用途:EpiNext™ CUT&LUNCH 检测试剂盒是一套完整的优化试剂,旨在快速从细胞中直接富集蛋白质(组蛋白或强结合转录因子)特异性 DNA 复合物,以通过 qPCR 或使用 Illumina 平台的下一代测序分析蛋白质与 DNA 之间的相互作用。起始材料:起始材料可以包括各种哺乳动物细胞样本,例如来自烧瓶或培养皿的培养细胞、原代细胞或从血液、体液、新鲜/冷冻组织中分离的稀有细胞群,以及从整个细胞群和胚胎细胞中分选的特定细胞等。细胞输入量:每个反应的细胞量可以是 2 x 10 3 到 5 x 10 5 个细胞。为了获得最佳制备效果,细胞输入量应为 2 x 10 5 ,尽管只需 500 个细胞即可获得修饰组蛋白的结果。抗体:抗体应为 ChIP 级,以识别与 DNA 或其他蛋白质结合的蛋白质。如果您使用的抗体尚未经过 ChIP 验证,则应使用适当的对照抗体(例如抗 RNA 聚合酶 II、抗 H3K4me3 或抗 H3K9me3)来证明这些抗体适合 ChIP。
硫氧还蛋白还原酶(TRXR)是含硒的吡啶核苷酸 - 二硫键氧化酶,以及与维持细胞氧化还原稳态有关的抗氧化剂硫氧还蛋白系统的一部分。1-3局部位于细胞质的TRXR:TRXR1的三种同工型,TRXR2和TRXR3位于线粒体。4所有TRXR同工型都催化了NADPH依赖性的氧化TRX和其他氧化蛋白二硫化物底物的还原,以及硒酸盐脂质氢过氧化物,维生素K和过氧化氢。1,2,4-7 TRXRS调节了几种氧化还原敏感的生物学过程,包括凋亡和细胞生长,增殖和生存,并与癌症,神经退行性疾病,慢性炎症性疾病,自身免疫性疾病和寄生虫的病理有关。4,8-10
热蛋白质组分析 (TPP) 和高通量蛋白质组整体溶解度变化 (PISA) 检测等高通量技术的进步彻底改变了我们对药物-蛋白质相互作用的理解。尽管有这些创新,但缺乏用于对稳定性和溶解度变化数据进行交叉研究分析的综合平台,这是一个重大瓶颈。为了解决这一差距,我们推出了 DORSSAA(基于稳定性/溶解度变化检测的药物-靶标相互作用组学资源),这是一个交互式且可扩展的基于网络的平台,用于系统分析和可视化蛋白质组稳定性和溶解度变化检测数据集。目前,DORSSAA 拥有 480,456 条记录,涵盖 37 种细胞系和生物体、39 种化合物和 40,004 个潜在蛋白质靶标。通过其用户友好的界面,该资源支持比较药物-蛋白质相互作用分析并促进可操作治疗靶标的发现。我们利用白血病细胞系联合治疗中 DHFR-甲氨蝶呤相互作用和药物-靶标相互作用的两个案例研究,证明了 DORSSAA 在跨实验条件识别蛋白质-药物相互作用方面的实用性。该资源使研究人员能够加速药物发现并增强我们对蛋白质行为的理解。
热蛋白质组分析 (TPP) 和蛋白质组整体溶解度变化 (PISA) 等高通量技术的进步彻底改变了我们对药物-蛋白质相互作用的理解。尽管有这些创新,但缺乏用于对稳定性和溶解度变化数据进行交叉研究分析的综合平台,这是一个重大瓶颈。为了解决这一差距,我们推出了 DORSSAA(基于稳定性/溶解度变化分析的药物靶标相互作用组学资源),这是一个基于网络的交互式平台,用于系统分析和可视化蛋白质组稳定性和溶解度变化分析数据集。DORSSAA 拥有 480,456 条记录,涵盖 37 种细胞系和生物体、39 种化合物和 40,004 个潜在蛋白质靶标。通过其用户友好的界面,该资源支持比较药物-蛋白质相互作用分析并促进可操作治疗靶标的发现。我们通过白血病细胞系联合治疗中 DHFR-甲氨蝶呤相互作用和药物-靶标相互作用的两个案例研究,证明了 DORSSAA 在跨实验条件识别蛋白质-药物相互作用方面的实用性。该资源使研究人员能够加速药物发现并增强我们对蛋白质行为的理解。
百日咳的主要病原体百日咳是一种重新出现的病原体,最近中国爆发了疫苗耐药菌株,并出现了大环内酯类耐药菌株,这对该疾病的控制提出了新的担忧。因此需要新的疫苗和潜在的新抗生素。百日咳博德特氏菌培养繁琐,需要几天的生长时间才能在琼脂培养基上计数分离的菌落,这使得大规模筛选新的抗百日咳博德特氏菌化合物或对大量免疫血清进行功能评估变得困难。在此,我们开发了一种可扩展、快速、高通量的基于发光的百日咳博德特氏菌生长抑制测定法 (BGIA),以量化用抗百日咳博德特氏菌化合物处理后存活的细菌。发现发光和菌落形成单位之间存在很强的相关性 (r2 = 0.9345, p < 0.0001),并且 BGIA 表现出高灵敏度和重现性。我们在此证明,BGIA 可用于以易于操作和快速的方式量化百日咳博德特氏菌对抗生素的耐药性、对补体和对人血清的敏感性。我们优化了该检测方法,并测试了不同百日咳博德特氏菌菌株和生长条件对血清和补体敏感性的影响。我们还发现了补体独立的抗体介导的百日咳博德特氏菌生长抑制。因此,BGIA 可有效地用于大规模血清研究,以进一步在功能水平上研究抗百日咳博德特氏菌免疫反应,以及用于筛选百日咳博德特氏菌菌株对抗生素或补体的耐药性,以及用于新型抗百日咳博德特氏菌化合物的高通量筛选。
1 克劳德·伯纳德里昂第一大学制药与生物科学研究所 (ISPB),69373 里昂,法国 2 里昂南医院生物化学与分子生物学系,里昂民间临终关怀院,69495 Pierre-Bénite,法国 3 里昂癌症学创新中心 (CICLY) EA 3738,里昂南医学与助产学院,克劳德·伯纳德里昂第一大学,69921 Oullins,法国 4 里昂民间临终关怀院癌症研究所循环癌症 (CIRCAN) 计划,69495 Pierre-Bénite,法国 5 里昂南医学与助产学院,克劳德·伯纳德里昂第一大学,69921 Oullins,法国 6 里昂南肺病学系急性呼吸道疾病与胸部肿瘤学Hospital, Hospices Civils de Lyon, 69495 Pierre-Bénite, France 7 细胞和分子放射生物学实验室 UMR CNRS5822/IP2I,南里昂医学与医学学院,Claude Bernard University Lyon I, 69921 Oullins, France 8 生物信息学系,Hospices Civils de Lyon, 69008 Lyon, France 9 INOVOTION, 38700 拉特龙什, 法国 * 通讯地址: lea.payen-gay@chu-lyon.fr
摘要:确定个体对病原体、自身抗原或环境因子的体液免疫反应性传统上是通过评估血液中的特定抗体水平来实现的。然而,在许多情况下,特异性抗体的滴度会随着时间的推移而下降,因此不能如实地反映先前的抗原暴露或免疫记忆的建立。因此,为了评估个体的体液免疫能力,有必要评估功能性 B 细胞记忆。在这里,我们描述了新的 B 细胞 ELISPOT 和 FluoroSpot 检测(统称为 ImmunoSpot),这些检测可以快速开发和验证,以在体外和单细胞分辨率下表征对任何所需抗原特异的记忆 B 细胞 (B mem ) 库。此外,B 细胞 FluoroSpot 检测的多重变体能够以最少的细胞材料要求对分泌不同抗体类别和/或 IgG 亚类的抗原特异性 B 细胞进行高通量测试。 B 细胞 ImmunoSpot 检测还可以测量抗原特异性 B mem 区室内的亲和力分布,并允许进行交叉反应测量,从而可以深入了解针对未来病原体变体建立的 B mem。总的来说,这里介绍的 ImmunoSpot ® 系统具有高度可重复性,并且可以轻松验证是否适用于受监管的测试。新获得的监测抗原特异性 B mem 区室的能力应该会促进对健康和疾病中的体液免疫的更全面了解。
描述 EIF2AK2 激酶检测试剂盒旨在测量 EIF2AK2(真核翻译起始因子 2 α 激酶 2)激酶活性,以使用 ADP-Glo™ 作为检测试剂进行筛选和分析应用。该检测试剂盒采用方便的 96 孔格式,含有足够的纯化重组 EIF2AK2 激酶(氨基酸 252 端)、激酶底物、ATP 和激酶检测缓冲液,可用于 100 次酶反应。背景 EIF2AK2(真核翻译起始因子 2 α 激酶 2,也称为 PKR)是一种蛋白激酶,已证实参与 HIV/gp120 相关神经变性。1 EIF2AK2 是 gp120 神经毒性的关键介质,也是对各种形式的环境压力作出反应的蛋白激酶家族的底物。EIF2AK2 在 mRNA 翻译、细胞增殖和细胞凋亡中起着关键作用。 EIF2AK 和 p53 之间的新型串扰可能对细胞增殖和肿瘤发生有影响。应用
摘要和证据分析:考虑到具有辅助化学疗法的辅助化学疗法的患者的证据,他们接受Oncotype dx(21基因测定)接受基因表达分析的证据,包括多项前瞻性临床试验和前瞻性反应性研究。归类为低风险DX的患者的复发风险较低,在这种情况下,避免辅助化疗是合理的(10年的平均风险为3%-7%; 95%置信区间的上限[CI],6%至10%)。这些结果已通过更强的研究设计来评估生物标志物。证据足以确定该技术会改善净健康结果。对于患有早期节点阴性的浸润性乳腺癌的个体,考虑辅助化疗的辅助化学疗法接受了带有内脑的基因表达谱分析,证据包括3项前瞻性回顾性研究和观察性研究。研究表明,较低的分数与10年远处复发的绝对风险较低有关(这2个较大的研究的平均风险为10年,3%-6%; 95%CI的上限,6%至9%)。证据足以确定该技术会改善净健康状况
用高分辨率原位检测脑制剂中的蛋白质,评估蛋白质-蛋白质相互作用。邻近连接试验 (PLA) 是一种与 DNA 滚动环状扩增 (RCA) 相结合的免疫测定法,是一种易于使用的方法,越来越多地用于原位检测抗原邻近性。PLA 可以高灵敏度地检测和量化分子之间的相互作用。与传统的免疫组织化学 (IHC) 测定相比,PLA 在靶分子可能的相互作用方面提供了更高的分辨率。此外,PLA 不需要常规免疫组织学研究中使用的专用设备。自 2002 年 Fredriksson 及其同事报告该技术以来(Fredriksson 等人,2002),PLA 已广泛用于研究蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质-核酸相互作用、蛋白质修饰和蛋白质表达(Gomez、Shankman、Nguyen 和 Owens,2013;Gu 等人,2013;Gullberg 等人,2004;Lonskaya、Desforges、Hebron 和 Moussa,2013;Roussis、Guille、Myers 和 Scarlett,2016;Soderberg 等人,2006;Trifilieff 等人,2011)。该技术已成功商业化,最初由 Olink(瑞典)生产的 Duolink PLA 试剂盒目前由 Sigma-Aldrich 提供。 Duolink PLA 荧光检测试剂盒可用于绿色 (490/520nm)、橙色 (542/562nm)、红色 (593/622nm) 和 FarRed 646/664nm 的荧光标记,而 DuoLink PLA 明场检测试剂盒使用辣根过氧化物酶 (HRP) 及其底物 NovaRed 进行明场显微镜检查。
