图1:使用(a)NT17衍生的肽和(b)GST-HTT-EXON1(46Q)融合蛋白的序列。用于GST-HTT-EXON1(46Q)融合蛋白,用因子XA裂解GST会启动聚集。(c)HTT-EXON1模拟肽HTT-EXON1(46Q)单独或与每个NT17肽孵育的THT聚合测定数据。HTT-EXON1(46Q)浓度约为10μM,与肽的孵育约为1:1 HTT-EXON1(46Q):肽比率。条件,然后平均为HTT-EXON1(46Q)对照。错误条表示SEM。使用学生的t检验, *表示p值<0.05,**表示相对于HTT-EXON1(46Q)控制,p值为<0.01。(d)在没有HTT-EXON1的情况下,用NT17衍生的肽进行的控制测定法(46Q)。对控制HTT-EXON1(46Q)绘制了响应以供参考。
mstnab +/− 鲤鱼的体长显著增加(Shahi et al.,2022),为经济鱼类的养殖产量提供了有希望的方向。因此,我们选择大黄鱼的mstnb作为靶基因。经检测,我们设计的针对外显子1中编码序列的8个靶标中的两个sgRNA是有效的(图1b)。与野生型鱼中的序列相比,检测到了5个缺失突变,包括同时发生的12 bp、28 bp、36 bp、83 bp和97 bp缺失(图2c)。与单个gRNA微注射(Shahi et al.,2022,Tao et al.,2021,Zhang et al.,2020b)不同,同时注射多个gRNA可能诱导两个靶位点之间更大片段的缺失(图2c)。该方法也被考虑并应用于斑马鱼视网膜疾病模型研究中,采用基于CRISPR/Cas9系统的更快速有效的策略
结果:本研究纳入4例女性患者,年龄从8岁到44岁不等。1例患者的肿瘤位于右顶叶,另3例患者的肿瘤位于脊髓。组织学通常以星形母细胞的假菊形团和血管透明变性为特征。这些肿瘤表现出与传统颅内星形母细胞瘤相似的生长方式,4例患者的组织学表现均为高级别,表现为肿瘤细胞高密度区或坏死。免疫组化染色显示4例患者均表达OLIG2、EMA和波形蛋白,3例患者还表达GFAP和S-100。3例患者的Ki-67阳性指数约为15%,1例患者约为10%。使用分离探针的荧光原位杂交(FISH)显示3例患者存在EWRS1断裂,1例患者存在MN1断裂。进一步的DNA或RNA靶向双等位基因测序发现病例1存在EWSR1(外显子1-7)-BEND2(外显子2-14)融合,病例2存在EWSR1(外显子1-7)-BEND2(基因间)融合。病例3存在EWSR1(外显子1-7)-NUDT10(基因间)融合,病例4存在MN1(外显子1)-BEND2(外显子2)融合。EWSR1-NUDT10基因融合是星形母细胞瘤的一种新融合类型。患者的随访时间分别为76.5、17.6、33.7和61.3个月。3例在脊髓部位出现肿瘤复发,病例4出现多发性复发。
