图 4. 进行实时 PCR 反应,检测室温下储存长达 32 个月的唾液 DNA 中的 GAPDH 基因。在不同时间点(1 周、1 个月、4 个月、20 个月、32 个月)分离 DNA 并将其用作反应中的模板,绘制每个时间点的平均 Ct 值。唾液 DNA 的质量在 32 个月内没有变化。
所有离心步骤均在室温下执行。确保使用的离心管能够承受所需的离心力。用Norgen的血浆/血清细胞无循环的DNA纯化试剂盒提供的自旋柱被优化可与台式离心机一起使用,并且不适用于真空设备大多数标准的台式台式微型离心机将容纳Norgen的Micro和Mini Spin柱。离心诺根的自旋柱以比该过程中建议的高速速度可能影响DNA产量。以比该过程中建议的速度低的离心NORGEN的自旋柱不会影响DNA产量。但是,在较低速度下离心可能需要更长的时间才能通过旋转柱进行•清洁,一次性手套应始终戴上处理试剂,样品,移液器,一次性管等时,应始终戴上固定柱。建议经常更换手套以避免污染。确保所有溶液在使用前都处于室温下,并且没有形成沉淀物。如有必要,请加热解决方案并充分混合,直到解决方案再次变得清晰。通过将24毫升的96-100%乙醇(用户提供)加到包含浓缩溶液WN的瓶子中,准备溶液WN的工作浓度。这将给出42毫升的最终体积。瓶子上的标签具有一个可以检查的盒子,以表明已添加了乙醇。这将给出最终的128毫升。将水浴或加热块预热至60°C。通过将90 ml的96-100%乙醇(用户提供)加入含有浓缩洗涤溶液a的瓶子来准备清洗溶液A的工作浓度。瓶子上的标签具有一个可以检查的盒子,以表明已添加了乙醇确保样品未经过一个以上的冷冻周期,因为这可能会导致DNA降解。此套件适合于从肝素,EDTA或柠檬酸盐收集的血液中制备的新鲜或冷冻血清或血浆分离DNA。如果任何解决方案都不经过指定离心时间内的自旋柱,请再旋转1-2分钟,直到溶液完全通过列。不超过离心速度,因为这可能会影响DNA产量。冷冻血浆(从肝素,EDTA或柠檬酸酯管上收集的血液)或血清样品应在处理前在400 x g(〜2,000 rpm)下离心2分钟。仅处理清晰的上清液,因为直接处理冷冻样品,可能会遇到列堵塞。
图 1. 使用 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存管保存的血浆中含有大量 cf-DNA。将来自同一供体的血液样本抽入竞争对手的管或 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存管中,并在室温下保存 7 天。Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存管回收了 6.5 毫升血浆,而竞争对手的管回收了 3.5 毫升血浆。然后使用 Norgen 的血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化中型试剂盒 (Cat. 55600) 和 Norgen 的血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化大型试剂盒 (Cat. 55800) 从每个管中回收的整个血浆体积中分离 cf-DNA。使用安捷伦生物分析仪高灵敏度 DNA 芯片评估从两个样本中回收的 DNA 数量。从生物分析仪的痕迹可以看出,与从竞争对手的防腐管中回收的 cf-DNA 相比,Norgen 的防腐管产生了更多的 cf-DNA(蓝色峰)。
图 1. 使用 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存管保存的血浆中含有大量 cf-DNA。将来自同一供体的血液样本抽入竞争对手的管或 Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存管中,并在室温下保存 7 天。Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存管回收了 6.5 毫升血浆,而竞争对手的管回收了 3.5 毫升血浆。然后使用 Norgen 的血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化中型试剂盒 (Cat. 55600) 和 Norgen 的血浆/血清无细胞循环 DNA 纯化大型试剂盒 (Cat. 55800) 从每个管中回收的整个血浆体积中分离 cf-DNA。使用安捷伦生物分析仪高灵敏度 DNA 芯片评估从两个样本中回收的 DNA 数量。从生物分析仪的痕迹可以看出,与从竞争对手的防腐管中回收的 cf-DNA 相比,Norgen 的防腐管产生了更多的 cf-DNA(蓝色峰)。
图1。在室温下保存在Norgen的唾液DNA防腐剂中的DNA的稳定性超过2年。 唾液样品是从众多供体中收集的,并混合了,然后将等量的Norgen的唾液DNA防腐剂添加到唾液中。 然后将保存的唾液在室温下储存长达24个月。 唾液DNA随后在4个月,8个月,16个月和24个月中从0.5 mL保留的唾液样品使用NOR的唾液DNA分离试剂盒(Cat。) RU45400)。 进行视觉分析,在琼脂糖TAE凝胶上运行10 µL纯化的DNA。 可以看出,在Norgen的唾液DNA防腐剂中,将唾液样品存储24个月后,没有证据表明DNA降解24个月。 此外,在整个24个月内,DNA的大小保持在24 KB以上。 M:Norgen的Ultraranger 1 KB DNA梯子(Cat。 12100)。在室温下保存在Norgen的唾液DNA防腐剂中的DNA的稳定性超过2年。唾液样品是从众多供体中收集的,并混合了,然后将等量的Norgen的唾液DNA防腐剂添加到唾液中。然后将保存的唾液在室温下储存长达24个月。唾液DNA随后在4个月,8个月,16个月和24个月中从0.5 mL保留的唾液样品使用NOR的唾液DNA分离试剂盒(Cat。RU45400)。 进行视觉分析,在琼脂糖TAE凝胶上运行10 µL纯化的DNA。 可以看出,在Norgen的唾液DNA防腐剂中,将唾液样品存储24个月后,没有证据表明DNA降解24个月。 此外,在整个24个月内,DNA的大小保持在24 KB以上。 M:Norgen的Ultraranger 1 KB DNA梯子(Cat。 12100)。RU45400)。进行视觉分析,在琼脂糖TAE凝胶上运行10 µL纯化的DNA。可以看出,在Norgen的唾液DNA防腐剂中,将唾液样品存储24个月后,没有证据表明DNA降解24个月。此外,在整个24个月内,DNA的大小保持在24 KB以上。M:Norgen的Ultraranger 1 KB DNA梯子(Cat。12100)。
图 1. 在室温下保存在 Norgen 唾液 DNA 保存剂中超过 2 年的 DNA 稳定性。从众多捐赠者中收集唾液样本并混合,然后将等量的 Norgen 唾液 DNA 保存剂添加到唾液中。然后将保存的唾液在室温下保存长达 24 个月。随后在 4 个月、8 个月、16 个月和 24 个月时使用 Norgen 唾液 DNA 分离试剂盒 (Cat. RU45400) 从 0.5 mL 保存的唾液样本中分离唾液 DNA。为了进行目视分析,将 10 µL 纯化的 DNA 在琼脂糖 TAE 凝胶上运行。从中可以看出,唾液样本在 Norgen 唾液 DNA 保存剂中在室温下保存 24 个月后,没有 DNA 降解的迹象。此外,在整个 24 个月期间,DNA 的大小都保持在 24 kb 以上。M:Norgen 的 UltraRanger 1 Kb DNA Ladder(目录号 12100)。
预期用途 Norgen 的游离 DNA 和游离 RNA (cf-DNA/cf/RNA) 保存管是封闭的真空塑料管,用于收集和保存人类全血样本中的游离循环 DNA、游离循环 RNA 和循环肿瘤细胞 (CTC)。Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存剂是一种无甲醛保存剂,可稳定有核血细胞,从而防止细胞凋亡和基因组 DNA/RNA 释放到血浆中。这些管用于收集血液,以便使用 Norgen 的血浆/血清游离循环 DNA 纯化试剂盒、Norgen 的血浆/血清 RNA 纯化试剂盒或其他纯化方法(包括手动和自动方法)分离 cf-DNA 和 cf-RNA。纯化的 cf-DNA 和 cf-RNA 适用于任何下游分析检测,仅供研究使用。保存摘要
NORGEN的纯化技术纯化基于使用Norgen专有树脂作为分离矩阵的自旋色谱柱色谱法。该过程为头发样品提供了简单简便的线粒体DNA隔离方案。首先,将DTT,蛋白酶K和裂解添加剂A添加到发轴上,并在55°C下孵育30分钟。完全溶解了头发轴一旦通过离心去除任何未消化的头发。然后收集清洁上清液,并添加异丙醇和裂解缓冲液B。然后将裂解物加载到自旋柱上。Norgen的自旋柱以取决于离子浓度的方式结合核酸,因此只有DNA才能与柱结合,而蛋白质和其他污染物则在流通中除去或保留在树脂顶部。然后使用提供的洗涤溶液A洗涤结合的DNA,并使用洗脱缓冲液B洗脱纯化的DNA。纯化的mtDNA(以及基因组DNA如果使用毛根)不含所有抑制剂,可用于包括PCR和测序在内的敏感下游应用中。
图1。有效的宿主基因组DNA去除,而无需降低噬菌体DNA产量。 使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从四个富集的噬菌体培养物中分离总DNA。 在添加提供的裂解之前,进行了DNase I预处理。 布里液,将20单位的DNase I添加到1 ml富集的噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育20分钟。 DNAase I处理后,遵循该过程。 作为对照,使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从相同4个培养物的等分试样中分离DNA,而无需进行DNase I处理。 进行DNA分析,将10 µL的每50 µL洗脱加载到1x TAE琼脂糖凝胶上。 可以看出,噬菌体DNA被其外套蛋白安全地保护了DNase I治疗,而宿主基因组DNA则被DNase I有效降解。 因此,DNase I预处理导致最终噬菌体洗脱中的宿主GDNA污染较少,而不会影响总噬菌体DNA产量。 车道M是Norgen的Highranger 1 Kb DNA梯子(Cat。 11900)。有效的宿主基因组DNA去除,而无需降低噬菌体DNA产量。使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从四个富集的噬菌体培养物中分离总DNA。在添加提供的裂解之前,进行了DNase I预处理。布里液,将20单位的DNase I添加到1 ml富集的噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育20分钟。DNAase I处理后,遵循该过程。作为对照,使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从相同4个培养物的等分试样中分离DNA,而无需进行DNase I处理。进行DNA分析,将10 µL的每50 µL洗脱加载到1x TAE琼脂糖凝胶上。可以看出,噬菌体DNA被其外套蛋白安全地保护了DNase I治疗,而宿主基因组DNA则被DNase I有效降解。因此,DNase I预处理导致最终噬菌体洗脱中的宿主GDNA污染较少,而不会影响总噬菌体DNA产量。车道M是Norgen的Highranger 1 Kb DNA梯子(Cat。11900)。
图1。有效的宿主基因组DNA去除,而无需降低噬菌体DNA产量。 使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从四个富集的噬菌体培养物中分离总DNA。 在添加提供的裂解之前,进行了DNase I预处理。 布里液,将20单位的DNase I添加到1 ml富集的噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育20分钟。 DNAase I处理后,遵循该过程。 作为对照,使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从相同4个培养物的等分试样中分离DNA,而无需进行DNase I处理。 进行DNA分析,将10 µL的每50 µL洗脱加载到1x TAE琼脂糖凝胶上。 可以看出,噬菌体DNA被其外套蛋白安全地保护了DNase I治疗,而宿主基因组DNA则被DNase I有效降解。 因此,DNase I预处理导致最终噬菌体洗脱中的宿主GDNA污染较少,而不会影响总噬菌体DNA产量。 车道M是Norgen的Highranger 1 Kb DNA梯子(Cat。 11900)。有效的宿主基因组DNA去除,而无需降低噬菌体DNA产量。使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从四个富集的噬菌体培养物中分离总DNA。在添加提供的裂解之前,进行了DNase I预处理。布里液,将20单位的DNase I添加到1 ml富集的噬菌体培养物中,并将混合物在室温下孵育20分钟。DNAase I处理后,遵循该过程。作为对照,使用Norgen的噬菌体DNA分离试剂盒从相同4个培养物的等分试样中分离DNA,而无需进行DNase I处理。进行DNA分析,将10 µL的每50 µL洗脱加载到1x TAE琼脂糖凝胶上。可以看出,噬菌体DNA被其外套蛋白安全地保护了DNase I治疗,而宿主基因组DNA则被DNase I有效降解。因此,DNase I预处理导致最终噬菌体洗脱中的宿主GDNA污染较少,而不会影响总噬菌体DNA产量。车道M是Norgen的Highranger 1 Kb DNA梯子(Cat。11900)。