使用Nebuilder HIFI HIFI DNA组装大师组合(NEB#E2621),Geneart Gibson组装混合物(Thermo Fisher#A46627)和Fifusion Snap组装组合(TAKARBLEBLBLEBLEBLBLEBLEBLEM)(TAKARE MIX)(TAKARA)(TAKARE MIX)(takARe Mix77),使用NEBUILDER HIFI HIFI HIFI GASSINBLY MIX(NEB#E2621),使用线性化载体(30 ng CRISPR核酸酶报告基因DNA)组装。在50°C下进行60分钟或15分钟进行组装反应。2μL组装的混合物被转化为NEB 5-Alpha胜任的大肠杆菌NEB#C2987)。通过PCR进一步筛选20个菌落,以确认插入物的存在。超过95%的从Nebuilder Hifi和Geneart Gibson组装反应中测试的菌落中包含适当的插入物,尽管Geneart Gibson组装产生的菌落较少。融合式快照没有产生任何成功的菌落。nebuilder Hifi DNA组装主混合均优于Geneart Gibson组装和融合式快照组件。