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World File Search SystemGAPDH
具有GAPDH参考基因的新型实时PCR，用于反刍动物
摘要：Peste des Petits反刍动物（PPR）是一种严重的急性，高度传染性的疾病，是由Peste des Petits反刍动物病毒（PPRV）引起的。本研究旨在建立具有内部扩增对照的QRT-PCR测定，以快速准确地检测PPRV。PPRV N的引物和探针基于中国PPR诊断技术的国家标准，设计了一对引物和TAQ MAN探针，用于设计甘油醛-3-磷酸盐脱氢酶（GAPDH）的参考基因。进行了反应条件，特异性，灵敏度和可重复性测试以及临床样本检测的优化。结果表明，对于参考基因GAPDH的最佳引物和探针浓度分别为0.4μmol/L和0.4μmol/L，分别为0.4μmol/L和0.2μmol/L。已建立的方法与其他病毒没有交叉反应。PPRV的最小检测极限为6.8副本/µl，GAPDH的副本为190份/µL。PPRV和GAPDH的变异系数（CV％）都低于2％。结果表明，包含内部参考基因的PPRV QRT-PCR方法具有很强的特异性，高灵敏度和良好的可重复性。添加用于样品质量控制的内部参考基因可提高检测的准确性。
ARID1A参与胃癌的DNA双链断裂修复
使用Trizol试剂（Invitrogen，Carlsbad，CA，美国）提取总RNA。使用Prime-Script RT试剂试剂盒（完美的实时，日本Takara）合成互补的DNA（cDNA）。3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）用作内部对照基因，并使用2 – DDCT公式计算折叠诱导。使用SYBR Premix ex Taq进行定量实时PCR分析（日本Takara。Inc.目录编号DRR041A）（PCR协议：阶段1：早期讲述，重复：1;95℃30s阶段2：PCR反应，重复：40; 95℃5 s; 60℃30s阶段3：熔体曲线：熔体曲线：95℃15s; 60 s; 60 s; 60 s; 95 s; 95 s; 95 s;95℃15s）。使用了以下引物：ARID1A（F）5'-CTTCACTCAGTCAGCTCCCA-3'，arid1a（r）5'-GGTCACCCCACCCTCATCTCATACTCCTTT-3'，gapdh（f）5'-GGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTCTCTCTCTCTCTCCTGATCTCAACA-3'，and gapdh（R） 5'-GTTGCTGCCCAAATTCGTTGT-3'。GAPDH用作内源性对照。每次三份重复每个样本，并使用相对定量软件（Applied Biosystems）分析。
天蓝色影像系统
图 5. 使用 AzureRed 和化学发光 Western Blot 同时检测总蛋白。通过 SDS-PAGE 分离 2 倍连续稀释的 HeLa 裂解物并转移到 PVDF 膜上。半干转移完成后，用 AzureRed 总蛋白染料对膜进行染色。然后用 Azure 化学发光印迹封闭缓冲液封闭印迹，然后与小鼠抗 GAPDH 孵育。用 Azure 印迹洗涤缓冲液洗涤印迹 3 次，然后用 Azure 山羊抗小鼠 HRP 二抗孵育。用 Radiance ECL 底物检测化学发光信号。底物孵育后，对印迹进行成像以产生总蛋白染色和 GAPDH 蛋白的叠加。AzureRed 显示为绿色，GAPDH 显示为灰色。
表Si。乳腺癌免疫疗法及其结果的完整临床研究清单。1个表Si。逆转录中使用的引物 - 3'）鼠标-GAPDH f1个表Si。逆转录中使用的引物 -3'）鼠标-GAPDH f
Mouse-GAPDH F: GGTTGTCTCCTGCGACTTCA R: TGGTCCAGGGTTTCTTACTCC Mouse-IL-6 F: AACCACGGCCTTCCCTACTT R: TCTGCAAGTGCATCATCGTTGT Mouse-CXCL2 F: ACTGAACAAAGGCAAGGCTAACT R: ACATAACAACATCTGGGCAATGG Mouse-HMOX1 F：ccagacaccgctcctccagt r：ccaggcaagattctcctctccttacag鼠标 - slc7a5 f：tggagtgtgtggcattggcattggcttc r：agagcaccgtcaccacagagaagagattnfaip3 Aggagccaggaagtaatcaagaa r：GCTAGAGATAGCAGGGCAGGT F，前向； R，反向。
粘液菌的Aberystwyth University掠夺性策略...
摘要：由粘液细菌融合的掠食性外膜囊泡（OMV）与革兰氏阴性细菌的外膜融合，将有毒的货物引入猎物。在这里，我们使用了产生荧光OMV的粘粒细胞杆菌的菌株，用革兰氏阴性细菌的摄入量来测定OMV的摄取。M. Xanthus菌株比测试的猎物菌株所采用的OMV材料少得多，这表明将OMV重新融合并以某种方式抑制了生产生物体。对不同猎物的OMV杀伤活性与粘细菌细胞的掠食性活性密切相关，但是，OMV杀死活性与它们与不同猎物融合的倾向之间没有相关性。先前已经提出，Xanthus GapDH M. Xanthus gapdh通过增强OMV融合与猎物细胞的诱导活性。因此，我们表达并纯化的Xanthus甘油醛-3-磷酸二磷酸甲基甲基甲基甲醛脱氢酶和磷酸甘油激酶的活性融合蛋白（GAPDH和PGK； Moonlight酶；具有其他活性在糖含量/糖素异生中的作用以外的其他活性，以调查任何培训培训）。GAPDH和PGK都没有引起猎物细胞的裂解或增强的OMV介导的猎物细胞的裂解。然而，即使在没有OMV的情况下，两种酶也抑制大肠杆菌的生长。我们的结果表明，融合效率不是猎物杀死的决定因素，而是对OMV货物和共归化酶的抵抗力决定了是否可以被粘霉菌捕食。
利用半胱氨酸反应探针进行基于活性的蛋白质组学筛选，发现非半胱氨酸靶向共价抑制剂
摘要：酶的共价抑制剂作为药物种子越来越受到重视，但发现非半胱氨酸靶向抑制剂仍然具有挑战性。在此，我们报告了在基于活性的 1601 个反应性小分子蛋白质组学筛选过程中的一次有趣经历，其中我们监测了库分子与半胱氨酸反应性碘乙酰胺探针竞争的能力。一种环氧分子 F8 表现出对限速糖酵解酶甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (GAPDH) 的探针反应性的意外增强。深入的机制分析表明，F8 与活性位点的天冬氨酸形成共价加合物以取代酶的辅因子 NAD + ，同时增强了探针与催化半胱氨酸的反应。机制基础使我们能够识别优化的天冬氨酸反应性 GAPDH 抑制剂。我们的研究结果表明，利用半胱氨酸反应探针进行基于活性的蛋白质组学筛选可用于发现与非半胱氨酸残基反应的共价抑制剂。
欧洲药物化学杂志
甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）是一种关键的糖酵解酶，在癌细胞的能量代谢中起着至关重要的作用，并已被认为是抗癌药物发展的宝贵目标。在一系列5个溶解的3-溴-4,5-二羟唑（BDHI）衍生物中，我们鉴定了螺旋形化合物11，它能够以更快的koning contens noverativitivity noveritivity与Koning conse nocents novers notive，它能够使重组的重组人共价抗反应率，而已知的酸性含量为potent hat of thangect hate hate hate hate of potenthg potenthg potec。计算研究证实，构象刚化对于稳定抑制剂与结合位点的相互作用至关重要，因此有利于随后的共价形成。对不同pH的固有弹头反应性的研究揭示了11种自由硫醇的反应性可忽略不计，强调了其与其他硫基团相对于HGAPDH的活化半胱氨酸有选择性反应的能力。化合物11在四种不同的胰腺癌细胞系中强烈降低了癌细胞的生长，其抗增生活性与HGAPDH的细胞内抑制良好相关。总体而言，我们的结果有资格11在Hibitor中具有有效的HGAPDH共价，具有中等的药物样反应性，可以进一步利用以发展抗癌药。
检查更新 核转运蛋白 XPO1 抑制剂可增强 KRAS G12C 抑制剂在 KR 临床前模型中的抗癌功效
小时。（C）免疫印迹显示用 AMG510 单独处理（300 nmol/L）或与 selinexor（100 nmol/L）组合处理 24 小时的 MiaPaCa-2 细胞的核和细胞质部分中 Rb 的表达。Lamin B1 和 GAPDH 分别用作核和细胞质部分的上样对照。（D）免疫印迹显示用 selinexor（300 nmol/L）和 MRTX1257 处理的 MiaPaCa-2 细胞中 KRAS 和 NF- κ B 表达降低
转座元件的压抑增强了干扰素beta信号传导和
图1：与光子相比，质子辐射的类器官显示出更高的自我更新能力和IFN-β响应。（a）自我更新测定法的示意图。在第5天进行辐照，并在第18天的自我更新后计算了按器官形成效率（Ofe％）的定量。（b）自我更新后培养中器官的代表性图像。比例尺，100 µm。（c）相对于对照样品的折叠变化（FC）所示的器官定量。n = 9动物/病情。（d）大量RNA-Seq分析的示意图。RNA。（e）前10名重要（p.adj。<0.05）在辐照后2和6天，质子与控制和光子对照中的生物过程。（f）显着（p <0.05）ISG的基因表达水平从辐照后6天的类器官的大量RNA-seq数据推断出来。数据相对于对照样品显示为log 2 FC。（g）辐照后6天对ISG的RT-QPCR分析。数据相对于对照样品显示为FC。n = 4个动物/状况。（h）辐照后6天后对类器官的STAT1，PSTAT1和GAPDH的Western印迹分析。（i）STAT1的蛋白质印迹定量（图1i和S2e）。STAT1蛋白水平的GAPDH标准化。 数据相对于对照样品显示为FC。 n = 6只动物/状况。 数据是平均值±s.e.m。 学生的T检验和双向ANOVA。 *p <0.05，** p <0.01。STAT1蛋白水平的GAPDH标准化。数据相对于对照样品显示为FC。n = 6只动物/状况。数据是平均值±s.e.m。学生的T检验和双向ANOVA。*p <0.05，** p <0.01。另请参见图S1和S2。