201 North Braddock 2NB 401 CFA 工作室 灵活 23 201 North Braddock 2NB 402 CFA 工作室 灵活 21 300 S. Craig 3SC 106 SCS SCS 教务处 40 300 S. Craig 3SC 110 DTC SCS SCS 教务处 教室 灵活 38 300 S. Craig 3SC 115 SCS SCS 教务处 64 300 S. Craig 3SC 172 SCS SCS 教务处 教室 灵活 76 300 S. Craig 3SC 265 SCS SCS/ISR 教室 灵活 76 311 S. Craig CA 108 CMU III 教室 灵活 40 311 S. Craig CA 115 CMU III 教室 灵活 64 407 S. Craig 4SC 104 SCS SCS 教务处 教室 灵活 90 Ansys Hall ANS 101 CIT 专业商店 固定 38 Ansys Hall ANS 106 教学实验室 CIT MEG 实验室 灵活 30 Ansys Hall ANS B02 协作集群 CIT 计算机实验室 灵活 16 Ansys Hall ANS B10 CIT 计算机实验室 灵活 48 Ansys Hall ANS C01 HIGH BAY - TECHSPARK CIT 专业商店 灵活 58 Ansys Hall ANS C02 CIT 专业商店 灵活 42 Ansys Hall ANS C03 CIT 专业商店 灵活 8 Ansys Hall ANS C05 CIT 专业商店 灵活 10 Ansys Hall ANS C07 CIT 办公室 灵活 2
2010 年 10 月 26 日下午 7:00 市长和市政委员会核心小组会议在新泽西州多佛市北苏塞克斯街 37 号的议会厅举行。市长 Dodd 于下午 7:00 宣布会议开始。全体成员向国旗宣誓效忠,牧师 Darcy 为会议祈祷,祈求指引和力量,为我们的城镇和市民做正确的事情。点名:出席:市政委员会成员 Delaney、Poolas、Donofrio、Picciallo、Timpani、Romaine、Blackman 和市长 Dodd 缺席:市政委员会成员 Visioli 出席的还有管理员 Close、律师 Pennella 和书记员 Verga 书记员 Verga 表示已向官方报纸发出充分通知。市政信函:1. 伦道夫镇的法令,关于重新采用第 15-52 条地块分级许可证 2. 洛克威镇的法令,关于修改分区规定和标志 3. 里弗代尔自治市镇的决议,关于支持莫里斯县市政书记员并敦促州议会改革《公开公共记录法》(OPRA) 4. 多佛市规划委员会关于申请听证会的通知,关于 6 W. Blackwell St./经营餐厅 5. 莫里斯县市政联盟主办的新泽西州警察局应急管理科指挥官 Dennis P. McNulty 少校演讲邀请 6. 莫里斯县商会主办的经济展望和商业领袖奖午宴邀请 7. 新泽西州政府效率和最佳实践论坛邀请
abcoleman@ucsd.edu办公室时间:星期一2 - 3 pm在约克3080d(我的办公室)和约克2300(地下会议室)。,如果我们需要更多的房间,我们将从我的办公室开始,然后搬到会议室;会议室就在我办公室的楼梯下。讲座:讲座将被预先记录,您将在自己的时间观看。您将每周观看大约1小时的演讲录音,重要的是要在相应的实验室会议之前观看它们。实验室:星期二和星期四在约克大厅3306和3406举行; A01/A02:9:30 AM - 1:20 PM第B01/B01/B02:2:00 - 5:50 PM课程目标:本课程将介绍一些用于生物化学和分子生物学的实验方法,重点是用于研究蛋白质的这些技术。您将获得蛋白质纯化技术的概念理解和动手经验,以及分析蛋白质的丰度和特性的方法。实验室工作将包括多周的项目,每个实验室都会将其运送到下一个。所有实验室工作都将强调掌握在生物化学实验室中独立工作的技能,包括动手湿lab和定量推理技能。更重要的是,本课程旨在对其运作方式表示赞赏。科学不仅是一堆随机事实……这是一个过程!当您了解我们如何知道我们对它的了解时,更容易理解生物学或任何领域。了解生物学中的信息如何揭示与信息本身一样重要。通过实验室项目,我们将开发从实验中解释数据所需的技能,以回答有关生物系统的问题,并设计实验以提出新问题。与此相符,在所有实验中都将突出显示良好的实验设计的重要性,包括使用适当的控件。
A01 Mm.235137 NM_007926 Aimp1 氨酰 tRNA 合成酶复合物相互作用多功能蛋白 1 A02 Mm.103205 NM_007553 Bmp2 骨形态发生蛋白 2 A03 Mm.1283 NM_011329 Ccl1 趋化因子(CC 基序)配体 1 A04 Mm.4686 NM_011330 Ccl11 趋化因子(CC 基序)配体 11 A05 Mm.867 NM_011331 Ccl12 趋化因子(CC 基序)配体 12 A06 Mm.41988 NM_011332 Ccl17 趋化因子(CC 基序)配体 17 A07 Mm.424740 NM_011888 Ccl19 趋化因子(CC 基序)配体 19 A08 Mm.290320 NM_011333 Ccl2 趋化因子(CC 基序)配体 2 A09 Mm.116739 NM_016960 Ccl20 趋化因子(CC 基序)配体 20 A10 Mm.12895 NM_009137 Ccl22 趋化因子(CC 基序)配体 22 A11 Mm.31505 NM_019577 Ccl24 趋化因子(CC 基序)配体 24 A12 Mm.1282 NM_011337 Ccl3 趋化因子(CC 基序)配体 3 B01 Mm.244263 NM_013652 Ccl4 趋化因子(CC 基序)配体 4 B02 Mm.284248 NM_013653 Ccl5 趋化因子(CC 基序)配体 5 B03 Mm.137 NM_009139 Ccl6 趋化因子(CC 基序)配体 6 B04 Mm.341574 NM_013654 Ccl7 趋化因子(CC 基序)配体 7 B05 Mm.42029 NM_021443 Ccl8 趋化因子(CC 基序)配体 8 B06 Mm.416125 NM_011338 Ccl9 趋化因子(CC 基序)配体 9 B07 Mm.274927 NM_009912 Ccr1 趋化因子(CC 基序) 受体 1 B08 Mm.8021 NM_007721 Ccr10 趋化因子 (CC 基序) 受体 10 B09 Mm.6272 NM_009915 Ccr2 趋化因子 (CC 基序) 受体 2 B10 Mm.57050 NM_009914 Ccr3 趋化因子 (CC 基序) 受体 3 B11 Mm.1337 NM_009916 Ccr4 趋化因子 (CC 基序) 受体 4 B12 Mm.14302 NM_009917 Ccr5 趋化因子 (CC 基序) 受体 5 C01 Mm.8007 NM_009835 Ccr6 趋化因子 (CC 基序) 受体 6 C02 Mm.442098 NM_007720 Ccr8 趋化因子(CC 基序)受体 8 C03 Mm.4861 NM_011616 Cd40lg CD40 配体 C04 Mm.795 NM_007778 Csf1 集落刺激因子 1(巨噬细胞) C05 Mm.4922 NM_009969 Csf2 集落刺激因子 2(粒细胞-巨噬细胞) C06 Mm.1238 NM_009971 Csf3 集落刺激因子 3(粒细胞) C07 Mm.103711 NM_009142 Cx3cl1 趋化因子(C-X3-C 基序)配体 1 C08 Mm.21013 NM_008176 Cxcl1 趋化因子(CXC 基序)配体 1 C09 Mm.877 NM_021274 Cxcl10 趋化因子(CXC 基序)配体 10 C10 Mm.131723 NM_019494 Cxcl11 趋化因子(CXC 基序)配体 11 C11 Mm.303231 NM_021704 Cxcl12 趋化因子(CXC 基序)配体 12 C12 Mm.10116 NM_018866 Cxcl13 趋化因子(CXC 基序)配体 13 D01 Mm.64326 NM_011339 Cxcl15 趋化因子(CXC 基序)配体 15 D02 Mm.4660 NM_009141 Cxcl5 趋化因子(CXC 基序)配体 5 D03 Mm.766 NM_008599 Cxcl9 趋化因子(CXC 基序)配体 9 D04 Mm.234466 NM_009909 Cxcr2 趋化因子(CXC 基序)受体 2 D05 Mm.12876 NM_009910 Cxcr3 趋化因子(CXC 基序)受体 3 D06 Mm.6246 NM_007551 Cxcr5 趋化因子(CXC 基序)受体 5 D07 Mm.3355 NM_010177 Fasl Fas 配体(TNF 超家族,成员 6) D08 Mm.240327 NM_008337 Ifng 干扰素伽马 D09 Mm.379327 NM_008348 Il10ra 白细胞介素10 受体,α
方法在补充了10%FCS,1%谷歌补充剂(Gibco),100 U/ml青霉素和100μg/ml链霉菌素的IMDM(Gibco)中培养了衍生成近单倍型HAP1细胞的细胞培养。siRNA转染是根据制造商的指南使用Rnaimax(Invitrogen)进行的。在这项研究中使用了以下siRNA:Sinon-targetable(Dharmacon),Sipolg2(地平线,TargetPlus,SmartPool),SIMRPL23(Horizon,Targetplus,TargetPlus,Smartpool)。将所有药物(Aphidicolin,Hu,Olaparib,Rad51i(B02),DNA-PKI(NU74441)和寡霉素A)溶解在DMSO中,并以指示浓度使用。细胞使用具有137CS源的γ提取器(最佳疗法)进行γ辐射。生长测定HAP1细胞以1500个细胞/孔的密度将HAP1细胞铺在96孔板中,并被视为5天。5天后,使用100%甲醇固定细胞,并在室温下使用Crystal Violet染色2H。随后,将晶体紫溶解在10%乙酸中,并使用Biotek Epoch Epoch分光光度计在595 nm处测量强度。使用非线性拟合,sigmoidal,4pl,x是log(浓度),将这些测量值用于棱镜中的IC50计算。在9mm玻璃盖上生长免疫荧光细胞,并在室温下以4%甲醛和0.2%Triton X-100固定10分钟。使用了以下抗体:人类抗克雷斯特(Cortex Biochem,CS1058),兔抗PH3SER10(Campro,#07-081),小鼠抗ERCC6L(PICH)(ABNOVA,ABNOVA,000548421-B01P)。所有初级抗体在4°C的夜间孵育。使用固定缓冲液I(BD生物科学)固定细胞。细胞。二级抗体(分子探针,Invitrogen)和DAPI在室温下孵育2小时。使用延长金(Invitrogen)安装盖玻片。使用具有60倍1.40 Na油目标的Deltavision Deonvolution显微镜(Applied Precision)获取图像。SoftWorx(应用精度),ImageJ,Adobe Photoshop和Illustrator CS6用于处理获得的图像。单倍体插入诱变筛选基因对用APH或HU处理的HAP1细胞的存活至关重要,如先前所述35,使用单倍体插入诱变筛查鉴定。诱变的HAP1细胞是从Brummelkamp实验室获得的。简短地,获得HAP1细胞的诱变如下:在HEK293T细胞中产生了基因陷阱逆转录病毒。每天两次收获逆转录病毒至少三天,并通过离心(使用SW28转子进行2小时,21,000 rpm,4°C,4°C)进行沉淀。在8μg/ml硫酸素硫酸素的存在下,在T175烧瓶中至少连续两天,在8μg/ml硫酸素的存在下,将大约4000万个HAP1细胞通过浓缩基因陷阱病毒的转导而被诱变。在包含10%DMSO和10%FCS的IMDM培养基中冷冻诱变细胞。解冻后,在存在27.5 nm adphidicolin或100μmHu的情况下,将诱变的HAP1细胞转移了10天。传递后,通过胰蛋白酶-EDTA收集细胞,然后进行沉淀。为了最大程度地减少潜在地含有杂合突变的二倍体细胞的混杂,用DAPI染色固定的细胞,以允许使用Astrios Moflo对G1单倍体DNA含量进行分类。将3000万个排序的细胞在56°C下裂解过夜,以使使用DNA迷你试剂盒(QIAGEN)进行基因组DNA分离。插入位点映射基因陷阱插入位点通过LAM-PCR放大,然后进行捕获,ssDNA接头连接和指数放大,并在测序之前使用含有Illumina适配器的引物,如前所述,如前所述35。映射和插入位点的分析以前描述了78。简短地,在对HISEQ 2000或HISEQ 2500(Illumina)进行测序之后,将插入位点映射到人类基因组(H19),允许一个不匹配,并与RefSeq坐标相交,以将插入位点分配给基因。基因区域在相对链上重叠的基因区域没有考虑进行分析,而对于在相同链基因名称上重叠的基因是串联的。对于每种复制和两种药物治疗(APH或HU)基因的必要性都是通过二项式检验确定的。合成致死性。一个基因通过所有Fisher的测试,其p值截止为0.05,效应大小至少为0.12(减法比率wt sense比率 - 复制应力条件感官比率)。
