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crispr/cas9指示OSGA20OX2的诱变
摘要：在大米中，半弱SM是最需要的特征之一，因为它促进了更好的产量和耐药性。Here, semi-dwarf rice lines lacking any residual transgene-DNA and o ff -target e ff ects were generated through CRISPR / Cas9-guided mutagenesis of the OsGA20ox2 gene in a high yielding Basmati rice line, and the isobaric tags for relative and absolute quantification (iTRAQ) strategy was utilized to elucidate the proteomic changes in mutants.结果表明吉布林林（GA 1和GA 4）水平降低，植物高度（28.72％）和叶叶长度，而所有其他特征保持不变。OSGA20OX2表达得到了高度抑制，突变体表现出降低的细胞长度，宽度，并通过外源性GA 3处理恢复其植物高度。野生型和纯合突变系（GXU43_9）的比较蛋白质组学分别显示了588种蛋白质的水平，分别是273个上调和315个下调的水平。鉴定出的差异表达的蛋白质（DEP）主要富含碳代谢和固定，糖酵解 /糖糖异生，光合作用和氧化磷酸化途径。与生长调节因素（GRF2，GRF7，GRF9，GRF9，GRF11和GRF11）和GA（Q8RZ73，Q8RZ73，Q9AS97，Q69197，Q69VG1，Q69VG1，Q8LNJ6，Q8LNJ6，q8lnj6，q8lnj6，qy8lnj6，qy8lnj6，q55，在突变系中，脱离应激抗应激的蛋白5（ASR5）和脱落酸受体（PYL5）上调。我们将CRISPR / CAS9与蛋白质组学筛选整合为快速评估CRISPR实验结果的最可靠策略。
基于 CRISPR-Cas9 的毛霉菌诱变......
摘要：Lichtheimia corymbifera 被认为是最常见的毛霉菌之一。由于缺乏有效的基因操作工具，我们无法表征这种机会性致病真菌的致病机制和毒力因子。尽管此类技术已用于某些物种，但在毛霉目真菌中，进行定向诱变和构建稳定转化体仍然是一个巨大的挑战。在本研究中，应用无质粒 CRISPR-Cas9 系统对 L. corymbifera 进行定向基因破坏。所述方法基于 Cas9 酶引起的双链断裂的非同源末端连接修复。利用该方法，可以在乳清苷 5′-磷酸脱羧酶基因 (pyrG) 中诱导一到五个核苷酸长的短靶向缺失，从而构建尿嘧啶营养缺陷型菌株。这些菌株可作为未来基因操作研究中的受体菌株。据我们所知，这是这种临床相关真菌的首次基因改造。
基于 CRISPR-Cas9 的毛霉菌诱变......
摘要：Lichtheimia corymbifera 被认为是最常见的毛霉菌之一。缺乏有效的基因操作工具阻碍了对这种机会性致病真菌的致病机制和毒力因子的鉴定。尽管此类技术已在某些物种中得到描述，但在毛霉目真菌中，进行定向诱变和构建稳定的转化子仍然是一个巨大的挑战。在本研究中，应用无质粒的 CRISPR-Cas9 系统对 L. corymbifera 进行定向基因破坏。所述方法基于 Cas9 酶引起的双链断裂的非同源末端连接修复。利用该方法，可以在乳清苷 5'-磷酸脱羧酶基因 (pyrG) 中诱导一到五个核苷酸长的短靶向缺失，从而构建尿嘧啶营养缺陷型菌株。这些菌株可作为未来基因操作研究中的受体菌株。据我们所知，这是这种临床相关真菌的首次基因改造。
![高通量 CRISPR/Cas9 诱变简化玉米性状基因识别[OPEN]](/simg/2/2f10bf92fd3f26433701798d1c7b2db89ccc2423.webp)
高通量 CRISPR/Cas9 诱变简化玉米性状基因识别[OPEN]
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大麦脑膜炎黄杆菌脯氨酰寡肽酶和谷氨酰胺特异性内肽酶的定向诱变
小麦麸质蛋白是已知的乳糜泻病因。这些蛋白质中脯氨酸和谷氨酰胺残基的重复序列使其在胃肠道中具有极强的抗消化性。这些未消化的肽会引发易感个体的免疫反应，这可能是过敏反应或乳糜泻。麸质排除饮食是此类疾病的唯一获批疗法。最近，大麦中的谷氨酰胺特异性内切蛋白酶 (EP-B2) 和脑膜炎黄杆菌中的脯氨酰内切肽酶 (Fm-PEP) 的组合在小麦胚乳中表达时，在模拟胃肠道条件下被证明可以合理地解毒免疫原性麸质肽。尽管这些“麸质酶”很有用，但它们的应用受到限制，因为它们在高温下会变性，而大多数食品加工都需要高温。这些酶的变体来自嗜热生物，但由于其最佳活性在高于 37 ◦ C 的温度下存在，因此不能直接应用。不过，这些酶可以作为参考，指导中温来源的肽酶向热稳定性进化。因此，这里使用序列引导的位点饱和诱变方法在编码 Fm-PEP 和 EP-B2 的基因中引入突变。使用这种方法鉴定出能够在高达 90 ◦ C 的温度下存活的 Fm-PEP 的热稳定性变体和热稳定性高达 60 ◦ C 的 EP-B2 变体。然而，达到的热稳定性水平还不够；本研究提供了可以提高谷蛋白酶热稳定性的证据。并且这项初步研究为未来更详细的结构研究奠定了基础，以获得可以在 ∼ 100 ◦ C 温度下存活的 Fm-PEP 和 EP-B2 变体，从而可以将其包装在谷物中并将此类谷物用于食品工业。