抽象背景本研究旨在评估受中央浆膜脉络膜肾上腺病(CSC)影响的患者的光学相干层析造影血管造影(八八核血管造影)图像的血管模式和毛细血管流量密度(CFD)图。在这项回顾性队列研究中的方法,八颗(Angiovue rtvue Xr avanti,optovue)在基线时对CSC患者的两只眼睛的两只眼睛进行了3×3 mm黄斑扫描;对图像进行了细分,并将其与没有CSC的同伴以及年龄匹配的健康受试者进行了比较。八颗图像,以提供脉络膜毛细管变化的客观分级。通过自相关方法检查了八颗图像的纹理。导致CSC(40眼)的眼睛,我们发现了脉络膜毛细血管层脉管系统(CCL)的六种不同的形态模式,可能对应于OCT脉络膜脉络膜低反射性的不同等级和去率信号的八八八个。此外,八毛毛细管流量密度图显示在表面毛细血管丛中的毛细血管耗竭(p值= 0.0023),深血管网络(p值= <0.0001)和CCL中(p值= 0.0001)。在健康受试者中未观察到这种发现(13眼)。结论CSC中的OCTA是一个有用的工具,可以通过特定的CCL模式识别CSC的临床类型。此外,观察到CFD耗竭与内部视网膜层相关,表明内部血液视网膜屏障参与CSC。根据我们的结果,本文观察到的模式可能与疾病的不同临床亚型有关。
3 Zoltan Madaras Viticurtural Developments在Pécs研究所应用数字技术解决方案5 Paul Schmit,Ranko Gantner,Anna Neubauer,AnnaGarré通过数字数据记录评估马匹的耕作技术lončarić挤满了克罗地亚的耕作数据11MarioKožul,Ivan Aleksi,ŽeljkoHederić的能源管理,用于在果园中使用的自主机器人平台12dušandušandunéerski,Ivana varga,darioiiljkić,darioiljkić,darioiiljkićyeakine sige toplation toplation 14Lukašumanovac,PetraPejić苹果识别和机器人操作的图像处理方法15 LechgaLęzewski,Edward Wilczewski,Marekkościński,Iwona Jaskulska,Jacek Majcher,Andrzej Wilczek Wilczek的可靠性,用于确定精确性农业ka kariran ka karjar ka jar ka jar ka ja ka ja ka繁殖计划17 DavoriC,ZdenkoLončarić的适用性和无人机获得的数据的适用性和可变的农作物的可变性EK,Antonio Viduka,TomislavKaražija,Goran Fruk数据集,用于对象检测
人体研究中的 ROI 分析 两位获得委员会认证的神经放射科医生(SO 和 YF,拥有 20 年经验)一致将 ROI 放置在 QSM 图像的中心切片上的以下每个区域中:GP、壳核、尾状核、黑质、红核、齿状核和脉络丛的低信号强度区域。然后使用开源软件(ImageJ,版本 1.50;美国国立卫生研究院,马里兰州贝塞斯达)将 ROI 的位置应用于来自同一患者或志愿者的 CT 图像。我们还根据 CT 和 MRI 扫描(包括 QSM、T1 加权、T2 加权和 T2* 加权图像)和临床信息在出血和钙化病变上放置了 ROI。当抗磁性病变被顺磁性区域包围时,优先选择内侧抗磁性(钙化)部分放置ROI。对于每个有病变的患者,最多选择3个病变放置ROI。计算每个ROI的平均CT衰减值和平均QSM值(磁化率)。当平均QSM值为正值(顺磁性ROI)时,还计算最大和第95百分位CT衰减值以及最大和第95百分位QSM值,以更好地理解CT衰减值和磁化率的特征,这在表观扩散系数的分析中通常采用(18)。对于平均QSM值为负值的ROI(抗磁性ROI),计算最大和第95百分位CT衰减值以及最小和第5百分位QSM值。通过以下对 CT 衰减值与磁化率之间的相关性进行评估:顺磁性 ROI 的平均 CT 衰减值与平均 QSM 值、最大 CT 衰减值与最大 QSM 值、第 95 百分位 CT 衰减值与第 95 百分位 QSM 值;抗磁性 ROI 的平均 CT 衰减值与平均 QSM 值、最大 CT 衰减值与最小 QSM 值、第 95 百分位 CT 衰减值与第 5 百分位 QSM 值。
A3A 和 eA3A 表达。A3A 表达构建体 (Addgene #109231) 之前已有描述,可用于纯化 A3A 作为融合蛋白 (MBP-A3A-His),可进一步加工以生成分离的 A3A 结构域。32,33 对于 eA3A (A3A-N57G),N57G 突变是通过 Q5 定点诱变 (New England Biolabs, NEB) 引入的。A3A 和 eA3A 构建体的细菌表达之前已有详细描述。 33 将纯化的 MBP-A3A-His、MBP-eA3A-His 或分离的 A3A 在 50 mM Tris-Cl(pH 7.5)、50 mM NaCl、10% 甘油、0.5 mM DTT 和 0.01% Tween-20 中透析过夜,并使用 BSA 标准曲线确定蛋白质浓度。基于 SwaI 的脱氨酶对 ssDNA 和嵌合底物的活性。5'-荧光素 (FAM) 荧光标记的底物 S35-dC 或具有单个靶核糖胞嘧啶的匹配底物(在其他 DNA 骨架中)(S35-rC)由 Integrated DNA Technologies (IDT) 合成,以及相关产品对照(S35-dU 和 S35-rU)。在最佳 A3A 反应条件(最终为 20 mM 琥珀酸:NaH 2 PO 4:甘氨酸 (SPG) 缓冲液 pH 5.5,0.1% Tween-20)下,用 6 倍稀释的未标记 A3A(从 1 µM 到 4 pM)处理 100 µM 寡核苷酸。反应在 37 ˚C 下进行 30 分钟,然后终止(95 ˚C,10 分钟)。然后加入 200 nM 互补链并退火。加入 SwaI (NEB),在室温下消化过夜。加入甲酰胺上样缓冲液,样品加热变性(95 ˚C,20 分钟),然后在 50 ˚C 下在 20% 变性 TBE/尿素聚丙烯酰胺凝胶上运行。使用 Typhoon 成像仪(GE Healthcare)上的 FAM 滤光片对凝胶进行成像。使用 ImageJ 中的面积量化工具进行定量分析。720 碱基对 ssDNA 底物的合成。为了生成 ssDNA,使用 720 bp gBlock 基因片段 (IDT) 作为模板 (补充图 2a),并使用 Taq 聚合酶 (NEB) 进行扩增,采用指数后线性 (LATE) PCR 反应方案,该方案采用相对于磷酸化的反向引物过量的正向引物。32 对反应物进行纯化 (NucleoSpin、Fisher),然后在 37 ˚C 下用 核酸外切酶处理 1 小时以降解磷酸化链,然后进行热失活 (90 ˚C,10 分钟)。然后将产物在 2% 琼脂糖凝胶上运行,并使用凝胶 DNA 回收试剂盒 (Zymoclean) 回收 ssDNA。通过乙醇沉淀进一步纯化 ssDNA,并使用 Qubit ® 荧光计 (ThermoFisher) 测量其浓度。对于一个重复,ssDNA 以大分子寡核苷酸 (IDT) 的形式获得,并通过乙醇沉淀进一步纯化。720 聚体 RNA 底物的合成。使用 720 bp 基因块 (IDT) dsDNA 作为模板,在推荐条件下使用 TranscriptAid Enzyme Mix (ThermoFisher) 通过体外转录生成 RNA,并在 37 ˚C 下孵育两小时。然后通过苯酚-氯仿提取和乙醇沉淀纯化 RNA。将样品重新悬浮在无核酸酶的水中,并进一步用 MspI、XbaI 和 AclI 限制性酶 (NEB) 处理以消化任何剩余的 DNA 模板。在 37 ˚C 下孵育 1 小时后,使用 RNA Clean and Concentrator-5 试剂盒 (Zymo Research) 纯化 RNA。为了进一步确保完全去除模板 DNA,在 37 ˚C 下用 DNase I (Ambion) 处理 RNA 30 分钟。重复纯化 (RNA Clean and Concentrator-5),并使用 Qubit ® 荧光计测量纯化 RNA 的浓度。通过“预测二级结构网络”预测 720 聚体中几个中尺度区域的二级结构
方法在补充了10%FCS,1%谷歌补充剂(Gibco),100 U/ml青霉素和100μg/ml链霉菌素的IMDM(Gibco)中培养了衍生成近单倍型HAP1细胞的细胞培养。siRNA转染是根据制造商的指南使用Rnaimax(Invitrogen)进行的。在这项研究中使用了以下siRNA:Sinon-targetable(Dharmacon),Sipolg2(地平线,TargetPlus,SmartPool),SIMRPL23(Horizon,Targetplus,TargetPlus,Smartpool)。将所有药物(Aphidicolin,Hu,Olaparib,Rad51i(B02),DNA-PKI(NU74441)和寡霉素A)溶解在DMSO中,并以指示浓度使用。细胞使用具有137CS源的γ提取器(最佳疗法)进行γ辐射。生长测定HAP1细胞以1500个细胞/孔的密度将HAP1细胞铺在96孔板中,并被视为5天。5天后,使用100%甲醇固定细胞,并在室温下使用Crystal Violet染色2H。随后,将晶体紫溶解在10%乙酸中,并使用Biotek Epoch Epoch分光光度计在595 nm处测量强度。使用非线性拟合,sigmoidal,4pl,x是log(浓度),将这些测量值用于棱镜中的IC50计算。在9mm玻璃盖上生长免疫荧光细胞,并在室温下以4%甲醛和0.2%Triton X-100固定10分钟。使用了以下抗体:人类抗克雷斯特(Cortex Biochem,CS1058),兔抗PH3SER10(Campro,#07-081),小鼠抗ERCC6L(PICH)(ABNOVA,ABNOVA,000548421-B01P)。所有初级抗体在4°C的夜间孵育。使用固定缓冲液I(BD生物科学)固定细胞。细胞。二级抗体(分子探针,Invitrogen)和DAPI在室温下孵育2小时。使用延长金(Invitrogen)安装盖玻片。使用具有60倍1.40 Na油目标的Deltavision Deonvolution显微镜(Applied Precision)获取图像。SoftWorx(应用精度),ImageJ,Adobe Photoshop和Illustrator CS6用于处理获得的图像。单倍体插入诱变筛选基因对用APH或HU处理的HAP1细胞的存活至关重要,如先前所述35,使用单倍体插入诱变筛查鉴定。诱变的HAP1细胞是从Brummelkamp实验室获得的。简短地,获得HAP1细胞的诱变如下:在HEK293T细胞中产生了基因陷阱逆转录病毒。每天两次收获逆转录病毒至少三天,并通过离心(使用SW28转子进行2小时,21,000 rpm,4°C,4°C)进行沉淀。在8μg/ml硫酸素硫酸素的存在下,在T175烧瓶中至少连续两天,在8μg/ml硫酸素的存在下,将大约4000万个HAP1细胞通过浓缩基因陷阱病毒的转导而被诱变。在包含10%DMSO和10%FCS的IMDM培养基中冷冻诱变细胞。解冻后,在存在27.5 nm adphidicolin或100μmHu的情况下,将诱变的HAP1细胞转移了10天。传递后,通过胰蛋白酶-EDTA收集细胞,然后进行沉淀。为了最大程度地减少潜在地含有杂合突变的二倍体细胞的混杂,用DAPI染色固定的细胞,以允许使用Astrios Moflo对G1单倍体DNA含量进行分类。将3000万个排序的细胞在56°C下裂解过夜,以使使用DNA迷你试剂盒(QIAGEN)进行基因组DNA分离。插入位点映射基因陷阱插入位点通过LAM-PCR放大,然后进行捕获,ssDNA接头连接和指数放大,并在测序之前使用含有Illumina适配器的引物,如前所述,如前所述35。映射和插入位点的分析以前描述了78。简短地,在对HISEQ 2000或HISEQ 2500(Illumina)进行测序之后,将插入位点映射到人类基因组(H19),允许一个不匹配,并与RefSeq坐标相交,以将插入位点分配给基因。基因区域在相对链上重叠的基因区域没有考虑进行分析,而对于在相同链基因名称上重叠的基因是串联的。对于每种复制和两种药物治疗(APH或HU)基因的必要性都是通过二项式检验确定的。合成致死性。一个基因通过所有Fisher的测试,其p值截止为0.05,效应大小至少为0.12(减法比率wt sense比率 - 复制应力条件感官比率)。
nesa.milan@ucsf.edu简介:肩袖撕裂会导致肩部疼痛和功能障碍,从而显着影响受影响患者的生活质量。肌肉萎缩和脂肪变性对肩袖(RC)修复后的临床结果产生负面影响。血流限制(BFR)是一种治疗方法,涉及血液流动的暂时限制,用于刺激下肢创伤和ACL重建后刺激肌肉再生和疼痛缓解[1]。但是,BFR的基本机制仍然未知,并且尚未应用于RC损伤。纤维生成祖细胞(FAP)是常驻的骨骼肌干细胞,已证明具有向肌原细胞捐赠线粒体的能力,以减少肌肉退化和RC泪液后的肩部功能改善[2]。这项研究的目的是研究BFR促进肌肉再生,改善肩部功能并缓解RC撕裂后的疼痛的能力和机制。我们假设BFR诱导了从FAP到肌细胞的水平线粒体转移,从而增强了肌肉再生,改善运动学功能并减轻RC损伤后的疼痛。方法:由于其解剖位置,直接将BFR应用于RC肌肉在技术上具有挑战性。取而代之的是,我们将BFR应用于肩膀附近的同侧臂,提出了一种更可行和转化的方法。这是通过将正畸橡皮筋涂在RC损伤的臂上,持续10分钟,然后切除10分钟,进行3个周期。小鼠。进行了功率分析,以确定所需的最小样本量。我们首先对健康的男性Prrx1-Cre/mitotag Fap-Monochondria Reporter小鼠(n = 4/组)测试了BFR。supraspinatus(SS)肌肉在手臂的同侧带有BFR,以进行组织学分析。在PRRX1-CRE/MITOTAG小鼠(n = 8/组)上,对BFR对受伤的RC肌肉的影响,单侧SS和肌腱横向和神经(TT+DN)进行了诱导RC撕裂。小鼠随机分配每三天或无作为对照治疗接受同侧ARM BFR。记录了手术前后小鼠的步态,并使用基于AI的步态分析系统(称为BlackBoxò)进行分析。疼痛。小鼠,并分析了SS肌肉的Mitotag信号传导和肌纤维大小。使用ImageJ分析所有图像。在基线时使用Blackbox和DeepLabcut评估运动学功能,并在OP后6周评估了前步长的长度和体重比率。 所有程序均由我们的IACUC批准。 结果:同侧ARM BFR在诱导SS肌肉中从FAP到肌细胞的线粒体转移具有显着影响(图1A-G)。 这种效果持续了BFR后长达3天,大约10.7%的肌纤维仍含有FAP转移的线粒体(图1E,G)。 与非BFR对照相比,在TT+DN损伤后2和6周,BFR在SS中的FAP线粒体转移显着增加(图2A-E,G)。运动学功能,并在OP后6周评估了前步长的长度和体重比率。所有程序均由我们的IACUC批准。结果:同侧ARM BFR在诱导SS肌肉中从FAP到肌细胞的线粒体转移具有显着影响(图1A-G)。这种效果持续了BFR后长达3天,大约10.7%的肌纤维仍含有FAP转移的线粒体(图1E,G)。与非BFR对照相比,在TT+DN损伤后2和6周,BFR在SS中的FAP线粒体转移显着增加(图2A-E,G)。此外,BFR处理后的平均肌纤维大小显着增加(横截面肌纤维面积,1d:2250±909.3μm2vs基线:1250±635μm2;图1A-F,H),在3天返回到基线。与对照相比,在TT+DN后2周,BFR治疗的肌肉的肌纤维大小明显更大(2315±442.5μm2vs 897.7±308.2μm2,图2A-D,F),表明其抗嗜性作用。在TT+DN损伤后6周,BFR和对照之间的肌纤维大小没有差异(图2A-D,H)。在运动参数方面,与非BFR对照组(p <0.05)相比,BFR显着改善了小鼠(平均= 2.16厘米)的小鼠(平均= 2.16厘米)的右手前步长(平均= 2.16厘米)(P <0.05)(图3A)。与非BFR对照组相比,BFR治疗组(平均值= 0.99)(平均= 0.55)(p <.01),BFR治疗组的前爪体重比(同侧/对侧)显着提高(平均值= 0.99)。该数据表明,TT+DN后,BFR显着缓解了小鼠的肩部疼痛(图3B)。