对于CRISPR/CAS工作流程,核酸酶和相应GRNA的选择直接影响基因组编辑后的indel频率的计算。当前用于评估编辑效率的当前METH OD使用来自转染的细胞的合并GDNA的PCR扩增,然后是基于测序或基于测序的基于测序或基于不匹配的裂解的分析分析的变性和重新启动的indneal indneal indneal DNA(4)。为加快编辑效率的确定并避免昂贵的NG测序,“通过分解来跟踪Indels”(Tide)(5)和“ CRISPR编辑的推断”(ICE)方法(6)是开发用于使用sanger sequenc dna sequenceenc dna dna dna dna dna dna dna dna dna dna dna dna dna dna(ice)方法(ICE)方法(ICE)方法(ICE)。但是,要使这些方法可靠,分析的PCR产品必须具有高质量(例如,单个频带,没有底漆和DNTP)。在本文中,我们证明了通过Exo-CIP快速PCR清洁套件方法清理的扩增子质量匹配,该方法是通过使用ICE软件工具进行批处理分析的传统基于旋转柱的套件来实现的,从而启用了更快,更高的推出方法,以制备旋转后的样品,用于旋转后的样品。
必需的材料(不包括)1。纯化的人尿DNA:应根据制造商协议2.DNA保存解决方案3。荧光PCR仪器能够阅读FAM通道(494 nm最大吸收,518 nm最大发射),VIC通道(520 nm最大吸收,558 nm最大激发),ROX通道(580 nm最大吸收,最大吸收),623 nm最大兴奋)和CY5(640 nm nm最大吸收,640 nm最大吸收,682 nm)。4。Vortex Mixer 5。微输出式6。移液器7。无菌核酸酶的无动移液尖端(建议使用屏障尖端)和微型试管8。兼容PCR板9。与我们的技术支持团队联系以获取有关兼容性的问题:TechSupport@raybiotech.com样本要求1。所有人类尿液标本都应被视为潜在的感染性,并谨慎处理。在测试任何样本时,应采取措施根据风险评估来最大程度地降低实验室传播的风险。这些预防措施至少应包括熟练度和能力测试,适当的PPE,避免气溶胶以及使用有效的消毒剂(第四纪铵化合物和0.5%的漂白剂)。2。我们建议在微量离心机中在5000 g处离心1 ml尿液,在室温下10分钟,然后去除800 µL上清液。剩余的上清液和沉淀应用于DNA提取**。最终提取的DNA应在100 µL的DNase,无RNase无RNase水中洗脱。实时PCR程序需要每个反应的10 µL提取的DNA。3。提取的人尿DNA是该试剂盒的起始材料。应根据制造商方案将DNA与PCR分析设置分开纯化,并具有DNA保存溶液,以使细菌失活和保存DNA。**本手册中显示的数据是基于DNA提取的,使用Thermo Fisher Scientific的Magmax™病毒/病原体核酸分离试剂盒。一般考虑1。为防止PCR反应的污染,清洁和净化所有工作表面,离心机,移液器和其他具有10%漂白剂或DNAave®的设备,然后在每次测定之前为70%乙醇。
† 对于在六个标准 QIAcuity 通道(绿色、黄色、橙色、红色、深红色和远红色)中检测单个目标的多重反应,建议最终测定浓度为 0.8 µM 正向引物、0.8 µM 反向引物和 0.4 µM 探针。使用长斯托克斯位移染料时,需要不同的测定浓度。有关更多详细信息,请参阅 QIAcuity 高多重探针 PCR 试剂盒手册。
人类和动物的粪便污染严重影响环境水质,直接威胁人类和牲畜的健康。粪便污染会严重影响海洋捕捞或游泳等娱乐活动。1 人类和温血动物的粪便中含有病原体,是水传播疾病的主要来源。大多数水传播病原体可以寄居在人类和动物的粪便中。2 识别污染源对于有效的资源管理、补救和潜在环境风险评估至关重要。传统的病原体检测培养方法成本高、耗时、费力,并且由于需要长时间培养,不适合及时预防重大流行病的爆发。3 最近,表面等离子体共振 (SPR)、DNA 微阵列、酶联免疫吸附测定 (ELISA)、表面等离子体共振 (SPR)、实时
。cc-by-nc-nd 4.0国际许可证(未经同行评审证明)获得的是作者/资助者,他授予Biorxiv授予Biorxiv的许可,以永久显示预印本。这是该版本的版权持有人,该版本于2024年3月5日发布。 https://doi.org/10.1101/2024.03.02.583131 doi:Biorxiv Preprint
随着人们对食品安全、海鲜欺诈和非法、未报告和无管制 (IUU) 捕捞的担忧日益增加,提高海鲜的可追溯性和透明度已成为海鲜行业的首要任务。这引发了验证昆虫原料真实性的努力。CIIMAR 的新方法通过确认原料来自合法来源,确保了透明度和质量,并促进了可持续性。
Andrade,S。G。Caracterizaçãodecepas de trypanosoma cruzi cruzi Iseladas norecôncavoBaiano。 Revista de Patologia热带。 卷。 3,p。 65-121。 1974。 Andrade,S.G。; Magalhães,J.B。锥虫菌株的生物植物和扎伊米亚:与临床数据和实验病理学的相关性。 Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical。 卷。 30,p。 27-35。 1997。 Andrade,V。; Brodskyn,c。 Andrade,S.G。 同工酶模式与克鲁氏锥虫菌株的生物bahaviour之间的相关性。 皇家热带医学和卫生学会的交易。 卷。 76,p。 796-799。 1983。 Avila,I。I.等。 通过分析PCR的分析 - 放大微圆的可变区域序列,对来自南部和中部América的Cruzi菌群的精神分裂质分析。 分子和生化寄生虫学。 卷。 42,p.175 - 188。 1990。 Britto,C。等。 一种简单的方案,用于血液样本中存在于血样中的锥虫动力学DNA的物理裂解,以及在聚合酶链反应(PCR)中使用的ITSM-基于慢性Chagas疾病的诊断。 memóriasdo Instituto Oswaldo Cruz。 。 v。88,p。 171-172.1993。 Britto,C等。 聚合酶链链反应检测人类血液样本中锥虫的锥虫瘤作为诊断和治疗评估的工具。 寄生虫学。 卷。 110,p。 241-247.1995。 ______。 等。 卷。 卷。Andrade,S。G。Caracterizaçãodecepas de trypanosoma cruzi cruzi Iseladas norecôncavoBaiano。Revista de Patologia热带。卷。3,p。 65-121。1974。Andrade,S.G。; Magalhães,J.B。锥虫菌株的生物植物和扎伊米亚:与临床数据和实验病理学的相关性。 Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical。 卷。 30,p。 27-35。 1997。 Andrade,V。; Brodskyn,c。 Andrade,S.G。 同工酶模式与克鲁氏锥虫菌株的生物bahaviour之间的相关性。 皇家热带医学和卫生学会的交易。 卷。 76,p。 796-799。 1983。 Avila,I。I.等。 通过分析PCR的分析 - 放大微圆的可变区域序列,对来自南部和中部América的Cruzi菌群的精神分裂质分析。 分子和生化寄生虫学。 卷。 42,p.175 - 188。 1990。 Britto,C。等。 一种简单的方案,用于血液样本中存在于血样中的锥虫动力学DNA的物理裂解,以及在聚合酶链反应(PCR)中使用的ITSM-基于慢性Chagas疾病的诊断。 memóriasdo Instituto Oswaldo Cruz。 。 v。88,p。 171-172.1993。 Britto,C等。 聚合酶链链反应检测人类血液样本中锥虫的锥虫瘤作为诊断和治疗评估的工具。 寄生虫学。 卷。 110,p。 241-247.1995。 ______。 等。 卷。 卷。Andrade,S.G。; Magalhães,J.B。锥虫菌株的生物植物和扎伊米亚:与临床数据和实验病理学的相关性。Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical。卷。30,p。 27-35。1997。Andrade,V。; Brodskyn,c。 Andrade,S.G。 同工酶模式与克鲁氏锥虫菌株的生物bahaviour之间的相关性。 皇家热带医学和卫生学会的交易。 卷。 76,p。 796-799。 1983。 Avila,I。I.等。 通过分析PCR的分析 - 放大微圆的可变区域序列,对来自南部和中部América的Cruzi菌群的精神分裂质分析。 分子和生化寄生虫学。 卷。 42,p.175 - 188。 1990。 Britto,C。等。 一种简单的方案,用于血液样本中存在于血样中的锥虫动力学DNA的物理裂解,以及在聚合酶链反应(PCR)中使用的ITSM-基于慢性Chagas疾病的诊断。 memóriasdo Instituto Oswaldo Cruz。 。 v。88,p。 171-172.1993。 Britto,C等。 聚合酶链链反应检测人类血液样本中锥虫的锥虫瘤作为诊断和治疗评估的工具。 寄生虫学。 卷。 110,p。 241-247.1995。 ______。 等。 卷。 卷。Andrade,V。; Brodskyn,c。 Andrade,S.G。同工酶模式与克鲁氏锥虫菌株的生物bahaviour之间的相关性。皇家热带医学和卫生学会的交易。卷。76,p。 796-799。1983。Avila,I。I.等。通过分析PCR的分析 - 放大微圆的可变区域序列,对来自南部和中部América的Cruzi菌群的精神分裂质分析。分子和生化寄生虫学。卷。42,p.175 - 188。1990。Britto,C。等。一种简单的方案,用于血液样本中存在于血样中的锥虫动力学DNA的物理裂解,以及在聚合酶链反应(PCR)中使用的ITSM-基于慢性Chagas疾病的诊断。memóriasdo Instituto Oswaldo Cruz。。v。88,p。 171-172.1993。 Britto,C等。 聚合酶链链反应检测人类血液样本中锥虫的锥虫瘤作为诊断和治疗评估的工具。 寄生虫学。 卷。 110,p。 241-247.1995。 ______。 等。 卷。 卷。v。88,p。 171-172.1993。Britto,C等。聚合酶链链反应检测人类血液样本中锥虫的锥虫瘤作为诊断和治疗评估的工具。寄生虫学。卷。110,p。 241-247.1995。 ______。 等。 卷。 卷。110,p。 241-247.1995。______。等。卷。卷。聚合酶链反应检测:对慢性chagas病的诊断的新见解。memóriasdo Instituto Oswaldo Cruz。94,p。 305-306.1999。______。等。o。被Xenodiongensis和聚合酶链反应MemóriosDo Instituto Oswaldo Cruz揭示的经过治疗的chagasic患者的寄生虫持久性。v。96,2001。p。 1-4。 Clark,C。G.核糖增生:原生动物分类法的分子方法。 in:Lee,J.J。 &Soldo,A.T。 (ed。 ):原子学方面的协议。 Allen Press。 1992。 Clark,C.G。 ; Martin,D.S。 ; Diamond,L.S。 ruboprinting揭示的Anuran锥虫之间的系统发育关系。 真核微生物学杂志。 42,p。 92-96。 1999。 Lana,M。; Tafuri,W。L.锥虫Cruzi adoençade Chagas。 in:Neves,D。P。; Melo,A。L。; Genaro,A。&Linardi,P。M(编辑。 ):人类寄生虫; ed。 雅典。 2002。v。96,2001。p。 1-4。Clark,C。G.核糖增生:原生动物分类法的分子方法。in:Lee,J.J。 &Soldo,A.T。(ed。):原子学方面的协议。Allen Press。 1992。 Clark,C.G。 ; Martin,D.S。 ; Diamond,L.S。 ruboprinting揭示的Anuran锥虫之间的系统发育关系。 真核微生物学杂志。 42,p。 92-96。 1999。 Lana,M。; Tafuri,W。L.锥虫Cruzi adoençade Chagas。 in:Neves,D。P。; Melo,A。L。; Genaro,A。&Linardi,P。M(编辑。 ):人类寄生虫; ed。 雅典。 2002。Allen Press。1992。Clark,C.G。 ; Martin,D.S。 ; Diamond,L.S。 ruboprinting揭示的Anuran锥虫之间的系统发育关系。 真核微生物学杂志。 42,p。 92-96。 1999。 Lana,M。; Tafuri,W。L.锥虫Cruzi adoençade Chagas。 in:Neves,D。P。; Melo,A。L。; Genaro,A。&Linardi,P。M(编辑。 ):人类寄生虫; ed。 雅典。 2002。Clark,C.G。; Martin,D.S。; Diamond,L.S。ruboprinting揭示的Anuran锥虫之间的系统发育关系。真核微生物学杂志。42,p。 92-96。 1999。 Lana,M。; Tafuri,W。L.锥虫Cruzi adoençade Chagas。 in:Neves,D。P。; Melo,A。L。; Genaro,A。&Linardi,P。M(编辑。 ):人类寄生虫; ed。 雅典。 2002。42,p。 92-96。1999。Lana,M。; Tafuri,W。L.锥虫Cruzi adoençade Chagas。 in:Neves,D。P。; Melo,A。L。; Genaro,A。&Linardi,P。M(编辑。 ):人类寄生虫; ed。 雅典。 2002。Lana,M。; Tafuri,W。L.锥虫Cruzi adoençade Chagas。in:Neves,D。P。; Melo,A。L。; Genaro,A。&Linardi,P。M(编辑。):人类寄生虫; ed。雅典。2002。
A01 Mm.235137 NM_007926 Aimp1 氨酰 tRNA 合成酶复合物相互作用多功能蛋白 1 A02 Mm.103205 NM_007553 Bmp2 骨形态发生蛋白 2 A03 Mm.1283 NM_011329 Ccl1 趋化因子(CC 基序)配体 1 A04 Mm.4686 NM_011330 Ccl11 趋化因子(CC 基序)配体 11 A05 Mm.867 NM_011331 Ccl12 趋化因子(CC 基序)配体 12 A06 Mm.41988 NM_011332 Ccl17 趋化因子(CC 基序)配体 17 A07 Mm.424740 NM_011888 Ccl19 趋化因子(CC 基序)配体 19 A08 Mm.290320 NM_011333 Ccl2 趋化因子(CC 基序)配体 2 A09 Mm.116739 NM_016960 Ccl20 趋化因子(CC 基序)配体 20 A10 Mm.12895 NM_009137 Ccl22 趋化因子(CC 基序)配体 22 A11 Mm.31505 NM_019577 Ccl24 趋化因子(CC 基序)配体 24 A12 Mm.1282 NM_011337 Ccl3 趋化因子(CC 基序)配体 3 B01 Mm.244263 NM_013652 Ccl4 趋化因子(CC 基序)配体 4 B02 Mm.284248 NM_013653 Ccl5 趋化因子(CC 基序)配体 5 B03 Mm.137 NM_009139 Ccl6 趋化因子(CC 基序)配体 6 B04 Mm.341574 NM_013654 Ccl7 趋化因子(CC 基序)配体 7 B05 Mm.42029 NM_021443 Ccl8 趋化因子(CC 基序)配体 8 B06 Mm.416125 NM_011338 Ccl9 趋化因子(CC 基序)配体 9 B07 Mm.274927 NM_009912 Ccr1 趋化因子(CC 基序) 受体 1 B08 Mm.8021 NM_007721 Ccr10 趋化因子 (CC 基序) 受体 10 B09 Mm.6272 NM_009915 Ccr2 趋化因子 (CC 基序) 受体 2 B10 Mm.57050 NM_009914 Ccr3 趋化因子 (CC 基序) 受体 3 B11 Mm.1337 NM_009916 Ccr4 趋化因子 (CC 基序) 受体 4 B12 Mm.14302 NM_009917 Ccr5 趋化因子 (CC 基序) 受体 5 C01 Mm.8007 NM_009835 Ccr6 趋化因子 (CC 基序) 受体 6 C02 Mm.442098 NM_007720 Ccr8 趋化因子(CC 基序)受体 8 C03 Mm.4861 NM_011616 Cd40lg CD40 配体 C04 Mm.795 NM_007778 Csf1 集落刺激因子 1(巨噬细胞) C05 Mm.4922 NM_009969 Csf2 集落刺激因子 2(粒细胞-巨噬细胞) C06 Mm.1238 NM_009971 Csf3 集落刺激因子 3(粒细胞) C07 Mm.103711 NM_009142 Cx3cl1 趋化因子(C-X3-C 基序)配体 1 C08 Mm.21013 NM_008176 Cxcl1 趋化因子(CXC 基序)配体 1 C09 Mm.877 NM_021274 Cxcl10 趋化因子(CXC 基序)配体 10 C10 Mm.131723 NM_019494 Cxcl11 趋化因子(CXC 基序)配体 11 C11 Mm.303231 NM_021704 Cxcl12 趋化因子(CXC 基序)配体 12 C12 Mm.10116 NM_018866 Cxcl13 趋化因子(CXC 基序)配体 13 D01 Mm.64326 NM_011339 Cxcl15 趋化因子(CXC 基序)配体 15 D02 Mm.4660 NM_009141 Cxcl5 趋化因子(CXC 基序)配体 5 D03 Mm.766 NM_008599 Cxcl9 趋化因子(CXC 基序)配体 9 D04 Mm.234466 NM_009909 Cxcr2 趋化因子(CXC 基序)受体 2 D05 Mm.12876 NM_009910 Cxcr3 趋化因子(CXC 基序)受体 3 D06 Mm.6246 NM_007551 Cxcr5 趋化因子(CXC 基序)受体 5 D07 Mm.3355 NM_010177 Fasl Fas 配体(TNF 超家族,成员 6) D08 Mm.240327 NM_008337 Ifng 干扰素伽马 D09 Mm.379327 NM_008348 Il10ra 白细胞介素10 受体,α