清酒,酱油和味o味生产。此外,绿曲霉已被用于异源蛋白质的产生中,并且该真菌由于能够通过引入外国生物合成基因而产生大量异源天然产物,因此该真菌最近被用于生物合成研究。遗传操作在绿曲霉的功能发展中很重要,主要限于野生应变rib40,这是一种适用于实验室分析的基因组参考。但是,有许多具有各种专业特征的A. oryzae的工业酿造菌株,并且根据各种目的所需的特性选择性地使用它们,例如清酒,酱油和味o的生产。自2000年代初以来,已经开发了基因组编辑技术;在这些技术中,转录激活效应效应子核酸酶(Talens)和定期插入的短期短质体重复序列/CRISPR-相关蛋白9(CRISPR/CAS9)已应用于A. oryzae的基因修饰。值得注意的是,CRISPR/CAS9系统已经显着提高了A. oryzae工业菌株基因修饰的效率。在这篇综述中,总结了基因组编辑技术及其在A. Oryzae中的应用潜力的发展。
2005年,慢曲霉作为烟曲霉的一个隐种被首次报道,此后,其对唑类药物的耐药性和感染者的高死亡率就成为问题。尽管据报道P450 14-α固醇脱甲基酶(Cyp51)与慢曲霉的唑类抗性有关,但具体的抗药机制尚不清楚。在本研究中,我们利用CRISPR/Cas9基因组编辑系统成功地将整个烟曲霉cyp51A基因引入到慢曲霉的cyp51A基因座中。与亲本菌株相比,含有烟曲霉cyp51A的慢曲霉菌株对伊曲康唑和伏立康唑的最低抑菌浓度降低。这一发现表明 Cyp51A 与 A. lentulus 的唑类抗性有关,可能有助于阐明 Cyp51A 对唑类药物产生抗性的机制,并有助于开发新的抗真菌药物。此外,我们成功地将 CRISPR/Cas9 系统应用于 A. lentulus,为研究这种真菌中其他基因的功能打开了大门。关键词:Aspergillus lentulus、唑类抗性、Cas9/CRISPR、Cyp51A
在最初发表的文章的版本中,第一和第二个隶属关系不正确,现在已被修改为农业与生物技术学院,吉安吉大学,杭州,中国,中国,国家生物学和水稻生物学和育种国家的主要实验室,农业和农业杂交生物学杂交生物学,ZHENG CORPATIAN和RACE繁殖。中国杭州。参考。14和30,该期刊名称被错误地赋予了农作物健康杂志,现在已被修改为作物健康。 这些更正已对本文的HTML和PDF版本进行了更正。14和30,该期刊名称被错误地赋予了农作物健康杂志,现在已被修改为作物健康。这些更正已对本文的HTML和PDF版本进行了更正。
由于由抗真菌抗药性抗药性菌株引起的新兴生命威胁性真菌感染,因此迫切需要制定新的治疗策略,应用抗真菌化合物,这些化合物与化学特征和作用机理中的现有抗真菌化合物不同(Kainz等,2020)。除了针对真菌细胞壁的新型化学疗法,细胞膜和细胞内靶标(Rauseo等,2020),天然和合成抗真菌肽(Fern Andez de Ullivarri等,2020)和蛋白质(AFPS)和蛋白质(AFPS)代表其他药物候选者;其中,丝状真菌起源的Neosartorya(Aspergillus)Fischeri抗真菌蛋白2(NFAP2)(Galg Oczy等,2019)。nFAP2抑制了机会性人类病原体念珠菌物种的生长,并单独消除其耐药性生物膜或与许可的抗真菌药物的协同组合(Kov Acs等,2021; T oth等,2018)。NAFP2在鼠外阴阴道念珠菌模型中的实验确定的功效(Kov ACS等,2019),以及三维人类皮肤模型(Holzknecht等,2022)已经支持其在安全治疗中的治疗潜力(抗真菌药物抗药性)表Lastric Fungal Infections。考虑到这些功能,NFAP2被认为是有希望的
结果:在本研究中,假单胞菌属,20EI1能够降低黄曲霉的生长。此外,我们确定这种生长抑制是铁的。此外,假单胞菌20EI1减少或阻断了黄曲霉毒素的产生,以及环皮二唑酸和曲酸。在细菌的存在下改变了铁相关基因的表达,而参与产生黄曲霉毒素的基因被下调。铁补充部分重新建立了它们的表达。细菌还降低了其他继发代谢产物(SM)基因的表达,包括参与环皮二唑酸,曲酸和imizoquin生物合成的簇的基因,而聚类的基因与曲霉菌素相对应。有趣的是,全局SM调节基因MTFA被20EI1显着上调,这可能有助于观察到的SM发生变化。
引言侵入性真菌感染对于受损系统受损的人,包括癌症患者(例如白血病,淋巴瘤)以及固体器官和造血干细胞移植受者,这是可怕的并发症。真菌病原曲霉属。引起多种疾病,包括哮喘,慢性感染和侵入性疾病。侵入性真菌感染仍具有升高的死亡率(1-4),这表明先天免疫系统是针对这些破坏性感染的第一道防线(5,6)。作为真菌感染的第一反应者,中性粒细胞通过多种效应子功能发挥抗真菌活性,包括蜂群,吞噬作用和活性氧(ROS)产生。激活中性粒细胞模式识别受体会触发这些效应子功能和随后的细胞因子分泌。然而,在许多免疫抑制的个体中,产生嗜中性粒细胞或中性粒细胞功能障碍的能力降低,导致侵入性真菌感染的风险升高,包括浸润性曲霉病。酪氨酸激酶对抗真菌免疫中的中性粒细胞效应功能至关重要(7-9)。曲霉细胞壁碳水化合物通过脾酪氨酸激酶(SYK)触发细胞内信号传导和效应子功能(10,11)。Bruton的酪氨酸激酶(BTK),一种Syk的激酶向下流,介导了包括嗜中性粒细胞在内的先天免疫细胞中的抗真菌反应(12)。这些激酶在抗真菌免疫中至关重要,但针对这些分子的小分子抑制剂是B细胞恶性肿瘤和慢性移植物抗宿主病的有效疗法(13-16)。
