2024年3月Dneasy®植物手册Dneasy Plant Mini Kit Dneasy Plant植物试剂盒,用于从植物细胞和组织或真菌Dneasy 96植物试剂盒中纯化总细胞DNA,以从组织中纯化DNA,从
*可以使用转子 - 赋予均匀均质器(例如Tissueruptor II)或珠磨机(例如TissuelySer II)来提高裂解效率。一种补充方案,允许使用TissuelySer II同时破坏多达48个组织样品,从Qiagen技术服务中获得。
注意:在Powerlyzer 24上,相当于慢于2500 rpm或比4000 rpm快的设置,使用FastPREP或前presellys同质化器无法获得。
在整个过程中,绝对需要仔细处理样品,以避免用另一个痕迹的一个样品污染一个样品,例如DNA微晶体可以放松时放松和打开管子,一一接触试管的盖子等。因此,有必要适应所有预防污染的操作。- 避免进行不适当的动作和触摸,在每个步骤之后或每当需要替换或至少在净化溶液(1 5)或乙醇(12)或次氯酸钠(1 4)中取代或至少取代的所有操作,或者根据表面和水(1 4)(1 4)。- 如果含有或可能包含DNA的液体必须掉落,则有必要立即用带有净化溶液的棉羊毛吸尘羊毛和染色表面(16),70%乙醇(13)或次氯酸钠溶液(1 4)。羊毛被扔进一袋底部废物中。- DNA分离是在一个样品的两个平行测定中进行的。- 在每次DNA绝缘材料(即样品和标准)中,有必要包括SO -called“空白”,绝缘控制,即没有植物材料的盲样样品,这些样品进一步转移了相关内基因的检测 - 以验证试剂的纯度以及在绝缘过程中没有样品污染的事实。
4。离心1分钟@≥8000x g。这是“洗手#1”。5。将列转移到新的1.5 ml管,标有相同名称和“洗手#2”。6。将50 µL缓冲液直接添加到柱膜上,然后在新管中离心1分钟 @≥8000x g。这是洗脱#2。7。将样品(洗脱#1和洗脱#2存储在4°C下。如果几个月不使用DNA,请为冰箱制作等分试样并保留
(12)(9)重复(10)和(11)的其余混合物。 (如果滤液是高粘性的,并且保留在色谱柱中,则建议在20,000 x g处离心。)(13)将Dneasy Mini Spin柱连接到新的2 mL收集管上,并添加500μL的缓冲液AW2。在室温下在6,000 x g处离心1分钟,然后丢弃滤液。 (14)将500μl的缓冲液AW2添加到Dneasy Mini自旋柱中,然后在室温下离心2分钟以干燥膜。 (15)将Dneasy Mini Spin柱转移到新的1.5 mL管,然后将50μl缓冲液AE直接转移到Dneasy膜上。在室温下(15-25°C)孵育5分钟后,在室温下在6,000 x g处离心1分钟,然后收集滤液。 (事先快速缓冲AE至65度增加了DNA的产量)3。确认DNA溶液的质量1)使用分光光度计在230 nm和260 nm处获得的样品DNA溶液的吸光度(A230,A260)测量。 <准备什么>
金枪鱼因其高需求,快速生产率和广泛的价格点而容易受到物种错误标签的影响。DNA条形码是一种基于测序的技术,可以通过靶向标准的DNA区域来检测物种错误标签。线粒体控制区域(CR)DNA条形码已被发现能够对金枪鱼进行物种歧视,但是从罐头金枪鱼中回收整个DNA碎片是一项挑战。虽然CR的短片段(称为“迷你 - 巴士”)显示出在罐装金枪鱼物种识别方面的成功,但需要更多的研究以提高识别率。这项研究的目标是确定使用CR Mini-Barcoding鉴定罐头金枪鱼的最佳DNA提取方法。使用标记为Albacore,Light Tuina,Skipjack或Yellowfn的24个不同的金枪鱼的样品组比较了四个商业DNA提取试剂盒。所有样品均以重复测试。使用Qiagen Dneasy血液和组织试剂盒和Qiagen Dneasy Mericon食品试剂盒发现了最大的成功,这导致了42%的样品鉴定物种。相比,MP生物医学fastPREP-24 + MACHERY-NAGEL NUCLOSPIN组织试剂盒导致了30%样品的物种识别,以及Qiagen Dneasy血液和组织 + PowerClean Pro Clearup Kit在物种鉴定中导致了21%的样品。总体而言,与CR小型金枪鱼产品一起使用的最佳表现DNA提取方法被确定为Dneasy血液和组织试剂盒和Dneasy Mericon食品套件。
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