GeneArt 基因合成服务为您的日常 DNA 工作提供便利、灵活和可靠的服务。基因合成是一种经济高效、节省时间和资源的方法,可 100% 准确地获得所需的 DNA 构建体(图 2)。它是传统分子生物学技术的真正替代品,同时能够实现更好、更可靠的蛋白质表达和质量。GeneArt 基因合成工具超越了传统的基因合成,能够优化表达以获得最佳性能。
GeneArt DNA 和蛋白质服务无论您是想节省时间还是改进现有流程,GeneArt 服务都能为您的所有外包需求提供单一资源。
仅供研究使用。不可用于诊断程序。© 2024 Thermo Fisher Scientific Inc. 保留所有权利。除非另有说明,所有商标均为 Thermo Fisher Scientific 及其子公司的财产。Amersham 和 Typhoon 是 Cytiva 的商标。SnapGene 是 GSL Biotech LLC 的商标。Gibson Assembly 是 Telesis Bio, Inc. 的商标,经许可和授权使用。APN-9114086 1024
使用Nebuilder HIFI HIFI DNA组装大师组合(NEB#E2621),Geneart Gibson组装混合物(Thermo Fisher#A46627)和Fifusion Snap组装组合(TAKARBLEBLBLEBLEBLBLEBLEBLEM)(TAKARE MIX)(TAKARA)(TAKARE MIX)(takARe Mix77),使用NEBUILDER HIFI HIFI HIFI GASSINBLY MIX(NEB#E2621),使用线性化载体(30 ng CRISPR核酸酶报告基因DNA)组装。在50°C下进行60分钟或15分钟进行组装反应。2μL组装的混合物被转化为NEB 5-Alpha胜任的大肠杆菌NEB#C2987)。通过PCR进一步筛选20个菌落,以确认插入物的存在。超过95%的从Nebuilder Hifi和Geneart Gibson组装反应中测试的菌落中包含适当的插入物,尽管Geneart Gibson组装产生的菌落较少。融合式快照没有产生任何成功的菌落。nebuilder Hifi DNA组装主混合均优于Geneart Gibson组装和融合式快照组件。
与基于质粒的 Cas9 系统相比,完整 RNA 格式的有效载荷更小,可更好地递送到细胞中并提高基因组编辑效率。此外,Cas9 mRNA 可用于具有多个 gRNA 的多重方法。使用此方法可确定哪种 gRNA 序列最适合特定靶标,或通过一次转染编辑多个基因组位点。使用 GeneArt Precision gRNA 合成试剂盒或 GeneArt CRISPR Strings 来制作靶标特异性 gRNA。
8. TrueDesign 基因组编辑器将显示优先设计为最接近预期编辑位置(最多 40 bp 距离)的 gRNA 和供体 DNA。gRNA 距离编辑位置越远,敲入效率越低。所有设计的供体 DNA 序列(现在包括同源臂)都将接受 GeneArt 基因合成制造可行性检查。如果供体 DNA 未通过检查,您将无法选择该 gRNA,并且该行将变灰。在这种情况下,请选择不同的 gRNA 或 TALEN 对(如果可用),或更改插入位置或同源臂长度。对于每个 CRISPR-Cas9 gRNA 和 TALEN 对,可以通过单击供体 DNA 列中的眼睛图标来查看供体 DNA 序列。要在您选择的克隆软件中查看和注释供体 DNA 序列,请单击供体 DNA 列中的下载图标下载 FASTA 文件。确保供体 DNA 位于框架内以实现 GFP 的最佳表达。