摘要。背景:糖原合成酶-3激酶(GSK3)是与阿尔茨海默氏病(AD)中与神经纤维缠结有关的Tau高磷酸化的主要贡献者之一。目的:确定两个牙周细菌始终确认在AD尸体式大脑中始终确定的GSK-3激活的机制。方法:收集了牙龈卟啉单胞菌FDC381和放线菌Naeslundii ATCC10301条件培养基。imr-32细胞与条件培养基(ATCC33277)在既定的细胞培养条件下指定的PG.LPS(LPS)的牙龈疟原虫(ATCC33277)挑战48小时。进行了GSK-3的基因表达和蛋白质分析。结果:qPCR证明,用PG.LP处理的IMR-32细胞中GSK-3基因过表达,变化为2.09倍(P = 0.0005),而A. Naeslundii处理的细胞显示出1.41倍的变化(P = 0.004)。Western印迹在PG.LPS(P = 0.01)和A. Naeslundii条件培养基(P = 0.001)挑战的细胞中,对每种处理的37 kDa频段(p = 0.001)证明了在整个培养基中具有可变强度的每种处理。与pg.lps和a。naeslundii挑战的IMR-32细胞的GSK-3免疫组织化学表现出细胞质和核定位。结论:暴露于各种细菌因子上调GSK-3的基因表达。GSK-3的Western印迹确认了PG.LPS(37 kDa频带p = 0.01)和A. Naeslundii条件条件培养基(37 kDa频带p = 0.001)的裂解片段的存在。免疫染色显示GSK-3的细胞质和核定位。因此,通过其转录活性,裂解,碎片,a。naeslundii介导的GSK-3激活的pg.lps和未知因子。体内的这些毒力因素似乎对大脑健康有害。
fi g u r e 1在疫霉菌中核酸内切酶的表达表达。(a)五个代表性菌株的免疫印迹,用编码编码绿色荧光蛋白(GFP)标记的核酸酶的催化型核酸酶,PSNLS-DCAS9-GFP的质粒转化,用抗GFP探测。nc1和nc2是阴性对照,即分别表达另一种蛋白质和未转化的1306的菌株。蛋白质的预期大小为194 kDa。(b)表达PSNLS-DCAS9-GFP的转化剂的荧光显微照片,显示蛋白质在菌丝内的核的定位。GFP,明亮的场和合并的通道被上下显示,比例尺等于10 µm。 (c)用抗Cas12a探测的质粒转化的菌株的免疫印迹。nc是未转化的祖细胞菌株。从图像中删除了T9和NC之间的一个空车道。蛋白质的预期大小为153 kDa。(d)表达PSNLS-CAS12A-GFP的转化剂的共聚焦图像,显示左侧的菌丝,右侧显示孢子囊。GFP,明亮的场和合并的通道被上下显示,比例尺等于10 µm
TAQ DNA聚合酶是一种重组94 kDa DNA聚合酶,该聚合酶在带有克隆的Thermu Aquaticus DNA聚合酶基因的大肠杆菌菌株中表达。它具有5'-3'聚合酶和外切核酸酶活性,并且没有可检测到的3'-5'外切核酸酶活性。TAQ DNA聚合酶的延伸速率为1-2 kb/ min。此外,它具有3'腺苷酸化活性。因此,PCR产品可直接用于TA-CLONing程序。
TAQ DNA聚合酶是一种衍生自含水型菌群的重组DNA聚合物的DNA。其分子量为94 kDa。TAQ DNA聚合酶可以将靶DNA扩大到5KB(简单模具)。扩展速度为0.9〜1.2kb/min(70〜75 o C)。它具有5'至3'的活性,没有3'活性到5'外切酶,而没有导致含有3'-da末端的PCR产物。
相关性肿瘤坏死因子α(TNFα,也称为Cachectin和TNFSF1A是TNF超家族的原型配体。这是一种多效分子,在炎症,凋亡和免疫系统发育中起着核心作用。TNFα由多种免疫和上皮细胞类型产生。35个氨基酸(AA)细胞质结构域,21 aa跨膜段和178 AA AA细胞外域(ECD)的牛div>牛TNFα合成。在ECD中,牛TNFα与犬,棉花大鼠,马,猫,猫,人,小鼠,猪,大鼠和恒河类TNFα共享64%-83%的序列身份。26 kDa型2型跨膜蛋白被内部组装,形成非交易的Homerotrimerers。这种复合物的结扎诱导促进淋巴细胞共刺激但减少单核细胞反应性的反向信号。 通过TACE/ADAM17对膜结合的TNFα的切割释放了55 kDa可溶性三聚体的TNFα。 tnfα的三聚体结合了无处不在的TNF RI和造血细胞受限的TNF RII,这两种细胞也表示为同二聚体。 TNFα通过控制凋亡来调节淋巴组织的发育。 它还通过诱导血管内皮细胞和巨噬细胞的激活来促进炎症反应。 TNFα是几种炎症性疾病中的关键细胞因子。 它通过对胰岛素耐药性和脂肪酸代谢的影响有助于2型糖尿病的发展。这种复合物的结扎诱导促进淋巴细胞共刺激但减少单核细胞反应性的反向信号。通过TACE/ADAM17对膜结合的TNFα的切割释放了55 kDa可溶性三聚体的TNFα。tnfα的三聚体结合了无处不在的TNF RI和造血细胞受限的TNF RII,这两种细胞也表示为同二聚体。TNFα通过控制凋亡来调节淋巴组织的发育。它还通过诱导血管内皮细胞和巨噬细胞的激活来促进炎症反应。TNFα是几种炎症性疾病中的关键细胞因子。它通过对胰岛素耐药性和脂肪酸代谢的影响有助于2型糖尿病的发展。
RNase A是一种用于分子生物学应用的牛胰腺内切核酸酶。RNase A的主要应用是从制备质粒DNA以及提取质粒DNA中去除RNA。它也用于去除非特异性结合的RNA; RNase保护分析; RNA序列的分析以及蛋白质样品中包含的RNA的水解。rNase A在嘧啶核苷酸的3¢磷酸盐处攻击。PG-PG-PC-PA-PG的序列将被裂解以得到PG-PG-PCP和A-PG。最高的活性用单链RNA表现出来。RNase A是一个包含4个二硫键的单链多肽。 rnase a可以通过烷基化12或119的烷基化来抑制,这些烷基化存在于酶的活跃部位中。 RNase A的活化剂包括钾和钠盐。 Molecular mass: 13.7 kDa (amino acid sequence) Extinction coefficient: E1% = 7.1% (280nm) Isoelectric point: pI: 9.6 Optimum temperature: 60°C (activity range of 15 - 70°C) Optimum pH: 7.5 (activity range of 6 - 10) Inhibitors: Ribonuclease inhibitor Activity (Kunitz): ≥60 units/mg蛋白质RNase A是一个包含4个二硫键的单链多肽。rnase a可以通过烷基化12或119的烷基化来抑制,这些烷基化存在于酶的活跃部位中。RNase A的活化剂包括钾和钠盐。 Molecular mass: 13.7 kDa (amino acid sequence) Extinction coefficient: E1% = 7.1% (280nm) Isoelectric point: pI: 9.6 Optimum temperature: 60°C (activity range of 15 - 70°C) Optimum pH: 7.5 (activity range of 6 - 10) Inhibitors: Ribonuclease inhibitor Activity (Kunitz): ≥60 units/mg蛋白质RNase A的活化剂包括钾和钠盐。Molecular mass: 13.7 kDa (amino acid sequence) Extinction coefficient: E1% = 7.1% (280nm) Isoelectric point: pI: 9.6 Optimum temperature: 60°C (activity range of 15 - 70°C) Optimum pH: 7.5 (activity range of 6 - 10) Inhibitors: Ribonuclease inhibitor Activity (Kunitz): ≥60 units/mg蛋白质
在大肠杆菌中表达重组人BDNF蛋白的过程需要由人类BDNF蛋白的129-247AA整合的重组DNA基因形成,该基因形成的是人类BDNF蛋白和N末端6xhis-Sumo-Sumo标记序列的表达载体,该表达载体是必不可少的DNA基因,该基因构成了dna基因,该基因构成了incorm incorm incorm inscrim inscorm inscorm inscrip以及用于克隆表达载体的转录和翻译的组件。分离和纯化后,获得了N端6xhis-Sumo标记的重组BDNF蛋白。该重组BDNF蛋白的特征是高纯度(> 90%,SDS-PAGE)。该BDNF蛋白沿凝胶延伸至大约30 kDa分子量的带。
在大肠杆菌中表达重组人BDNF蛋白的过程需要由人类BDNF蛋白的129-247AA整合的重组DNA基因形成,该基因形成的是人类BDNF蛋白和N末端6xhis-Sumo-Sumo标记序列的表达载体,该表达载体是必不可少的DNA基因,该基因构成了dna基因,该基因构成了incorm incorm incorm inscrim inscorm inscorm inscrip以及用于克隆表达载体的转录和翻译的组件。分离和纯化后,获得了N端6xhis-Sumo标记的重组BDNF蛋白。该重组BDNF蛋白的特征是高纯度(> 90%,SDS-PAGE)。该BDNF蛋白沿凝胶延伸至大约30 kDa分子量的带。
背景信息细胞表面分子CD9是Transmbrane-4超家族的成员,与整联蛋白家族和其他膜蛋白相互作用,并被认为参与细胞迁移和粘附。CD9的表达增强了肌肉细胞之间的膜融合并促进某些细胞中的病毒感染(PMID:10459022)。通常用作间充质干细胞标记(PMID:18005405)。CD9抗原似乎是具有四个疏水结构域和一个N-糖基化位点的227个氨基酸分子(PMID:1840589)。该抗体检测到23-30 kDa的带,这可能是由于糖基化的差异(PMID:8701996)。