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中央浆膜脉络膜病的光学相干断层扫描术：血管模式和毛细血管流量密度的定量评估
抽象背景本研究旨在评估受中央浆膜脉络膜肾上腺病（CSC）影响的患者的光学相干层析造影血管造影（八八核血管造影）图像的血管模式和毛细血管流量密度（CFD）图。在这项回顾性队列研究中的方法，八颗（Angiovue rtvue Xr avanti，optovue）在基线时对CSC患者的两只眼睛的两只眼睛进行了3×3 mm黄斑扫描；对图像进行了细分，并将其与没有CSC的同伴以及年龄匹配的健康受试者进行了比较。八颗图像，以提供脉络膜毛细管变化的客观分级。通过自相关方法检查了八颗图像的纹理。导致CSC（40眼）的眼睛，我们发现了脉络膜毛细血管层脉管系统（CCL）的六种不同的形态模式，可能对应于OCT脉络膜脉络膜低反射性的不同等级和去率信号的八八八个。此外，八毛毛细管流量密度图显示在表面毛细血管丛中的毛细血管耗竭（p值= 0.0023），深血管网络（p值= <0.0001）和CCL中（p值= 0.0001）。在健康受试者中未观察到这种发现（13眼）。结论CSC中的OCTA是一个有用的工具，可以通过特定的CCL模式识别CSC的临床类型。此外，观察到CFD耗竭与内部视网膜层相关，表明内部血液视网膜屏障参与CSC。根据我们的结果，本文观察到的模式可能与疾病的不同临床亚型有关。
农业数字技术
3 Zoltan Madaras Viticurtural Developments在Pécs研究所应用数字技术解决方案5 Paul Schmit，Ranko Gantner，Anna Neubauer，AnnaGarré通过数字数据记录评估马匹的耕作技术lončarić挤满了克罗地亚的耕作数据11MarioKožul，Ivan Aleksi，ŽeljkoHederić的能源管理，用于在果园中使用的自主机器人平台12dušandušandunéerski，Ivana varga，darioiiljkić，darioiljkić，darioiiljkićyeakine sige toplation toplation 14Lukašumanovac，PetraPejić苹果识别和机器人操作的图像处理方法15 LechgaLęzewski，Edward Wilczewski，Marekkościński，Iwona Jaskulska，Jacek Majcher，Andrzej Wilczek Wilczek的可靠性，用于确定精确性农业ka kariran ka karjar ka jar ka jar ka ja ka ja ka繁殖计划17 DavoriC，ZdenkoLončarić的适用性和无人机获得的数据的适用性和可变的农作物的可变性EK，Antonio Viduka，TomislavKaražija，Goran Fruk数据集，用于对象检测
脑部 MRI 定量磁化率映射
人体研究中的 ROI 分析 两位获得委员会认证的神经放射科医生（SO 和 YF，拥有 20 年经验）一致将 ROI 放置在 QSM 图像的中心切片上的以下每个区域中：GP、壳核、尾状核、黑质、红核、齿状核和脉络丛的低信号强度区域。然后使用开源软件（ImageJ，版本 1.50；美国国立卫生研究院，马里兰州贝塞斯达）将 ROI 的位置应用于来自同一患者或志愿者的 CT 图像。我们还根据 CT 和 MRI 扫描（包括 QSM、T1 加权、T2 加权和 T2* 加权图像）和临床信息在出血和钙化病变上放置了 ROI。当抗磁性病变被顺磁性区域包围时，优先选择内侧抗磁性（钙化）部分放置ROI。对于每个有病变的患者，最多选择3个病变放置ROI。计算每个ROI的平均CT衰减值和平均QSM值（磁化率）。当平均QSM值为正值（顺磁性ROI）时，还计算最大和第95百分位CT衰减值以及最大和第95百分位QSM值，以更好地理解CT衰减值和磁化率的特征，这在表观扩散系数的分析中通常采用（18）。对于平均QSM值为负值的ROI（抗磁性ROI），计算最大和第95百分位CT衰减值以及最小和第5百分位QSM值。通过以下对 CT 衰减值与磁化率之间的相关性进行评估：顺磁性 ROI 的平均 CT 衰减值与平均 QSM 值、最大 CT 衰减值与最大 QSM 值、第 95 百分位 CT 衰减值与第 95 百分位 QSM 值；抗磁性 ROI 的平均 CT 衰减值与平均 QSM 值、最大 CT 衰减值与最小 QSM 值、第 95 百分位 CT 衰减值与第 5 百分位 QSM 值。
碱基编辑酶 APOBEC3A 以低效率和高选择性催化 RNA 中的胞嘧啶脱氨
A3A 和 eA3A 表达。A3A 表达构建体 (Addgene #109231) 之前已有描述，可用于纯化 A3A 作为融合蛋白 (MBP-A3A-His)，可进一步加工以生成分离的 A3A 结构域。32,33 对于 eA3A (A3A-N57G)，N57G 突变是通过 Q5 定点诱变 (New England Biolabs, NEB) 引入的。A3A 和 eA3A 构建体的细菌表达之前已有详细描述。 33 将纯化的 MBP-A3A-His、MBP-eA3A-His 或分离的 A3A 在 50 mM Tris-Cl（pH 7.5）、50 mM NaCl、10% 甘油、0.5 mM DTT 和 0.01% Tween-20 中透析过夜，并使用 BSA 标准曲线确定蛋白质浓度。基于 SwaI 的脱氨酶对 ssDNA 和嵌合底物的活性。5'-荧光素 (FAM) 荧光标记的底物 S35-dC 或具有单个靶核糖胞嘧啶的匹配底物（在其他 DNA 骨架中）（S35-rC）由 Integrated DNA Technologies (IDT) 合成，以及相关产品对照（S35-dU 和 S35-rU）。在最佳 A3A 反应条件（最终为 20 mM 琥珀酸：NaH 2 PO 4：甘氨酸 (SPG) 缓冲液 pH 5.5，0.1% Tween-20）下，用 6 倍稀释的未标记 A3A（从 1 µM 到 4 pM）处理 100 µM 寡核苷酸。反应在 37 ˚C 下进行 30 分钟，然后终止（95 ˚C，10 分钟）。然后加入 200 nM 互补链并退火。加入 SwaI (NEB)，在室温下消化过夜。加入甲酰胺上样缓冲液，样品加热变性（95 ˚C，20 分钟），然后在 50 ˚C 下在 20% 变性 TBE/尿素聚丙烯酰胺凝胶上运行。使用 Typhoon 成像仪（GE Healthcare）上的 FAM 滤光片对凝胶进行成像。使用 ImageJ 中的面积量化工具进行定量分析。720 碱基对 ssDNA 底物的合成。为了生成 ssDNA，使用 720 bp gBlock 基因片段 (IDT) 作为模板 (补充图 2a)，并使用 Taq 聚合酶 (NEB) 进行扩增，采用指数后线性 (LATE) PCR 反应方案，该方案采用相对于磷酸化的反向引物过量的正向引物。32 对反应物进行纯化 (NucleoSpin、Fisher)，然后在 37 ˚C 下用 核酸外切酶处理 1 小时以降解磷酸化链，然后进行热失活 (90 ˚C，10 分钟)。然后将产物在 2% 琼脂糖凝胶上运行，并使用凝胶 DNA 回收试剂盒 (Zymoclean) 回收 ssDNA。通过乙醇沉淀进一步纯化 ssDNA，并使用 Qubit ® 荧光计 (ThermoFisher) 测量其浓度。对于一个重复，ssDNA 以大分子寡核苷酸 (IDT) 的形式获得，并通过乙醇沉淀进一步纯化。720 聚体 RNA 底物的合成。使用 720 bp 基因块 (IDT) dsDNA 作为模板，在推荐条件下使用 TranscriptAid Enzyme Mix (ThermoFisher) 通过体外转录生成 RNA，并在 37 ˚C 下孵育两小时。然后通过苯酚-氯仿提取和乙醇沉淀纯化 RNA。将样品重新悬浮在无核酸酶的水中，并进一步用 MspI、XbaI 和 AclI 限制性酶 (NEB) 处理以消化任何剩余的 DNA 模板。在 37 ˚C 下孵育 1 小时后，使用 RNA Clean and Concentrator-5 试剂盒 (Zymo Research) 纯化 RNA。为了进一步确保完全去除模板 DNA，在 37 ˚C 下用 DNase I (Ambion) 处理 RNA 30 分钟。重复纯化 (RNA Clean and Concentrator-5)，并使用 Qubit ® 荧光计测量纯化 RNA 的浓度。通过“预测二级结构网络”预测 720 聚体中几个中尺度区域的二级结构
鉴定人类细胞中复制应力反应的关键因素Louise M.E. Janssen 1，Empar Baltasar Perez 1，Chantal Vaartin
方法在补充了10％FCS，1％谷歌补充剂（Gibco），100 U/ml青霉素和100μg/ml链霉菌素的IMDM（Gibco）中培养了衍生成近单倍型HAP1细胞的细胞培养。siRNA转染是根据制造商的指南使用Rnaimax（Invitrogen）进行的。在这项研究中使用了以下siRNA：Sinon-targetable（Dharmacon），Sipolg2（地平线，TargetPlus，SmartPool），SIMRPL23（Horizon，Targetplus，TargetPlus，Smartpool）。将所有药物（Aphidicolin，Hu，Olaparib，Rad51i（B02），DNA-PKI（NU74441）和寡霉素A）溶解在DMSO中，并以指示浓度使用。细胞使用具有137CS源的γ提取器（最佳疗法）进行γ辐射。生长测定HAP1细胞以1500个细胞/孔的密度将HAP1细胞铺在96孔板中，并被视为5天。5天后，使用100％甲醇固定细胞，并在室温下使用Crystal Violet染色2H。随后，将晶体紫溶解在10％乙酸中，并使用Biotek Epoch Epoch分光光度计在595 nm处测量强度。使用非线性拟合，sigmoidal，4pl，x是log（浓度），将这些测量值用于棱镜中的IC50计算。在9mm玻璃盖上生长免疫荧光细胞，并在室温下以4％甲醛和0.2％Triton X-100固定10分钟。使用了以下抗体：人类抗克雷斯特（Cortex Biochem，CS1058），兔抗PH3SER10（Campro，＃07-081），小鼠抗ERCC6L（PICH）（ABNOVA，ABNOVA，000548421-B01P）。所有初级抗体在4°C的夜间孵育。使用固定缓冲液I（BD生物科学）固定细胞。细胞。二级抗体（分子探针，Invitrogen）和DAPI在室温下孵育2小时。使用延长金（Invitrogen）安装盖玻片。使用具有60倍1.40 Na油目标的Deltavision Deonvolution显微镜（Applied Precision）获取图像。SoftWorx（应用精度），ImageJ，Adobe Photoshop和Illustrator CS6用于处理获得的图像。单倍体插入诱变筛选基因对用APH或HU处理的HAP1细胞的存活至关重要，如先前所述35，使用单倍体插入诱变筛查鉴定。诱变的HAP1细胞是从Brummelkamp实验室获得的。简短地，获得HAP1细胞的诱变如下：在HEK293T细胞中产生了基因陷阱逆转录病毒。每天两次收获逆转录病毒至少三天，并通过离心（使用SW28转子进行2小时，21,000 rpm，4°C，4°C）进行沉淀。在8μg/ml硫酸素硫酸素的存在下，在T175烧瓶中至少连续两天，在8μg/ml硫酸素的存在下，将大约4000万个HAP1细胞通过浓缩基因陷阱病毒的转导而被诱变。在包含10％DMSO和10％FCS的IMDM培养基中冷冻诱变细胞。解冻后，在存在27.5 nm adphidicolin或100μmHu的情况下，将诱变的HAP1细胞转移了10天。传递后，通过胰蛋白酶-EDTA收集细胞，然后进行沉淀。为了最大程度地减少潜在地含有杂合突变的二倍体细胞的混杂，用DAPI染色固定的细胞，以允许使用Astrios Moflo对G1单倍体DNA含量进行分类。将3000万个排序的细胞在56°C下裂解过夜，以使使用DNA迷你试剂盒（QIAGEN）进行基因组DNA分离。插入位点映射基因陷阱插入位点通过LAM-PCR放大，然后进行捕获，ssDNA接头连接和指数放大，并在测序之前使用含有Illumina适配器的引物，如前所述，如前所述35。映射和插入位点的分析以前描述了78。简短地，在对HISEQ 2000或HISEQ 2500（Illumina）进行测序之后，将插入位点映射到人类基因组（H19），允许一个不匹配，并与RefSeq坐标相交，以将插入位点分配给基因。基因区域在相对链上重叠的基因区域没有考虑进行分析，而对于在相同链基因名称上重叠的基因是串联的。对于每种复制和两种药物治疗（APH或HU）基因的必要性都是通过二项式检验确定的。合成致死性。一个基因通过所有Fisher的测试，其p值截止为0.05，效应大小至少为0.12（减法比率wt sense比率 - 复制应力条件感官比率）。
ORS 2025年会第334号会议论文
nesa.milan@ucsf.edu简介：肩袖撕裂会导致肩部疼痛和功能障碍，从而显着影响受影响患者的生活质量。肌肉萎缩和脂肪变性对肩袖（RC）修复后的临床结果产生负面影响。血流限制（BFR）是一种治疗方法，涉及血液流动的暂时限制，用于刺激下肢创伤和ACL重建后刺激肌肉再生和疼痛缓解[1]。但是，BFR的基本机制仍然未知，并且尚未应用于RC损伤。纤维生成祖细胞（FAP）是常驻的骨骼肌干细胞，已证明具有向肌原细胞捐赠线粒体的能力，以减少肌肉退化和RC泪液后的肩部功能改善[2]。这项研究的目的是研究BFR促进肌肉再生，改善肩部功能并缓解RC撕裂后的疼痛的能力和机制。我们假设BFR诱导了从FAP到肌细胞的水平线粒体转移，从而增强了肌肉再生，改善运动学功能并减轻RC损伤后的疼痛。方法：由于其解剖位置，直接将BFR应用于RC肌肉在技术上具有挑战性。取而代之的是，我们将BFR应用于肩膀附近的同侧臂，提出了一种更可行和转化的方法。这是通过将正畸橡皮筋涂在RC损伤的臂上，持续10分钟，然后切除10分钟，进行3个周期。小鼠。进行了功率分析，以确定所需的最小样本量。我们首先对健康的男性Prrx1-Cre/mitotag Fap-Monochondria Reporter小鼠（n = 4/组）测试了BFR。supraspinatus（SS）肌肉在手臂的同侧带有BFR，以进行组织学分析。在PRRX1-CRE/MITOTAG小鼠（n = 8/组）上，对BFR对受伤的RC肌肉的影响，单侧SS和肌腱横向和神经（TT+DN）进行了诱导RC撕裂。小鼠随机分配每三天或无作为对照治疗接受同侧ARM BFR。记录了手术前后小鼠的步态，并使用基于AI的步态分析系统（称为BlackBoxò）进行分析。疼痛。小鼠，并分析了SS肌肉的Mitotag信号传导和肌纤维大小。使用ImageJ分析所有图像。在基线时使用Blackbox和DeepLabcut评估运动学功能，并在OP后6周评估了前步长的长度和体重比率。 所有程序均由我们的IACUC批准。 结果：同侧ARM BFR在诱导SS肌肉中从FAP到肌细胞的线粒体转移具有显着影响（图1A-G）。 这种效果持续了BFR后长达3天，大约10.7％的肌纤维仍含有FAP转移的线粒体（图1E，G）。 与非BFR对照相比，在TT+DN损伤后2和6周，BFR在SS中的FAP线粒体转移显着增加（图2A-E，G）。运动学功能，并在OP后6周评估了前步长的长度和体重比率。所有程序均由我们的IACUC批准。结果：同侧ARM BFR在诱导SS肌肉中从FAP到肌细胞的线粒体转移具有显着影响（图1A-G）。这种效果持续了BFR后长达3天，大约10.7％的肌纤维仍含有FAP转移的线粒体（图1E，G）。与非BFR对照相比，在TT+DN损伤后2和6周，BFR在SS中的FAP线粒体转移显着增加（图2A-E，G）。此外，BFR处理后的平均肌纤维大小显着增加（横截面肌纤维面积，1d：2250±909.3μm2vs基线：1250±635μm2；图1A-F，H），在3天返回到基线。与对照相比，在TT+DN后2周，BFR治疗的肌肉的肌纤维大小明显更大（2315±442.5μm2vs 897.7±308.2μm2，图2A-D，F），表明其抗嗜性作用。在TT+DN损伤后6周，BFR和对照之间的肌纤维大小没有差异（图2A-D，H）。在运动参数方面，与非BFR对照组（p <0.05）相比，BFR显着改善了小鼠（平均= 2.16厘米）的小鼠（平均= 2.16厘米）的右手前步长（平均= 2.16厘米）（P <0.05）（图3A）。与非BFR对照组相比，BFR治疗组（平均值= 0.99）（平均= 0.55）（p <.01），BFR治疗组的前爪体重比（同侧/对侧）显着提高（平均值= 0.99）。该数据表明，TT+DN后，BFR显着缓解了小鼠的肩部疼痛（图3B）。