真菌和卵菌病原体的破坏性导致农作物产量大幅下降,这些病原体继续威胁着全球粮食安全。尽管人们已经使用化学和文化控制来保护农作物,但这些措施需要持续的成本和时间,而且植物病原体对杀菌剂的抗性报道也越来越多。保护农作物免受植物病原体侵害的最有效方法是培育抗病品种。然而,传统的育种方法既费力又费时。最近,CRISPR/Cas9 系统已被用于增强水稻、可可、小麦、番茄和葡萄等不同作物的抗病性。该系统允许通过 RNA 引导的 DNA 内切酶活性对各种生物进行精确的基因组编辑。除了作物的基因组编辑外,编辑真菌和卵菌病原体的基因组也可以为植物病害管理提供新的策略。本综述重点介绍了最近使用 CRISPR/Cas9 系统对植物抗真菌和卵菌病原体的研究。对于长期植物病害管理,利用 CRISPR/Cas9 针对多种植物抗病机制以及通过该系统探测真菌和卵菌基因组所获得的见解将成为有效的方法。
几丁质是 β-1,4-连接的 N-乙酰葡萄糖胺 (GlcNAc) 的线性均聚物,对细胞活力至关重要。几丁质由膜定位的几丁质合酶家族(Chs1 至 3 和白色念珠菌中的 Chs8)合成,其中 Chs1 是必需的 [1]。多抗霉素和日光霉素是 Chs 酶的强效抑制剂,由于结构相似,它们会与 Chs 底物 UDP-GlcNAc 竞争 Chs 结合,但对整个细胞的作用有限。日光霉素 Z 对引起呼吸道感染的球孢子菌有效。该药在感染后 2 天将真菌肺部负担降低了 6-log 40,但由于缺乏资金,临床试验被终止 [1,2]。参与几丁质合成的酶具有专门的功能,但在特定条件下可能在功能上冗余。此外,Chs 家族成员之间蛋白质结构的细微差异使高效几丁质合酶抑制剂的开发变得复杂。例如,Chs1 特异性抑制剂 RO-09-3143 可阻断 Chs1 形成隔膜并抑制细胞生长,但 Chs1 抑制仅在 chs2 Δ 缺失突变体中致死,表明功能冗余 [3]。其他几丁质合酶抑制剂(如 3-取代氨基-4-羟基香豆素衍生物)也被发现具有抗真菌活性 [4],但尚未用于临床。
摘要:先前的研究表明,Fe II / a -酮戊二酸依赖性双加氧酶 AsqJ 诱导了构巢曲霉中绿藻素生物合成的骨架重排,从苯并[1,4]二氮杂-2,5-二酮底物中生成喹诺酮骨架。我们报告称,AsqJ 催化了一个完全不同的额外反应,只需改变苯并二氮杂-2,5-二酮底物的取代基即可。这种新机制是通过底物筛选、功能探针的应用和计算分析建立的。AsqJ 从合适的苯并[1,4]二氮杂-2,5-二酮底物的杂环结构中切除 H 2 CO 以生成喹唑啉酮。这种新型 AsqJ 催化途径由复杂底物中的单个取代基控制。 AsqJ 这种独特的底物导向反应性使得能够有针对性地生物催化生成喹诺酮或喹唑啉酮,这两种生物碱框架具有特殊的生物医学意义。
(未经同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此预印本的版权所有者此版本于 2021 年 2 月 14 日发布。;https://doi.org/10.1101/2021.02.13.431112 doi:bioRxiv preprint
摘要:强制性生物营养真菌病原体,例如blumeria graminis和puccinia graminis,是最具毁灭性的植物病原体之一,在全球许多经济上重要的农作物中导致巨大的产量损失。然而,缺乏可靠的工具进行有效的遗传转化已阻碍了其毒力或致病性的分子基础。在这项研究中,我们介绍了乌斯利戈·霍尔德(Ustilago Hordei) - 巴利(Barley)病态,以表征来自不同植物致病真菌的效应子的模型。我们生成U. Hordei的单性菌株,该菌株形成不兼容的交配伴侣而形成传染性细丝。单性菌株适用于真菌毒力因子的异源表达系统。高效的CRISPR/CAS9基因编辑系统可用于U. Hordei。此外,使用透射电子显微镜分析了大麦定殖过程中的Hordei感染结构,表明U. Hordei形成了与专有锈蚀和白粉病真菌形成的与Haustoria相似的细胞内感染结构。因此,U. Hordei具有很高的潜力,作为大麦异源效应蛋白功能研究的真菌表达平台。
摘要:腐生担子菌分泌的漆酶是一种多功能生物催化剂,仅需氧气即可氧化多种芳香族化合物。酿酒酵母是真菌漆酶工程的首选宿主。为了帮助酵母分泌活性酶,天然信号肽通常被酿酒酵母α交配因子(MF α 1)的前原前导序列取代。然而,在大多数情况下,只能获得基础酶水平。在酿酒酵母中与α因子前原前导序列融合的漆酶的定向进化过程中,我们证明了信号肽中积累的突变显著提高了酶的分泌。在这里,我们描述了为增强在酿酒酵母培养物液体提取物中检测到的漆酶活性而实施的不同蛋白质工程方法。我们通过使用实验室中连续进行的漆酶进化活动获得的适应性最强的突变 α 因子前导序列,证明了天然和工程漆酶的分泌得到改善。我们还特别关注了蛋白质 N-糖基化在漆酶生产和特性中的作用,以及通过共识设计引入保守氨基酸,从而能够表达酵母原本不会产生的某些漆酶。最后,我们修改了在之前的定向进化活动中积累的漆酶编码序列 (CDS) 突变的贡献,这些突变促进了酶的生产。
目的:确定第三纪转诊中心真菌角膜炎的微生物特征,危险因素,治疗和手术干预率。方法:从2009年至2019年进行了Centro HospitalArtivertáriodeSãoJoão大学对住院的患者的微生物和医疗记录的回顾性回顾。结果:总体而言,我们的研究中包括43名患者。患者的平均年龄为63.7岁,男性为46.5%。在培养物中分离出22(51.2%)丝状真菌和21(48.8%)酵母。 念珠菌物种(n = 20,46.5%),镰刀菌种(n = 10,23.4%)和曲霉物种(n = 4,9.3%)是最常见的分离物种。 重要的危险因素是隐形眼镜使用(n = 24,55.8%),局部皮质类固醇的长期使用者(n = 19,44.2%)和先前的角膜炎(n = 19,44.2%)。 酵母菌株与丝状皮质类固醇的长期使用者相比,长期使用者的统计学意义更高(p = 0.043)。 24例(55.8%)需要手术干预,其中23例接受了治疗性穿透性角膜造成术。 眼并发症,例如12例患者(27.9%)和5例(11.6%)的眼部并发症。 在处理后,没有发现最佳校正视力(BCVA)的统计学上的显着变化(p = 0.687)。 结论:大多数真菌性角膜炎患者都有相关的危险因素。 丝状和酵母菌物种具有同样普遍的病因。 通常,我们的结果反映出真菌性角膜炎的方法和治疗方法可能是多么困难和挑战。在培养物中分离出22(51.2%)丝状真菌和21(48.8%)酵母。念珠菌物种(n = 20,46.5%),镰刀菌种(n = 10,23.4%)和曲霉物种(n = 4,9.3%)是最常见的分离物种。重要的危险因素是隐形眼镜使用(n = 24,55.8%),局部皮质类固醇的长期使用者(n = 19,44.2%)和先前的角膜炎(n = 19,44.2%)。酵母菌株与丝状皮质类固醇的长期使用者相比,长期使用者的统计学意义更高(p = 0.043)。24例(55.8%)需要手术干预,其中23例接受了治疗性穿透性角膜造成术。眼并发症,例如12例患者(27.9%)和5例(11.6%)的眼部并发症。在处理后,没有发现最佳校正视力(BCVA)的统计学上的显着变化(p = 0.687)。结论:大多数真菌性角膜炎患者都有相关的危险因素。丝状和酵母菌物种具有同样普遍的病因。通常,我们的结果反映出真菌性角膜炎的方法和治疗方法可能是多么困难和挑战。关键字:真菌角膜炎,危险因素,医疗疗法,穿透性角膜生成形术,视觉结果
• 所有霉菌活性剂中都存在大量孔洞 • 多烯类、棘白菌素类 – 缺乏肠内制剂 • 唑类 – 口服吸收和代谢不可预测 • 靶向暴露不良 – 尤其是需要气道治疗时 • 将良好药物送入上皮/肺内膜液 (ELF/LLF) 一直存在问题,但在某些情况下(肺移植、慢性肺病)对于气道疾病和治疗至关重要
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