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使用Cas9核糖核蛋白的基因组编辑对于在培养的人胶质母细胞瘤细胞系中引入PDGFRA变体有效
摘要：在临床癌症病例中，使用基于下一代测序的癌症基因小组分析在临床癌症病例中检测到了许多不确定意义（VU）的变体。阐明VUS的一种策略是使用基因组编辑具有靶向基因变异的培养癌细胞系的功能分析。基因组编辑是在培养的癌细胞系中创建所需基因改变的强大工具。然而，基因组编辑的效率在感兴趣的细胞线之间有很大变化。我们进行了比较研究，以确定人胶质母细胞瘤（GBM）细胞系中血小板衍生生长因子受体α（PDGFRA）变体的最佳编辑条件。在监测PDGFRA的拷贝数和PDGFRα蛋白的表达水平后，选择了四个GBM细胞系（U-251 mg，KNS-42，SF126和YKG-1细胞）。要比较这些GBM细胞系中的编辑效率，定期插入的簇的模式是定期间隔短的短腔重复（CRISPR）相关蛋白9（CAS9）递送（质粒与核糖核蛋白（RNP）），转移方法（Lipoffection vs. Electortoration and Electolation），以及有用的，有用。在此，我们证明了用单靶RNA（Cas9 RNP复合物）将CAS9转移的转移可以充分地编辑目标核苷酸取代，而不论细胞分类如何。作为CAS9 RNP复杂方法比CAS9质粒唇彩方法显示出更高的编辑效率，因此在我们的实验条件下，它是人类GBM细胞系中单核苷酸编辑的最佳方法。
协议 FORMBP-PDGFB 小鼠基因分型
72 ˚C，10 分钟 4 ˚C， PCR 混合物 10 x PCR 缓冲液 II (Life technologies) 2.0 l MgCl 2 (25 mM) 1.2 l dNTP 混合物 (每种核苷酸 25 mM) 0.16 l Cre FW (100 M) 0.1 l Cre REV (100 M) 0.1 l AmpliTaq Gold (5 U/ l) 0.13 l DNA 模板 ( 0.5 g 尾部 DNA) 1.0 l H 2 O 15.31 l 20 l PCR 后分析 1.5% 琼脂糖凝胶。预期模式为 Tg:250bp
使用多韦替尼靶向抑制 FGFR/VEGFR/PDGFR 可增强纳布型紫杉醇在临床前胃癌模型中的作用
摘要 胃腺癌 (GAC) 的标准化疗方案疗效有限且毒性较大。在先前的 GAC 临床前研究中，白蛋白结合型紫杉醇已显示出良好的抗肿瘤作用。多韦替尼抑制受体酪氨酸激酶家族成员，包括 FGFR、VEGFR 和 PDGFR，并在包括 GAC 在内的许多实体瘤中表现出抗肿瘤作用。基于白蛋白结合型紫杉醇的抗有丝分裂、抗基质和 EPR 作用，我们研究了多韦替尼在多种 GAC 临床前模型中对白蛋白结合型紫杉醇反应的增强作用。在 MKN-45 皮下异种移植中，白蛋白结合型紫杉醇和多韦替尼对肿瘤生长的抑制率分别为 75% 和 76%。多韦替尼加白蛋白结合型紫杉醇对肿瘤生长有附加抑制作用，导致肿瘤消退（恢复至原始值的 85%）。与对照组（23 天）相比，多韦替尼单药治疗仅使动物存活率（25 天）略有改善，而白蛋白结合型紫杉醇单药治疗或多韦替尼加白蛋白结合型紫杉醇联合治疗分别使动物寿命显著延长 83%（42 天）和 187%（66 天）。皮下肿瘤的 IHC 分析显示，多韦替尼降低了肿瘤细胞增殖和肿瘤血管。体外研究表明，多韦替尼和白蛋白结合型紫杉醇单独使用可降低肿瘤细胞增殖，联合治疗可产生叠加效应。 MKN-45 和 KATO-III 细胞的免疫印迹分析显示，多韦替尼降低了磷酸化 FGFR、磷酸化 AKT、磷酸化 ERK、磷酸化 p70S6K、磷酸化 4EBP1、Bcl-2，并增加了裂解 PARP-1、裂解 caspase-3、p27、Bax、Bim，联合治疗具有附加作用。这些结果表明，FGFR/VEGFR/PDGFR 抑制剂多韦替尼有可能增强白蛋白结合型紫杉醇的抗肿瘤作用，这对临床 GAC 治疗的发展具有重要意义。
对伊马替尼耐药的 KIT/PDGFRA 野生型胃肠道间质瘤的 ctDNA 中发现的新型有害 TP53 体细胞突变的克隆选择
晚期胃肠道间质瘤 (GIST) 的一线治疗标准是伊马替尼，每日以标准剂量给药，直至肿瘤进展。伊马替尼耐药性通常是通过肿瘤 DNA 中基因突变的克隆选择而发生的，增加伊马替尼剂量已被证明可以有效克服伊马替尼耐药性。野生型 GIST 不显示 KIT 或血小板衍生生长因子受体 α (PDGFRA) 突变，通常对伊马替尼不敏感，并且在治疗过程中往往会迅速复发。我们在此报告一名 53 岁男性胃 GIST 患者的病例，该患者主要对伊马替尼没有反应，尽管增加了伊马替尼剂量，但仍导致患者死亡。通过使用深度下一代测序条形码感知方法，我们分析了患者 cfDNA 中一组可操作的癌症相关基因，以研究导致伊马替尼耐药的体细胞变化。我们在两个系列循环肿瘤 DNA (ctDNA) 样本中发现，位于剪接受体位点并导致蛋白质功能丧失的从未描述过的 TP53 突变 (c.560-7_560-2delCTCTTAinsT) 的等位基因频率急剧增加。通过数字液滴 PCR 在原发性肿瘤中以亚克隆频率 (0.1%) 回顾性地鉴定了相同的 TP53 突变。在转移性肝病变中检测到的突变等位基因频率非常高 (99%)，表明在肿瘤进展过程中突变的快速克隆选择。稳态下的伊马替尼血浆浓度高于文献报道的最低有效浓度阈值 760 ng/ml。计算机模拟预测新生 TP53 (c.560-7_560-2delCTCTTAinsT) 突变与异常 RNA 剪接和侵袭性表型有关，这可能导致尽管使用了
根据 HPV16 状态评估小分子酪氨酸激酶抑制剂对鳞状细胞癌中 PDGF-AA/BB 和 PDGFRα/β 表达的影响
摘要。背景：尽管对新的治疗方案进行了广泛的研究，但头颈部鳞状细胞癌的预后仍然很差。血小板衍生生长因子 (PDGF) 在 HNSCC 中上调，手术后表达水平降低，表明其在肿瘤发展中发挥作用。HPV 对 PDGF/PDGF 受体 (PDGFR) 通路的影响仍不清楚。在本研究中，我们使用具有不同人乳头瘤病毒 16 (HPV16) 状态的鳞状癌细胞系研究了小分子酪氨酸激酶抑制剂 (TKI) 对体外 PDGF 及其受体表达的影响。材料和方法：使用两种人类 HPV16 阴性细胞系 (UMSCC- 11A/-14C) 和一种 HPV16 阳性细胞系 (CERV196)。将肿瘤细胞与 20 μmol/l 的 TKI 尼洛替尼、达沙替尼、阿法替尼、吉非替尼和厄洛替尼一起孵育 24-96 小时。通过增殖试验评估细胞增殖，通过夹心酶联免疫吸附试验评估 PDGF-AA 和 BB 以及 PDGFRα 和 -β 的蛋白质浓度。为了进行统计分析，将结果与未经处理的阴性对照进行比较。结果：在三种测试细胞系中均检测到 PDGF-AA/BB 和 PDGFRα/-β。添加 TKI 导致不同时间点和细胞系的 PDGF/PDGFR 显著（p<0.05）降低。PDGF-AA 的表达效果最强，它始终
评估用于机械经验路面设计指南 (MEPDG) 校准和其他路面分析的 LTPP 气候数据
15. 补充说明 合同官员代表 (COR) 是 Larry Wiser。 16. 摘要 需要改进长期路面性能 (LTPP) 计划的气候数据，以支持当前和未来关于气候对路面材料、设计和性能的影响的研究。机械经验路面设计指南 (MEPDG) 的校准和增强只是这些新兴需求的一个例子。一种新兴的气候数据源，现代时代回顾性分析研究和应用 (MERRA)，由美国国家航空航天局 (NASA) 为其内部建模需求而开发，从 1979 年开始在相对细粒度的均匀网格上提供连续的每小时天气数据。MERRA 基于再分析模型，该模型将计算的模型场（例如大气温度）与在空间和时间上不规则分布的地面、海洋、大气和卫星观测相结合。 MERRA 数据的时间分辨率为每小时，空间分辨率为纬度 0.5 度 x 经度 0.67 度（中纬度约为 31.1 x 37.30 英里），覆盖全球。MERRA 数据与最佳地面观测数据进行了比较，无论是统计上还是对路面性能的影响方面，都与使用 MEPDG 预测的结果进行了比较。这些分析包括对 MEPDG 性能预测对基础变化的敏感性进行系统定量评估
GSC Sentinel-2 PDGS OCD - ESA - 发射
由/由 Sentinel-2 PDGS 项目组准备 参考/参考 GMES-GSEG-EOPG-TN-09-0008 期/版本 1 修订/修订 2（草案） 发行日期/编辑日期 2010 年 7 月 25 日status/状态草稿文档类型/文档类型TN分发/分发
2009 专业发展指南 (PDG) - AFMentor
空军总军士长办公室 1670 空军五角大楼 华盛顿特区 20330-1670 飞行员们，我们仍在进行一场史诗般的斗争——全球反恐战争。这是一场漫长的战争，而且可能会持续更长时间。此时此刻，美国飞行员正在世界各地的热点地区作战。飞行员继续与敌人作战，他们的目标就是摧毁美国、它的人民、利益和理想。我们不会允许这种情况发生。我们必须继续与敌人作战，不让他们靠近我们的街道和家门口，不让他们靠近我们的孩子和孙辈。在打击这种威胁我们生活方式的同时，我们的空军仍致力于照顾飞行员及其家人。我们在维持高质量生活标准的承诺与对老化的空中、太空和网络空间资产进行资本重组和现代化的现实需求之间取得平衡。应对这些挑战需要我们培养出组织最完善、训练有素、装备最精良、受过良好教育的飞行员。本专业发展指南是充分发挥飞行员潜力的优秀资源。本指南包含对领导力概念和应用、理论、历史、标准、习俗和许多其他主题的深入了解，可帮助您成为当今的重要领导者，同时为明天的责任做好准备。本指南的内容旨在为所有飞行员（现役、预备役、警卫队）提供专业发展，当然，也是军官的绝佳指南。我鼓励您将这些信息作为一个全面的工具来发展自己、您的同事以及那些将您视为领导者的人。本指南不再仅用于晋升考试准备，而是作为专业军事知识的基石。当入伍晋升考试的时候，飞行员应该复习，而不是第一次学习这些信息。我鼓励你制定一个适合你的学习计划并坚持下去。你的承诺和奉献精神将在考试当天和你的日常职业生涯中得到回报。最重要的是，永远不要忘记成为一名美国飞行员意味着什么。你是自由的守护者，是一名战士，这个国家依靠你尽最大努力保卫它。RODNEY J. MCKINLEY 空军首席军士长
