10:45会议X CC1开发NJ还原的多维沿海湿地迁移和维护数据层McKenna Session XI HH1沿海沼泽修复:生态系统方法
在转基因作物中表达的外源蛋白的细胞定位不仅决定了其稳定性,而且还决定了它们对作物生长和发育的影响,包括在压力条件下;然而,潜在的分子机制仍然未知。在这里,我们通过亚细胞定位,免疫组织化学,免疫流畅和蛋白质印迹分析确定了抗昆虫的转基因水稻huahui-1(HH1)细胞中外源表达的Cry1Ab/c蛋白的细胞分布。通过酵母两杂交,双分子分子荧光互补(BIFC)和辅助药物分析研究了CRY1AB/C蛋白与初筛选的内源性质膜Ca 2+ ATPase之间的相互作用。通过比较CRY1AB/C和Ca 2+ ATPase之间的细胞定位和相互作用位点分析了潜在的相互作用机制。表型指数和Ca 2+ -ATPase活性在转基因HH1和父母线Minghui-63在无压力和盐压力的条件下确定,可以由CRY1AB/C-Ca 2+ -ATPase相互作用调节。结果表明,Cry1ab/C不仅分布在细胞质和核中,而且还分布在质膜上,在质膜上与质膜Ca 2+ -ATPase相互作用。通过BIFC实验,这种相互作用部分保留了细胞核中的质膜蛋白Ca 2+ ATPase,因此可能会通过改变蛋白质的细胞位置来影响膜上Ca 2+ -ATPase活性。一致地,我们的结果证实了转基因HH1中Cry1ab/c的存在导致Ca 2+ -ATPase活性的降低,并对植物表型造成不利影响,包括显着降低的植物高度和生物量,与亲属MH63相比;并且这些有害作用在盐应力条件下更明显,从而影响转基因
3.6 燃油系统,HFO 操作 ............................................................................................................. 34 3.6.1 柴油发动机残余燃料的要求(如加注) ................................................................................ 34 3.6.2 粘度/温度图 ............................................................................................................. 35 3.6.3 系统图 – 重质燃油操作 ............................................................................................. 36 3.6.4 HFO 系统组件 ............................................................................................................. 37 a) 细过滤器(已安装)HF1 ............................................................................................................. 37 b) 滤网 HF2 ............................................................................................................................. 37 c) 自清洁过滤器 HF4 ............................................................................................................. 38 d) 粘度计 HR2 ............................................................................................................................. 38 e) 压力泵 HP1/HP2 ............................................................................................................. 38 f) 循环泵 HP3/HP4 ............................................................................................................. 38 g)压力调节阀HR1................................................................
图 1. APPEAL 克隆。A、从载体 pYJA5 中去除氨苄青霉素抗性基因 (AmpR)。sgRNA1-4 和甲氧苄啶抗性基因 (TmpR) 与三个不同的 PCR 扩增子融合。所有元件均经过 Gibson 组装以形成 4sgRNA-pYJA5 质粒,并用甲氧苄啶筛选转化子。描绘了 4sgRNA-pYJA5 全质粒和 4sgRNA 盒的详细结构。LTR,长末端重复;Ψ,包装信号序列;PB,piggyBac 转座子元件;PuroR,嘌呤霉素抗性元件;hU6、mU6、hH1 和 h7SK 是普遍表达的 RNA 聚合酶 III 启动子;sg,sgRNA。 B、转化大肠杆菌并进行甲氧苄啶筛选后,代表性 pYJA5 限制性片段、3 片段 PCR 和 APPEAL 克隆产物的单菌落 PCR。Bbs I 消化 pYJA5 产生约 1 千碱基 (kb) 的 AmpR 元件条带和约 7.6 kb 的线性化载体条带(左)。使用相应的 sgRNA 引物进行 PCR 后,三个扩增子在琼脂糖凝胶上分别显示预期的 761、360 和 422 bp 大小(中)。使用转化细菌平板中 APPEAL 克隆产物 4sgRNA 盒两侧的引物进行单菌落 PCR 始终产生预期大小(2.2 kb,右)。 C ,8 个具有不同 4sgRNA 序列的独立 APPEAL 实验中正确、重组和突变 4sgRNA 质粒的百分比(每个实验测试 ≥22 个菌落)。D ,四个 APPEAL 实验中正确、重组和突变 4sgRNA 质粒的百分比。每个点代表一个由八个菌落组成的独立生物复制品(n=24;平均值 ± SEM)。E ,高通量格式的 APPEAL 克隆时间线(h:小时;d:天)。
