所有离心步骤均在室温下执行。确保使用的离心管能够承受所需的离心力。用Norgen的血浆/血清细胞无循环的DNA纯化试剂盒提供的自旋柱被优化可与台式离心机一起使用,并且不适用于真空设备大多数标准的台式台式微型离心机将容纳Norgen的Micro和Mini Spin柱。离心诺根的自旋柱以比该过程中建议的高速速度可能影响DNA产量。以比该过程中建议的速度低的离心NORGEN的自旋柱不会影响DNA产量。但是,在较低速度下离心可能需要更长的时间才能通过旋转柱进行•清洁,一次性手套应始终戴上处理试剂,样品,移液器,一次性管等时,应始终戴上固定柱。建议经常更换手套以避免污染。确保所有溶液在使用前都处于室温下,并且没有形成沉淀物。如有必要,请加热解决方案并充分混合,直到解决方案再次变得清晰。通过将24毫升的96-100%乙醇(用户提供)加到包含浓缩溶液WN的瓶子中,准备溶液WN的工作浓度。这将给出42毫升的最终体积。瓶子上的标签具有一个可以检查的盒子,以表明已添加了乙醇。这将给出最终的128毫升。将水浴或加热块预热至60°C。通过将90 ml的96-100%乙醇(用户提供)加入含有浓缩洗涤溶液a的瓶子来准备清洗溶液A的工作浓度。瓶子上的标签具有一个可以检查的盒子,以表明已添加了乙醇确保样品未经过一个以上的冷冻周期,因为这可能会导致DNA降解。此套件适合于从肝素,EDTA或柠檬酸盐收集的血液中制备的新鲜或冷冻血清或血浆分离DNA。如果任何解决方案都不经过指定离心时间内的自旋柱,请再旋转1-2分钟,直到溶液完全通过列。不超过离心速度,因为这可能会影响DNA产量。冷冻血浆(从肝素,EDTA或柠檬酸酯管上收集的血液)或血清样品应在处理前在400 x g(〜2,000 rpm)下离心2分钟。仅处理清晰的上清液,因为直接处理冷冻样品,可能会遇到列堵塞。
图 4. 进行实时 PCR 反应,检测室温下储存长达 32 个月的唾液 DNA 中的 GAPDH 基因。在不同时间点(1 周、1 个月、4 个月、20 个月、32 个月)分离 DNA 并将其用作反应中的模板,绘制每个时间点的平均 Ct 值。唾液 DNA 的质量在 32 个月内没有变化。