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通过 Cas12a/CBE 共编辑在 T0 代中产生无转基因抗溃疡病 Citrus sinensis cv. Hamlin
柑橘溃疡病影响柑橘生产。该病由柑橘黄单胞菌（Xcc）引起。先前的研究证实，在 Xcc 感染期间，转录激活因子样效应物 (TALE) PthA4 会从病原体转移到宿主植物细胞中。PthA4 与溃疡病易感基因 LOB1（EBE PthA4 -LOBP）启动子区中的效应物结合元件 (EBE) 结合，激活其表达，随后引起溃疡症状。之前，采用 Cas12a/CBE 共编辑方法破坏高度纯合的柚子的 EBE PthA4 -LOBP。然而，大多数商业柑橘品种都是杂合杂交种，更难产生纯合/双等位基因突变体。在这里，我们采用 Cas12a/CBE 共编辑方法来编辑 Hamlin（Citrus sinensis）的 EBE PthA4 -LOBP，这是一种在世界范围内种植的商业杂合柑橘品种。构建了二元载体 GFP- p1380N-ttLbCas12a:LOBP1-mPBE:ALS2:ALS1，并证明其可通过 Xcc 促进的农杆菌素过滤在 Hamlin 叶片中发挥作用。该构建体允许通过 GFP 选择无转基因再生体，编辑 ALS 以生成抗氯磺隆再生体作为基因组编辑的选择标记，这是通过 nCas9-mPBE:ALS2:ALS1 瞬时表达 T-DNA 的结果，并通过 ttLbCas12a 编辑感兴趣的基因（即本研究中的 EBE PthA4 -LOBP），从而产生无转基因柑橘。共产生了 77 株幼苗。其中 8 株幼苗为转基因植株（#Ham GFP 1 - #Ham GFP 8），4 株幼苗为非转基因植株（#Ham NoGFP 1 - #Ham NoGFP 4），其余为野生型。在 4 株非转基因幼苗中，三个品系（#Ham NoGFP 1、#Ham NoGFP 2 和 #Ham NoGFP 3）含有 EBE pthA4 的双等位基因突变，一个品系（#Ham NoGFP 4）含有 EBE pthA4 的纯合突变。我们在 C. sinensis cv. Hamlin 中实现了 EBE PthA4 – LOBP 的 5.2% 非转基因纯合/双等位基因突变效率，而之前研究中柚子的突变效率为 1.9%。重要的是，存活下来的 4 株无转基因植株和 3 株转基因植株均能抵抗柑橘
社论：螺旋质，支原体，植物性植物和其他基因组还原和无壁的软体动物：它们的遗传学，基因组学，力学，力学，相互作用，相互作用，与昆虫，其他动物，其他动物和植物的共生性
基因组减少，无壁和挑剔的螺旋质细菌，支原体，“念珠菌植物植物”和属于Mollicutes级的盟友，以许多独特的微生物学特征而闻名，这些特征促使研究人员调查其基础，应用程序，brown和Brown and Brown and Brown and and 2018。它们主要是居住在真核细胞上或内部的各种动物或植物的寄生或共生。螺旋体以其特征性的螺旋形状和主动抽搐运动性认可，与多样化的节肢动物和植物相关（Gasparich等，2020），并已开发为研究辅助共生体的模型（Anbutsu和Fukatsu，2011; Lo等，2016）。一些螺旋菌POULSONII和螺旋体Ixodetis菌株引起了其昆虫宿主的显着生殖表型，称为男性杀伤（Hurst and Frost，2015年）。相比之下，其他一些与昆虫相关的螺旋形保护其宿主免受天然敌人的侵害，包括寄生虫黄蜂，线虫和致病真菌（Ballinger and Perlman，2019年）。螺旋体柑橘和螺旋藻kunkelii分别臭名昭著，分别是柑橘和玉米的毁灭性病原体（Gasparich等，2020）。支原体不仅在医学上很重要，因为人类或动物病原体（如支原体肺炎）（Waites and Talkington，2004年）和霉菌性霉菌性甲状腺肿（Teodoro等人，2020年），而且还以最小的细菌
柑橘类基因的全基因组分析...
柑橘类水果因其营养价值而受到尊敬，面临着诸如柑橘溃疡之类的疾病的显着威胁，尤其是在巴基斯坦影响全球柑橘种植。这项研究深入研究了类似NPR1的基因，水杨酸（SA）的真正受体，在针对Xanthomonas axonopodis PV的防御机理中。citri（XCC）。通过进行全面的全基因组分析和系统发育研究，阐明了柑橘类基因的进化动力学。结构预测揭示了保守的结构域，例如BTB结构域和Ankyrin重复域，对防御机理至关重要。基序分析揭示了必不可少的保守模式，而顺式调节元素表明它们参与转录，生长，对植物激素的反应和压力。主要的细胞质和类似NPR1的基因的核定位强调了其在赋予对各种柑橘种类的耐药性方面的关键作用。对KS/Ka比率的分析表明，纯化NPR1样基因的选择，强调了它们在不同物种中的重要性。同义和染色体图提供了有关柑橘类物种重复事件和直系链接的见解。值得注意的是，XAC感染刺激了NPR1样基因的表达，揭示了它们对致病挑战的反应。有趣的是，XAC感染后QRT-PCR填充揭示了易感和抗柑橘类品种中表达的品种特异性改变。检查防御基因（NPR1）和植物的影响除了遗传因素之外，生理参数，例如过氧化物酶，总可溶性蛋白和二级代谢产物对SA依赖性PR基因的反应，造成植物特征。
水生生物疾病 62:255
摘要：传统上，螺原体仅从花和其他植物部位的表面、各种昆虫的内脏和血淋巴以及维管植物的液体（韧皮部汁液）和以这些液体为食的昆虫中分离出来。在本文中，我们报告了在虾中发现的第一种致病螺原体，以及通过组织学评估、原位杂交测定、透射电子显微镜、16S rRNA 序列同源性和注射感染性研究对其进行表征的结果。此外，还介绍了为检测这种微生物而开发的分子方法，该微生物被确定为哥伦比亚养殖的南美白对虾的病原体，导致其死亡率很高。使用标准组织学方法和原位杂交测定，证实南美白对虾感染了这种致病螺原体。组织学分析显示受影响器官/组织出现全身性炎症反应。为了鉴定细菌，使用来自初始流行区的冷冻感染南美白对虾样本对 16S rRNA 基因进行测序并开发分子检测方法。通过 PCR 扩增 16S rRNA 基因，然后进行测序。使用 GenBank BLAST 搜索分析序列数据，结果显示与柑橘树病原体柑橘螺原体有 98% 的同源性。对 16S rRNA 序列数据进行评估以开发针对假定螺原体的独特 PCR 引物。使用针对螺原体属的螺旋素基因开发的 PCR 引物，开发并测试了地高辛标记的探针。该探针是物种特异性的，与以此形式测试的其他细菌样本没有发生阳性反应或交叉反应。