NORGEN的纯化技术纯化基于自旋色谱柱色谱法。噬菌体DNA优先纯化从其他细胞成分(例如蛋白质)中纯化,而无需使用苯酚,氯仿或氯化葡萄球菌。此过程的起始材料被阐明了噬菌体上清液,该噬菌体上清液已与液体培养物中的细菌碎片分离。最初,噬菌体颗粒通过提供的裂解缓冲液B通过热和化学裂解过程裂解(请参阅第4页的流程图)。异丙醇被添加到裂解物中,并将溶液加载到自旋柱上。Norgen的自旋柱以取决于离子浓度的方式结合核酸,因此只有DNA才能与柱结合,而大多数RNA和蛋白质在流潮中除去。然后用提供的洗涤溶液A洗涤结合的DNA,以去除剩余的杂质,并用洗脱缓冲液洗脱纯化的总DNA。纯化的总噬菌体DNA是最高的完整性,可用于许多下游应用。
NORGEN的纯化技术纯化基于自旋色谱柱色谱法。DNA优先从其他细胞成分(例如蛋白质)中纯化,而无需使用苯酚或氯仿。该过程涉及用液氮(或替代均质化设备)在砂浆中磨碎植物组织。裂解缓冲液L和RNase A,然后在65°C处进行短孵育,接下来,结合缓冲液I将添加到裂解物中,然后在冰上进行另一个短孵育。然后通过提供的过滤柱旋转裂解物,以清除任何碎屑。然后将乙醇添加到澄清的裂解物中,并将溶液加载到自旋柱上。Norgen的树脂以取决于离子浓度的方式结合核酸,因此只有DNA才能与色谱柱结合,而大多数RNA和蛋白质在流潮中除去。然后用提供的溶液WN洗涤结合的DNA并洗涤溶液A以去除剩余的杂质,并用洗脱缓冲液洗脱纯化的总DNA。纯化的DNA具有最高的完整性,可用于许多下游应用。
NORGEN的纯化技术纯化基于自旋色谱柱色谱法。优先从其他细胞成分(例如基因组DNA和RNA)中纯化质粒DNA。该过程涉及首先颗粒的隔夜细菌培养物具有质粒DNA(请参阅第3页的流程图)。然后,使用提供的重悬溶液AZ重悬细菌颗粒,并使用裂解缓冲液N进行细菌。然后添加缓冲液。然后添加缓冲液TN,从而导致溶液中存在的基因组DNA和蛋白质。然后通过离心阐明裂解物,以去除含有质粒DNA的裂解物中的沉淀蛋白和基因组DNA。然后将澄清的裂解物加载到自旋柱上。Norgen的柱以取决于离子浓度的方式结合DNA,因此,只有质粒DNA才能与柱结合,而大多数消化的RNA和蛋白质将在流动中除去或保留在柱床的顶部。然后用提供的洗涤溶液J洗涤结合的DNA,以去除剩余的杂质。最后,无内毒素纯化的质粒DNA用洗脱缓冲液洗脱。纯化的DNA是最高质量的,可用于许多下游应用,包括测序,克隆和转染。